(高清版)GBT 40977-2021 家用洗衣机 降低微生物污染测试方法

家用洗衣机降低微生物污染测试方法国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会I 1 1 1 1 2 2 25.1试验条件 25.2材料和试剂 2 6 76.1试验原理 7 86.3试验微生物和含菌试验样块的准备 86.4主试验 96.5有效性 7评价 7.1对数减少值 7.2交叉污染 8试验报告 附录A(资料性)内部研发使用危险等级1级的微生物测试家用洗衣机中微生物的减少 附录B(资料性)材料和供应商信息 图A.1系列稀释液的制备过程 表1胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)成分 3表2沙氏葡萄糖琼脂(含氯霉素)的成分 3表3溴棕三甲铵琼脂/溴化十六烷基三甲铵琼脂的成分 4表4Baird-parker琼脂的成分 4表5麦芽浸粉琼脂(MEA)的成分 4 5表7稀释液的成分 5ⅡGB/T40977—2021表8中和剂的成分 表9温度传感器的具体要求 表A.1沙氏葡萄糖琼脂的成分 Ⅲ本文件修改采用IECPAS62958:2015《家用洗本文件与IECPAS62958:2015的技术性差异及其原因如下：-—删除了国际标准第2章中EN1276、EN1650和EN12353三个规范性引用文件，因相关技术1本文件不涉及安全要求，也不包含IEC60456:2010中要求的洗衣机相关性能或者对织物的影2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不ISO2267表面活性剂洗涤效果的评价未污染棉对照布的制备和使用方法(Surfaceactiveagents—Evaluationofcertaineffectsoflaundering—MethodsofpreparationanduseofunsoiledcottonMethodsformeasuringtheperformance)2N₀:试验前2个阳性对照微生物数量的平均值(CFU/块)N:试验后5个含菌试验样块微生物数量的平均值(CFU/块)4要求3所有的培养基和溶液都应是微生物用级别，使用前应使用合适的方法进行胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)的成分见表1。酪蛋白胨(胰酶消化物)Caseinpeptone(pancreaticdigest)大豆蛋白胨(木瓜酶消化物)Soypeptone(papaicdigest)氯化钠Sodiumchloride沙氏葡萄糖琼脂(含氯霉素)的成分见表2。酪蛋白胰酶消化物Pancreaticdiges动物组织的胃消化物Pepticdig氯霉素Chloramphenicol溴棕三甲铵琼脂/溴化十六烷基三甲铵琼脂的4明胶胰酶水解物Pancreaticdigestofgelat氯化镁Magnesiumchloride丙三醇Glycerine西曲溴铵Cetrimide5.2.2.1.4Baird-parker琼脂Baird-parker琼脂的成分见表4。酪蛋白胨(胰酶消化)Caseinpeptone(pancreaticdigest)酵母膏Yeastextract氯化锂Lithiumchloride丙酮酸钠Sodiumpyruvate麦芽浸粉琼脂(MEA)的成分见表5。麦芽提取物Maltextract大豆蛋白胨(用大豆中的木瓜蛋白酶消化)Soy-peptone,5胰蛋白胨大豆肉汤(TSB)的成分见表6。胰蛋白胨，酵素消化的酪蛋白Tryptone,pancreaticdigesto大豆蛋白胨，木瓜蛋白酶消化的大豆粉Soypeptone,氯化钠Sodiumchloride磷酸氢二钾Dipotassiumhygrogenp稀释液的成分见表7。胰蛋白胨，酵素消化的酪蛋白Tryptone,pancreaticdigesto氯化钠Sodiumchloride吐温80Polysorbate80一种宜采用的中和剂的成分见表8。吐温80Polysorbate80组氨酸L-histidine硫代硫酸钠Natriumthiosulohate6a)运行待测程序3次。灭菌锅应能对设备及相关用品在121℃~124℃条件下进行至少15min或者134℃~137℃条件7离心机应能在使用50mL离心管室温条件下提供2000g的相对离心力。基本负载应包含IEC60456:2010中列出的棉质基本负载。