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四氮唑比色法四氮唑比色法四氮唑盐的种类四氮唑盐的种类有两种：一种为2，3，5-三苯基氯化四氮唑（缩写为TTC），其还原产物为不溶于水的深红色三苯甲䐶，λmax在480~490nm，也称红四氮唑（缩写为RT）。另一种为3，3'-二甲氧苯基双-4，4'-（3，5-二苯基）氯化四氮唑简称蓝四氮唑（缩写BT），其还原产物为暗蓝色的双甲䐶，λmax在525nm左右。四氮唑比色法两种四氮唑盐的结构TTCBT四氮唑比色法常用的四氮唑盐四氮唑盐简称还原产物λmax（nm）显色灵敏度氯化三苯四氮唑TTC深红色480῀490较低，空白吸收小蓝四氮唑BF暗蓝色525较高，但空白吸收大常用的四氮唑盐四氮唑比色法原理皮质激素C-17上的α-醇酮基（-CO-CH2OH）具有还原性，在强碱性溶液中能将四氮唑盐定量的还原为有色的化合物。皮质激素C-17上的α-醇酮基失去两个电子氧化为20-酮-21醛基，生成的颜色随所用试剂和条件的不同而定，多为红色或蓝色，在一定的波长处有最大吸收，因此可以作比色测定。四氮唑比色法原理三氯四氮唑盐得到两个电子，开环形成红色三苯甲䐶。

甲䐶（红色）

三氯四氮唑盐精密称取醋酸泼尼松龙对照品20mg，置100mL容量瓶中，加无水乙醇振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀即可。四氮唑比色法测定01对照品溶液的制备精密称取供试品4g（约相当于醋酸泼尼松龙20mg），置烧杯中，加无水乙醇约30mL，置水浴上加热，充分搅拌，使醋酸泼尼松龙溶解，在置冰浴中放冷后，过滤，滤液滤入100mL容量瓶中，同法提取三次，滤液并入容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。四氮唑比色法测定02供试品溶液的制备精密量取对照品溶液及供试品溶液各1mL，分别置于干燥具塞试管中，各精密加无水乙醇9mL与氯化三苯四氮唑试液2mL，摇匀，再精密加氢氧化四甲基铵试液1mL，摇匀，在25℃暗处放置40῀45min，在485nm的波长处分别测定吸光度。四氮唑比色法测定02测定四氮唑比色法影响因素结构的影响：C21-羟基游离>C21-羟基酯化。01溶剂和水分的影响：95%的乙醇,含水量过大会使呈色速度减慢。02温度和时间的影响：在25℃暗处反应40~45分钟。03碱的影响：氢氧化四甲基铵。04空气中氧与光线的影响：反应及其产物对光及氧敏感,避光，深色瓶。05干扰物影响：测定油膏、冷霜等制剂时必须先分离。06小结01四氮唑盐的

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