临床基因扩增PCR实验室SOP标准操作程序文件(32项)

临床基因扩增实验室标准操作程序编写人：审核人：批准人：启用日期：年月日XXX医院前言为使基因扩增检验技术有效地应用于临床，更好地为疾病的预防、诊断和治疗服务，保证检验质量，严格按照《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》(卫医发[2002]10号文)附件《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》要求，制定本实验室管理文件，本实验室任何实验均需遵循本管理文件中规定执行。临床基因扩增检验技术指以临床诊断治疗为目的，以扩增检测DNA或RNA为方法的检测技术，快速、可靠、准确、安全、收费合理方式下，以规范的操作对临床标本进行分析。本室采用经国家药品监督管理局批准的试剂盒。开展的检测项目：1、乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测2、人巨细胞病毒（HCMV）核酸定量检测文件编号文件名称页码PCR-BZCZCX-001分子实验室设置、人员配置和职责管理程序6--10PCR-BZCZCX-002分子实验室分区的配置、功能、管理程序11--16PCR-BZCZCX-003分子实验室设施和环境管理程序17PCR-BZCZCX-004临床标本管理程序18PCR-BZCZCX-005标本采集、验收、保存标准操作程序保存标准操作程序保存标准操作程序19-21PCR-BZCZCX-006标本唯一性编号标准操作程序22-23PCR-BZCZCX-007分子实验室仪器设备操作、维护和校准程序24-25PCR-BZCZCX-008分子实验室仪器设备的管理程序26-28PCR-BZCZCX-009分子实验室仪器设备的管理程序29-30PCR-BZCZCX-010化学试剂的管理及配制操作程序31-32PCR-BZCZCX-011分子实验室PCR试剂性能质检程序33-34PCR-BZCZCX-012样本核酸提取操作程序35-36PCR-BZCZCX-013分子实验室一次性离心管和吸嘴的质检程序37-38PCR-BZCZCX-014分子实验室HBV-DNA室内质控程序39-41PCR-BZCZCX-015分子实验室检测结果报告和审签管理程序42-43PCR-BZCZCX-016分子实验室试剂、耗材的购买和管理程序44-45PCR-BZCZCX-017分子实验室生物防护和清洁废弃物处理程序46-49文件编号文件名称页码PCR-BZCZCX-018分子实验室记录管理程序50-52PCR-BZCZCX-019分子实验室抱怨和应急处理程序53-56PCR-BZCZCX-020分子实验室保密制度57PCR-BZCZCX-021分子实验室人员实习、培训和进修管理程序58PCR-BZCZCX-022ABI-7500Plus荧光定量PCR仪使用、维护和校准程序59-65PCR-BZCZCX-023仪器设备的使用、维护操作程序（离心机）66-68PCR-BZCZCX-024仪器设备的使用、维护操作程序（移液器）69-71PCR-BZCZCX-025实验室仪器使用、维护程序（冰箱）维护程序（冰箱）维护程序（冰箱）72-73PCR-BZCZCX-026实验室仪器使用、维护程序（生物安全柜）74-76PCR-BZCZCX-027恒温金属浴的使用、维护标准操作和校准程序77-78PCR-BZCZCX-028实验室仪器使用、维护程序（旋涡混合器）79PCR-BZCZCX-029移动紫外消毒车使用、维护程序80-81PCR-BZCZCX-030温度校准标准操作程序82-83PCR-BZCZCX-031乙肝病毒（HBV）核酸提取标准操作程序84-88PCR-BZCZCX-032人巨细胞病毒（HCMV）核酸提取标准操作程序89-95XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序标准操作程序文件文件编号：PCR-BZCZCX版本号：第2版第0次修改页码：第1页；共1页受控状态：受控号：标准操作程序文件标准操作程序文件XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室设置、人员配置和职责管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-001版本号：第2版第0次修改页码：第1页；共5页受控状态：受控号：1.目的：为了分子实验室的规范管理，特制订本程序。2.范围：分子实验室。3.职责： 3.1临床PCR检验实验室工作人员共同遵守、相互督促。3.2因科研活动需要，进入实验区域（试剂准备区、样本准备区、PCR扩增区）的非本室人员需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行。4.实验室设置：4.1实验室设计为：专用走廊、试剂准备区、样本制备区、PCR扩增区组成。