血凝实验影响因素

血凝检测的影响因素18/07/2024

首先，我们必须认识到，血栓与止血试验结果错误的发生大多来自分析前，因此保证止凝血试验标本的质量对实验结果准确性的保证非常重要。

无论是用于出血与血栓性疾病的筛查和实验诊断，血栓与止血试验的错误可影响患者的诊断和治疗。

（一）患者状态的影响1、年龄：以年龄不同所确定的参考范围解释新生儿和婴儿的止凝血试验结果非常重要，有很多学者报道了年龄与性别对血小板功能和凝血活性的影响。2、ABO血型：O型血患者较其他血型患者血浆vWF和因子Ⅷ活性低。3、季节变化：清晨血小板最易激活，心肌梗死的发病率最高；寒冷季节，血凝活性增加，使心肌梗死和猝死的发病率增加。4、生活习惯：吸烟可使血浆纤维蛋白原、vWF和其他凝血因子水平增加，并可使凝血酶生成及血小板激活增加；红葡萄酒有抗氧化和抗血栓的作用，中度酒（乙醇）的饮用，可抑制血小板的反应性。5、药物：阿司匹林、各种抗凝药、非类固醇抗炎药，激素替代疗法药物、避孕药等。6、身体状态，疾病：月经期、妊娠期、贫血和红细胞增多症等。（二）、饮食对检验结果的影响

多数检验尤其血液化学测定,采血前应禁食8h～12h。因脂肪食物被吸收后,可能形成脂血造成光学干扰,同时食物成分也可改变血液成分,影响测定结果的准确性。6（三）采血的影响1、患者在采血前应处于静息状态或抽血前有15-30分钟的休息。剧烈活动可激活血小板和凝血系统。2、患者体位的变化。从仰卧到直立变化时，水分从血管内向血管外转移，从而可使血浆容量平均减少12%，这样使细胞、大分子及蛋白结合的小分子物质浓度相对增加，结果可使血小板和凝血因子含量增加，PT和APTT时间缩短。3、采血技术或采血过程的影响。当压脉带时间超过一分钟，一方面可使水和低分子量物质从血管内向血管外转移，引起血细胞和血凝蛋白浓度增高；另一方面可引起血凝的激活。4、采血的部位。血标本采集严禁在输液，特别是输入肝素处或附近进行。

输液是临床必需的治疗措施，在不能停止输液的前提下仍然需要采集临床样本进行分析时，必须注意避免输液导致的血液稀释，切不可从输液管内采血。正确的做法是尽可能远离输液处采集样本。对于危重患者，临床输液量大，样本采集次数多，往往带有桡动脉测压管或中心静脉置管，这类患者可以从置管中采血，但必须做到桡动脉弃血5ml,输液中的中心静脉弃血5ml后才可以采集止凝血样本，否则对某些临床检验结果(如本研究中的止凝血指标)会造成明显的干扰。95、抗凝剂浓度的影响。美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）的血凝实验指南H21-A3推荐血凝试验的抗凝剂为枸橼酸钠，血：抗凝剂（9：1）。如果患者的Hct大于55%或低于20%应使用下述公式校正枸橼酸钠的用量：抗凝剂量（ml）=0.00185×血量(ml)×（100-患者红细胞比容）。血凝管的使用要标准化，即使用硅化玻璃管，其可避免内源性接触途径的激活。普通玻璃管影响最大的是Ⅷ因子的活性，可使其明显降低。7、标本颜色的影响：

实验表明,轻度溶血标本对测定影响不大,肝素、胆红素、甘油三酯均有干扰,当血红蛋白>100mg/L,肝素>1mg/L,总胆红素>136.8μmol/L,甘油三酯>3.5mmol/L时尤为显著.在实际工作中,应尽量避免溶血标本或重新抽血后再测定,对脂血或黄胆标本来说,应该先澄清或去黄胆,然后再上机分析,以减少对测定结果的影响。11在严重溶血状态下，TT测得值有明显增高外，其他凝血3项的分析结果与正常血浆状态差异无显著性。TT的延长也可能与严重溶血状态下红细胞破坏过多、释放的循环抗凝物质增加有关。12（四）标本的运送和处理1、温度的影响：凝血因子中，以因子Ⅴ和Ⅷ在离体后会随时间的延长而变性失活，这种失活可随温度的升高而加速，其可导致标本因从采集到分析时间延长而使PT和APTT时间延长。