预处理的要求和所需质量的负载含有基本负载使用次数应不超过80次。不要求符合IEC60456:2010附录J的要求。理10min,干燥后保存在适宜条件下避免再次污传感器应符合表9中的要求。温度范围0℃~100℃≤0.5℃(覆盖整个测量范围)反应时间TC(10%～90%)——流动空气(2m/s)注：TC(10%～90%)是传感器达到其最终值的10%和90%时所需要的时间。反应TC63%的值。63%的图是传感器达到其最终值63%所需要的时间。对于一个给定的传感器，TC(10%~90%)和TC63%的值基本上在一个数量级。用水量测试设备应符合IEC60456:2010中5.5的要求。6试验8如果样机没有上述程序，应直接在洗衣机中加入不少于50L的，温度不低于90℃的水，运行2个之后应运行2个冷水漂洗周期以冷却洗衣机。保藏菌种应在MEA平板上至少划线传代2次，获得白色念珠菌的工作培养物。如果在某些特定时间里不能制备二代培养物，且培养物在培养箱里培养时间没超过72h,可以用b)使用稀释液调整菌悬液浓度在1.5×10⁸CFU/mL～5.0×10⁸CFU/mL,通过适当的方式预估c)为了方便计数，试验用菌悬液应用稀释液稀释至10-⁶和10-7稀释度。使用倾注平板法时，将1mL样品加入培养皿中，在培养皿中加入融化冷却至(45±1)℃9如果在某些特定时间里不能制备二代培养物，假如培养物在培养箱里培养时间没超过48h,可以b)使用稀释液调整菌悬液浓度在1.5×10⁹CFU/mL～5.0×10⁹CFU/mL(见5.2c)为了方便计算，试验用菌悬液应用稀释液稀释至10-7和10-⁸稀释度。使用倾注平板法时，将1mL样品加入培养皿中，在培养皿中加入融化冷却至(45±1)℃每个菌种每次试验使用5个微生物载体。微生物载体应在菌悬液中放置20min～30min,然后用镊子转移至开盖培养皿中，置于培养箱中每个接种的载体用无菌镊子分别转移至袋子中，每种微生物的5个载体应放置在5个棉袋中。每个测试程序至少进行3次试验。●试验日期；●用电量；(资料性)本试验方法允许使用危险等级1级的微生物用于预评估或者内部研发。虽然本方法采用的危险等级1级的微生物不是病原菌，相关操作还是需要受过无菌操作专业培训允许危险等级1级的微生物有少量意外的溢出或者丢弃，但试验室宜将琼脂平板和缓冲液等高压A.3材料和试剂●荧光假单胞菌(ATCC17397/DSM50091);●阿尔莱特葡萄球菌(ATCC43957/DSM20672);A.3.3.1胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)酪蛋白胰酶消化物Pancreaticdiges动物组织的胃消化物Pepticdig一水合葡萄糖DextrosemonohydrateA.3.3.3沙氏葡萄糖琼脂(含氯霉素)A.3.3.7哥伦比亚CAN琼脂的成分哥伦比亚CAN琼脂的成分见表A.2。表A.2哥伦比亚CAN琼脂的成分胰酶消化的酪蛋白Pancreaticdigestof胃蛋白酶消化的动物组织Pepticdigestofanimaltis酵母富集蛋白胨Yeastentiche脱纤维羊血DefibrinatedsheA.5试验A.5.3.1培养物荧光假单胞菌和阿尔莱特葡萄球菌工作培养物的制备按照6.3.1.3中恶臭假单胞菌和金黄色葡萄每个菌种每次试验使用5个微生物载体。微生物载体在菌悬液中放置20min～30min,然后用镊子转移至开盖培养皿中，置于培养箱中至每个接种的载体用无菌镊子分别转移至袋子中，每种微生物的5个载体应放置在5个棉袋中。菌试验样块应用无菌镊子分别转移至5个棉布袋中。A.5.4主试验为了准备系列梯度稀释(图A.1),需要使用无菌枪头。1mL含菌试验样块悬液加入9mL中和剂释至V-5,每个稀释度中取0.1mL用涂布棒在平板上旋转涂布。细菌在大豆胰蛋白胨琼脂(A.3.3.1)酿酒酵母在(30±1)℃条件下，荧光假单胞菌和阿尔莱特葡萄球菌在(36±1)℃条件下培养1d~y0微生物计数应选择合适的合适的稀释度，每个平板上的菌落总数在15～300之间的可用于进一步A.5.5.1试验前微生物数量N₀样块上微生物数量的计数按照6.4.2进行。两个含菌试验样块的算术平均值(log10CFU/含菌试验样(±1log10CFU/含菌试验样块)的条件下，N。才是有效的。按照A.5.4.2中的方法测定前面无菌载体上的微生物数量。不同的微生物在相应的选择性培养基平板计数/含菌试验样块=(平板1的计数+平板2的计数)/2每种微生物的对数减少值=log(N₀/N)N——试验后5个含菌