成体干细胞前言和间充质干细胞

成体干细胞前言和间充质干细胞成体干细胞前言和间充质干细胞第1页成体干细胞——adultstemcell

在个体发育过程：成体干细胞前言和间充质干细胞第2页成体干细胞概念

存在于成年个体许多组织和器官，比如表皮和造血系统，含有修复和再生能力，已经分化组织中未分化细胞，能够自我更新并在特定条件下，成体干细胞或者产生新干细胞，或者按一定程序分化，形成新功效细胞，从而使组织和器官保持生长和衰退动态平衡。成体干细胞前言和间充质干细胞第3页成体干细胞特征（1）极少许，特定区域（2）通常处于静息状态，分裂迟缓（3）自我更新与分化需要特定微环境成体干细胞前言和间充质干细胞第4页优点分析

获取相对轻易自体成体干细胞防止了移植排斥理论上，成体干细胞致瘤风险很低伦理学争议较少成体干细胞前言和间充质干细胞第5页检测方法

科学家还未就成体干细胞判定标准达成一致。经常被采取判定方法包含：

1)体内示踪法2)体外诱导分化成体干细胞前言和间充质干细胞第6页移植方法

经过静脉注射移植。经过椎管注射移植。经过介入方法直接移植到病变部位动脉血管。成体干细胞前言和间充质干细胞第7页常见成体干细胞间充质干细胞造血干细胞神经干细胞角膜缘干细胞胰腺干细胞皮肤干细胞肠上皮干细胞肝脏干细胞成体干细胞前言和间充质干细胞第8页间充质干细胞

——mesenchymalstemcell

起源于发育早期中胚层和外胚层。

MSC最初在骨髓中发觉。含有多向分化潜能，理想种子细胞。成体干细胞前言和间充质干细胞第9页间充质干细胞生物学特征

形态特征细胞表面标志

成体干细胞前言和间充质干细胞第10页光学显微镜扫描电镜成体干细胞前言和间充质干细胞第11页图1-8核质比高，细胞器少细胞×25000图1-9核质比较低，细胞器丰富细胞×25000透射电镜成体干细胞前言和间充质干细胞第12页公认骨髓MSCs表面标识：

A:不表示分化相关细胞标志如脂多糖受体CD34以及白细胞表面抗原CD45等。

B:但表示CD44、CD54、CD133、CD105、CD90等。成体干细胞前言和间充质干细胞第13页成体干细胞前言和间充质干细胞第14页成体干细胞前言和间充质干细胞第15页间充质干细胞分离培养采集部位：髂骨上嵴、胫骨和股骨、胸骨和腰椎。分离方法：细胞帖壁筛选法

密度梯度离心法

细胞分子标识分选法

细胞筛筛选法成体干细胞前言和间充质干细胞第16页图1第三代hBMMSCsHE染色×1000图2hBMMSCsP1,P3,P5代生长曲线图3hBMSCs成骨诱导第10天倒置相差显微镜×400成体干细胞前言和间充质干细胞第17页图7hBMSCs诱导后碱性磷酸酶染色×400图4第3代hBMSCsCD29表示阳性×200图5第3代hBMSCsCD90表示阳性×200图6第3代hBMSCsCD166表示阳性×200成体干细胞前言和间充质干细胞第18页间充质干细胞诱导分化成体干细胞前言和间充质干细胞第19页诱导分化—成骨细胞

在MSCs培养体系中加入地塞米松、β-磷酸甘油和抗坏血酸等单独或联合诱导,发觉培养MSCs逐步形成聚集体或结节,碱性磷酸酶活性也随之增高,基质钙化显著,可分化为成骨细胞。

透明质酸、骨形态形成蛋白-2(BMP-2)以及铜等均可促使MSCs向成骨细胞分化。

成体干细胞前言和间充质干细胞第20页诱导分化—软骨细胞（1）三维培养方式（2）无血清培养基（3）添加转让生长因子β家族组员在成人骨髓MSCs培养体系中加入地塞米松和TGF-β3,在第14天时,在细胞外基质中检测到Ⅱ型胶原；在含10-7moL/L地塞米松培养基中培养,有Ⅱ、Ⅹ型胶原表示。

成体干细胞前言和间充质干细胞第21页诱导分化—脂肪细胞

用异丁基-甲基黄嘌呤（IBMX）、地塞米松、胰岛素和吲哚美辛（IM）联合诱导人MSCs,可观察到细胞内逐步聚集含脂质丰富小泡,各种诱导处理可使95%以上细胞定向分化为脂肪细胞,而且细胞内脂质小泡不停地长大、融合,最终充满细胞。这些分化脂肪细胞在体外培养可健康生长最少3个月。成体干细胞前言和间充质干细胞第22页诱导分化—心肌细胞