标本存放的温度和时间不同,可影响凝血因子活性。文献报道32℃保存血浆6h、12h、24hⅧ因子活性可分别消失50%、60%、95%,即使保存在4℃也分别消失5%、55%、70%。APTT在存放后检测结果与即时测定结果相比均有延长趋势。142、时间的影响：NCCLS推荐止凝血试验应在标本采集和离心后4小时内完成，PT应在24小时内完成。

标本如不能再规定时间内完成，应分离血浆并置于-20℃可保存两周，-70℃可保存6月，但不能保存于普通冰箱内。

对于正确采集全血量为1.8ml的凝血功能管来说，采集量少于1.4ml，其检测结果显示4项凝血指标均有显著性降低，多于2.2ml，会导致FIB明显增高。

血液离体后，不管是离心后室温、4℃冰箱还是混匀后室温保存，放置6h或8h，PT测得值与即刻测定相比均明显缩短，放置24h时又明显增加。这可能与血液离体后Ⅶ因子的激活有关;随着储存时间的延长，放置24h时其测得值比即刻测得值又有明显的增加，这与Ⅶ因子的生物半衰期有关，随时间延长Ⅶ因子逐渐消耗。16APTT检测结果显示4h后的测得值均明显延长,这与Ⅷ因子和Ⅸ因子及其他凝血因子消耗密切相关。TT的分析结果提示，血液离体后即刻分离血浆，无论是室温还是4℃冰箱存放，对TT的测定值均没有明显影响，但以全血混匀状态存在，从4h起就明显增加。FIB对样本的存放条件和时间没有特别的要求。173、乏血小板血浆：如果标本血浆离心速度不够快、时间不够长，则血浆中含有较多的血小板（乏血小板血浆中含血小板量应少于10000/uL。（1500G/15Min）。影响如下：（1）血小板含有大量的磷脂，可以中和血浆中的狼疮抗凝物；（2）血小板中含有血小板因子4（PF4），能够中和标本中的肝素；（3）冷冻血浆含有大量磷脂和PF4，因为冷冻可以破坏血小板。标本常见错误对凝血时间的影响1、引起凝固时间缩短的错误:（1）穿刺不熟练，多次穿刺造成组织因子释放，触发外源性途径活化；（2）不适当的冷冻和融解血浆，造成因子Ⅶ的冷激活；（3）试管中的气泡造成的溶血；（4）抗凝剂的量不准确。2、引起凝固时间延长的错误：（1）标本凝固造成凝血因子消耗；（2）不适当的冷冻和融解血浆造成凝血因子的降解；（3）抗凝剂不准确。3、引起APTT时间延长的错误：（1）标本中含有肝素；（2）标本管未盖塞子而导致CO2丢失，因而血浆pH发生改变，pH的变化引起因子Ⅷ的变化。小结1、血标本的采集：应参照NCCLSH21-A2文件，即在清晨餐前静息状态下采血，止血带时间不超过1分钟，如需多管检测血标本，应用第二管血。使用真空采血器，采血后，血液应与抗凝剂充分混匀，但不能震荡和用力太猛。2、标本运送与贮存：标本通常在常温下运送，一小时内离心血浆（800g离心15分钟），乏血小板血浆需1500g离心15分钟，试验应在4小时内完成。3、抗凝剂：0.105mol/L(3.13%)或0.109mol/L(3.2%)的枸橼酸钠，血液与抗凝剂的比例为9：1。如红细胞比容过高或过低应予以调整。4、试剂：应用与仪器配套的试剂、校准品，用标准去离子水复溶。5、仪器的工作状态：应对仪器性能进行定期评估和校准，并对实验方法的准确性、精密度、灵敏度、线性、干扰、携带污染率进行评估。6、避免标本出现溶血、黄疸、脂血、凝块的影响。7、生理与服药的影响：妊娠、运动、激动、口服避孕药、阿司匹林、抗炎药等。8、操作人员的技术水平与处理问题的能力。凝血常规检验室内质控

失控原因分析(举例）

27

2005年1月～2006年12月某室凝血室内质控共38份失控报告122项次，与仪器和试剂相关的失控（真失控）共69项次，占56.6%，试剂失效是导致质控失控的主要原因。质控品相关的失控（假失控）53项次，占43.4%，而质控品解冻后混合不匀是导致假失控的主要原因。28