三个区域各有一个缓冲间。（见设置图）4.2三个工作区各配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识。试剂准备区—白色、样品处理区—兰色、基因扩增区—红色。4.3工作区的配置、功能、内务管理制度见各工作区文件。4.4实验室须严格遵守试剂区→样本区→扩增区的流向制度，严禁误入和逆进入各工作区。4.5实验室流程：PCR室工作人员上班后，由过道走廊→试剂区→样本区→扩增区流向，XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室设置、人员配置和职责管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-001版本号：第2版第0次修改页码：第2页；共5页受控状态：受控号：打开排风、光源、温控装置。2）标本接收区接收标本、验收登记后离心（不开盖），由内走廊入口将标本送入标本制备区缓冲间（标本制备区内门关闭）。3）PCR工作人员按从试剂区→样本区→扩增区更衣开始流水操作。4.6工作开始时，按开启实验区门。工作结束，内务整理完毕，关闭实验区。4.7实验室内严禁饮食、吸烟。5.人员配置：5.1人员要求：5.1.1鉴于PCR检测干扰因素较多，结果分析复杂，其应用需要与临床充分沟通。因此，PCR实验室工作人员应具备大学专科以上学历，掌握相关学科知识及应用能力（实验技能、分析能力、沟通能力）。5.1.2PCR实验室工作人员应取得上岗培训合格证书。5.1.3在岗未取得培训合格证书者，必须由具有上岗培训合格证书者对其先作专业培训，在条件许可时，应在最短时间内获得上岗培训合格证书。其临床PCR检验过程须在具有培训合格证书的技术人员监督指导下完成，其临床PCR检验报告须由具培训合格证书的技术人员审核签发。5.1.4实验室工作人员上岗前必须学习掌握PCR实验室管理文件及要求，并由实验室负责人核查。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室设置、人员配置和职责管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-001版本号：第2版第0次修改页码：第3页；共5页受控状态：受控号：5.2人员配置：实验室根据工作开展情况配备足够数量的工作人员。目前，实验室配置人员为3人。实验室负责人负责实验室全面管理、技术指导、解决与临床沟通及技术疑难问题。实验室负责人不在岗时，应指定代理人负责。5.3人员培训：5.3.1实验室负责人（或其指定代理人）每年必须参加上级管理部门组织的有关PCR内容的会议及再继续教育培训。5.3.2实验室其他人员每年要进行1次专业学习。5.3.3未取得培训合格证书者，在有条件情况下，完成上岗培训，取得上岗培训合格证书。6.工作人员职责：6.1中、高级职务人员职责：6.1.1结合实验室特点，参与指导实验室发展规划的制定工作，编写技术管理件。6.1.2熟悉、追踪本学科国内外最新学术发展动态，引进先进的技术和方法：6.1.3承担部分临床检测工作、部分带教工作。组织制定医疗、科研的实验方案。6.1.4解决本学科实验技术的重要问题，设定新实验项目。6.1.5通过学术报告、专题讲座等形式培养本室的相关技术人员。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室设置、人员配置和职责管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-001版本号：第2版第0次修改页码：第4页；共5页受控状态：受控号：6.1.6协助科主任拟订实验室建设方案和精密贵重仪器、大型设备的配置方案。6.1.7参与精密仪器、大型设备的可行性论证，组织安装、调试、维修工作。6.2初级职务人员职责：6.2.1在上级技术人员的指导下，参加具体临床检测工作的技术操作，参与制定与本室工作有关的操作规范和仪器设备的使用规程。6.2.2负责本室仪器设备的保养和一般故障的维修工作，定期检查仪器设备的完好状态，发现问题，主动会同有关部门及时解决。6.2.3积极参加室内外各种技术培训，认真学习与本专业技术有关的理论知识，不断提高技术平。6.2.4帮助进修生和实习生的技术工作。6.2.5完成上级技术人员交办的与技术工作有关的其它任务。6.3工作人员行为规范：6.3.1有强烈的时间观念，按时上下班，不迟到、不早退。6.3.2.每天实验完成后要清洁实验室，擦拭工作台面。6.3.3实验人员须保持仪表整洁，工作区域须穿工作服，离开时应换下。6.3.4实验室内不得饮食。6.3.5工作区域内收集标本外，不得擅离工作岗位，特殊情况需请假。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室设置、人员配置和职责管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-001版本号：第2版第0次修改页码：第5页；共5页受控状态：受控号：6.3.6上班时间内除操作规范，不得随意更改操作步骤。