1体外分化试验小鼠股骨中取得骨髓MSCs,经5氮胞苷处理,大约30%MSCs出现形态学改变,分化为类心肌细胞,并可重复检测到自主起搏细胞。

（视频）成体干细胞前言和间充质干细胞第23页(1)分化MSCs表示出特异性心房利钠肽(ANP)和脑利钠肽(BNP)基因。表明分化细胞含有类心肌收缩蛋白,完全不一样于平滑肌细胞及骨骼肌细胞；(2)电镜检验类心肌细胞超微结构时可观察到:特征性经闰盘连接肌节、中心核和心房颗粒；(3)5氮胞苷处理2～5周后，分化MSCs电生理检测到最少有2种完全不一样动作电位：成体干细胞前言和间充质干细胞第24页2体内分化由MSCs向类心肌细胞分化过程中,除5氮胞苷外,体内心脏微环境对MSCs分化也至关主要。Wang等在其试验中提及心肌微环境能够支持MSCs移植后生长和向心肌细胞分化。“环境依赖性分化”（milieu-dependentdifferentiation）内容：认为生长因子、细胞因子、细胞外基质等以及它们在干细胞/宿主细胞之间相互作用，在诱导MSCs向心肌分化方面起着主要作用。尽管MSCs向心肌分化详细机制不清楚，但一致倾向认为:组织损伤和高水平多能细胞是其分化两个主要决定原因。成体干细胞前言和间充质干细胞第25页诱导分化—神经细胞在丁化羟基苯甲醚(BHA)或β-巯基乙醇作用下,可诱导大鼠骨髓基质细胞向神经细胞分化用双丁酰环磷腺苷(dbcAMP)和异丁基甲基黄嘌呤(IBMX)处理MSCs可诱导神经分化早期标识表示在神经生长培养基中添加EGF和脑源性神经营养因子（BDNF）一样可诱导神经分化早期标识表示。在bFGF和PDGF存在下，DMSO/BHA可诱导大鼠骨髓基质细胞向神经细胞分化。成体干细胞前言和间充质干细胞第26页成体干细胞前言和间充质干细胞第27页诱导分化—内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)

多能成体祖细胞(multipotentadultprogenitorcells,MAPCs)是骨髓MSCs一个亚群。

年,首次在体外用血管内皮生长因子(VEGF)把人骨髓MSCs诱导分化成含有脉管母细胞表型细胞,随即这些细胞分化成表示内皮细胞标识物细胞。在培养过程中MAPCs能够不停扩增80多个群体,倍增时间没有显著衰退表现,所以在临床治疗方面,MAPCs是一个理想内皮细胞起源。牛垂体内皮细胞生长添加剂(endothelialcellgrowthsupplementfrombovinepituitary,ECGS)

我国学者用牛垂体内皮细胞生长添加剂(endothelialcellgrowthsupplementfrombovinepituitary,ECGS)对兔MSCs进行定向诱导分化，细胞80%融合时展现“铺路石”样形态,细胞免疫组化证实扩增细胞表示CD31和vonWillebrandfactor(vWF),含有吞噬ac-LDL功效,且扩增细胞在体外参加网状血管样结构形成。所以认为,在体外能诱导MSCs向内皮细胞分化。另外，在创面微环境下,MSCs可分化为血管内皮细胞,并参加创面修复。成体干细胞前言和间充质干细胞第28页成体干细胞前言和间充质干细胞第29页诱导分化—胰岛细胞先用bFGF,EGF等因子诱导成人MSCs向nestin阳性祖细胞(NIP)分化；再用高糖无血清培养基和β细胞调整素、尼克酰胺等诱导NIP向胰岛样细胞分化结果表明MSC经第一阶段诱导后可分化成NIP,继续诱导6天后变圆细胞逐步增多，并聚集成团，双硫腙染色阳性，免疫组化试验证实经两阶段诱导后细胞表示胰岛素、胰高血糖素、生长抑素等内分泌激素，放免分析结果表明，诱导胰岛样细胞团可分泌胰岛素，糖反应性较弱成体干细胞前言和间充质干细胞第30页成体干细胞前言和间充质干细胞第31页存在以下问题伴随年纪老化，干细胞数目显著降低、增殖分化能力大幅度衰退；制备过程不轻易质控；移植给异体可能引发免疫反应；取材时对患者有损伤，患者有骨髓疾病时不能采集，即使是健康供者，亦不能抽取太多骨髓。成体干细胞前言和间充质干细胞第32页干细胞可塑性质疑自然界真存在成年组织干细胞“可塑性”？成体干细胞“可塑性”是试验设计不严谨上失误抑或一个主观判断错误所致？成体干细胞“可塑性”与全能干细胞或胚胎干细胞又有何关联？这些质疑实质就是：所谓成体干细胞“可塑性”缺乏科学依据；成体干细胞“横向分化”是成年组织中余存胚胎原始干细胞所为，抑或与自发融合相关。成体干细胞前言和间充质干细胞第33页ThankYou!成体干细胞前言和间充质干细胞第34页神经干细胞侧脑室下层海马齿状回成体干细胞前言和间充质干细胞第35页神经干细胞特征形态特征表面标志低免疫源性组织融合性