在122项次凝血室内质控失控结果中，以APTT最多，FIB其次。在凝血常规4项目所有质控失控结果中，APTT占38.5%，比例最高，可能与APTT的检测方法有关，它说明APTT敏感性较高，影响因素多，也说明APTT最能反映凝血检验过程中的不确定因素。

在122项次凝血常规检验室内质控失控结果中，由于试剂失效导致的失控49项次，占40.2%，是失控的主要原因。29D-二聚体和FDP检测的影响因素301、受检者状态的影响受检者的状态，如年龄大小、妊娠时期、生理变化、所患疾病、饮食改变、服用药物等会影响D-二聚体和FDP的检测结果，在采集血标本时，若未注意到这些因素，易对结果做出错误的判断。随年龄的增长特别是老年人D-二聚体的水平有所升高，与年轻人相比有显著性差别。随孕期的延长妊娠妇女的D-二聚体水平也升高，且双胎妊娠升高的更明显。剧烈运动，可使组织纤溶酶原激活物（t-PA）大量释放到血循环致使纤溶酶活性增高，月经期妇女，纤溶活性也明显增高。31

另外，有些情况则会使D-二聚体检测偏低，而出现假阴性的结果，如陈旧性血栓患者的D-二聚体水平低于新近发生血栓患者的水平，小血栓的D-二聚体水平低于大血栓，导致有一些时间较长的小血栓会出现D-二聚体阴性的结果。32食物的摄入，对纤溶系统的活性也会造成影响。有研究表明多食用高脂肪食物，造成高脂血症的患者，血管内皮细胞受损，t-PA的合成和释放相对减少，血浆t-PA活性明显降低；另外在高脂状态下纤溶酶原激活抑制物-1（PAI-1）分泌增多和富含甘油三酯（TG）的脂蛋白对PAI-1有运输作用，高脂血症患者的PAI-1也明显增高。因而，高脂血症患者纤溶系统活性受到抑制，血浆D-二聚体和FDP与对照组相比，结果常偏低，易造成假阴性。也有报道，饮酒者较不饮酒者D-二聚体水平有显著升高。332、标本采集的影响标本必须按照规定方法采集（参照NCCLSH2l-A2文件，1991），以防凝血系统和纤溶系统的激活而影响检测结果。（1）采血方法：采血时，一般要在病人空腹、安静状态下进行，以早晨07:00至09:00最为适宜，因为生物钟时间对检测指标有一定的影响。t-PA和PAI-1有较大的昼夜变化，对于多次反复采血的病人最好在同一固定时间和同一条件下采血。34采血时尽量不用止血带束扎或扎带压力要小，束缚时间要小于5min，压力大和束缚时间长会激活凝血机制，使凝血因子活性增高，内皮细胞释放t-PA，激活纤溶系统而引起纤溶活性增强，造成假阳性结果。采血人员应技术熟练，一针见血，防止组织过多损伤，纤维蛋白肽A在稍有组织损伤时，可导致结果改变。血液和抗凝剂混匀时应轻轻颠倒，避免用力振荡而破坏凝血蛋白。35（2）标本的贮存：血液要求采集于塑料或硅化试管中，并采用塑料移液管分离血浆。血浆贮存在塑料或硅化、带塞子的试管中，因为玻璃可以激活因子Ⅻ，从而可以激活纤溶酶原，启动纤溶系统，而影响检测结果。全血贮存在4～10℃不超过2h，要求在1h内分离血浆。大多数凝血试验采用乏血小板血浆，3000rpm离心10min分离，以去除全血中的血小板第3因子（PF3）、第4因子（PF4）和某些凝血因子。36

不同存放温度和时间对血浆中D-二聚体和FDP的含量会有不同程度的影响。在20℃、32℃放置4h后，纤溶酶活性都有不同程度的增高，随着放置时间的延长和温度的升高，可出现假阳性结果，这表明此过程中血浆凝血因子被激活且有纤溶酶原被激活，从而导致交联纤维蛋白的形成并随之发生降解，导致D-二聚体的产生。373、抗凝剂的影响静脉采血需用含0.109mol/L枸橼酸钠抗凝管采集，枸橼酸钠与血液标本比例为1:9，抗凝剂的量要准确。如抗凝剂量减少会使D-二聚体值