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植物NR活力测定——体内法(活体法)目的:掌握体内法测定植物组织中的硝酸还原酶原理和方法,明确诱导酶含义。实验原理:植物细胞呼吸代谢NO3-NO3-NO2-NADH2
NADNO2-外界溶液测定原理:NO2-+磺胺+α–萘基乙烯二胺红色化合物540nm最大吸收峰测定OD先加!后加!材料:在20℃蒸馏水培养一周小麦苗,实验前一天分两组,一组加KNO3,一组加0.5mMCaCl2,在白天置光照下处理。操作步骤:取各组苗地上部约0.5g左右,切成合适长度(1cm左右),放入50mL注射器中,加酶促反应液10ml,抽气直到材料完全下沉(一只手戴上手套,用戴手套的食指封住注射器头,另一只手反复推拉抽气减压,将叶片中的空气赶尽,直到材料完全下沉),置恒温箱30℃20min,取出后将反应液注射入烧杯中。取4ml反应过的液体,加磺胺溶液2ml+萘基乙烯二胺溶液2ml,室温放置5min后测540nmOD.试剂空白:4ml酶促反应液+磺胺溶液2ml+萘基乙烯二胺溶液2ml室温放置5min后,用于比色计校零.制作NO2-标准曲线(已事先制作完成)结果计算:NR活力(NO2-生成nmol/g鲜重.h)=根据OD值从标准曲线上查得的NO2-(nmol)×3×10/4/?结果分析和讨论:1、比较KNO3诱导和加NH4Cl的NR活力大小,诱导时如用NaNO3替代KNO3结果会如何,为什么?如不进行光照,结果会怎么样,为什么?2、亚硝酸是过多施
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