6.3.7严格遵守实验流程，尽量减少往返走动。6.3.8操作过程中应严谨、认真、专心，不得与他人交谈，不得同时做与实验无关的事情。如确有需要，应暂停工作，并记录下已进行的步骤。6.3.9每日实验结束后及时记录，报告单按时发送，原始记录存档清晰，以备查询，文件记录不肮脏、破损。6.3.10语言有礼貌、举止讲文明，对待来访病人或电话应和蔼礼貌，解释明确耐心，不得推脱或生硬回绝。6.3.11应本着敬业爱岗的精神，努力做好本职工作，爱护仪器，节约消耗品，减少浪费。6.3.12晚上下班要关门、关窗、检查空调和仪器的电源是否关闭，处理好废弃物。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室分区的配置、功能、管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-002版本号：第2版第0次修改页码：第1页；共6页受控状态：受控号：1.目的：规范分子实验室各区的配置、功能、内务管理等。2.适用范围：PCR实验室。3.样本接收区：3.1配置：计算机、操作台及其他耗品和办公用品若干。3.2功能：负责病人标本的接收、验收、登记、检验结果的报告和签发、抱怨的接受处理，Tip头和离心管的分装，检验试剂的外内包装验收。分离的标本、项目登记单随分离的标本传递到标本处理区。3.3内务管理3.3.1本区内不允许与基因检测无关的工作人员和病人进入。3.3.2本区无人在岗时要关好房门，以保证检验报告及其他物品的安全。3.3.3各种物品放置有序，清洁物与可疑污染物（如检验申请单）要分开放置。3.3.4本区内工作有相关文件的则按文件规定执行，无相关文件的暂不作具体规定。4．试剂准备区：4.1配置：普通冰箱一台，离心机，空调，加样器，可移动紫外灯一台、办公用品若干。4.2.消耗品：消耗品包括酒精和次氯酸钠，一次性手套，一次性帽子，各种尺寸的能高压消毒的试剂容器，制备核酸的试剂，及反应试剂（例如酶，缓冲液，XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室分区的配置、功能、管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-002版本号：第2版第0次修改页码：第2页；共6页受控状态：受控号：dNTPs），Eppendoff管，带滤心的吸嘴。4.3功能：储存溶液的准备，应用液、主混合液的准备，分装，成品试剂和化学试剂的贮存，75%乙醇等简单试剂的配制。工作完毕立即清洗工作场地。其他的工作不准进入。4.4.1着装和标识。该区工作服白色为标识。4.4.2进入本区时先开门，随后关上，进入缓冲间；在缓冲间内换上专用工作服、鞋帽，做好工作人员出入实验室记录，打开缓冲间门，进入工作区，随后将缓冲间门关上。非工作人员严禁入内。4.4.3PCR扩增体系的试剂配制和分装、化学试剂的配制在本区内完成即可。根据当天的标本验收登记表，取出当天实验须配制和使用的试剂，其余试剂要立即收好放回冰箱内。配制好的试剂需通过传递窗再分送至Ⅱ区使用。实验中所使用的离心管、吸头等需经高压灭菌处理，使用时应在消毒有效期内。4.4.4做好当天冰箱温度和临床PCR检验流程记录表，通过传递窗再分送至Ⅱ区记录。4.4.5本区内的所有设备物品（除灭好菌的耗品外）均为本区内专用，且要有明显的标识，不得移出使用，也不得从事本区规定以外的工作。4.4.6本区在工作开始前和工作中、工作结束后全过程均要严格按照各相关文件的规定操作。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室分区的配置、功能、管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-002版本号：第2版第0次修改页码：第3页；共6页受控状态：受控号：4.4.7每天须记录本区的温度和湿度，记录时间为本区温控设备开启后半小时。4.4.8取下口罩、帽子放入垃圾筒。将本区所有废弃物装入垃圾袋，在垃圾筐上套好新的垃圾袋，离开实验区时带走垃圾袋，随后关上实验区门。进入缓冲间，脱下鞋套放入垃圾袋，然后将垃圾袋封口，脱下Ⅰ区专用工作服，打开Ⅰ区门，带出垃圾，，关上门。5．标本处理区：5.1配置：冰箱一台，生物安全柜一台，冷冻高速离心机一台，混匀器一台，加样器一套，可移动紫外消毒车一台、金属浴一台，空调一台，其他耗品、办公用品若干。5.2功能：本区负责各种临床样本、质控样本的核酸提取纯化，储藏，样本贮藏，在这一工作区完成。5.3内务管理：5.3.1工作人员进入本区前必须在缓冲间内换上本区专用的工作服、鞋帽等，非本室工作人员严禁入内。5.3.2标识、着装。该区为蓝色工作服。其他要求同上述。5.3.3进入工作区，打开传递窗门，取出当天用的PCR试剂，做好当天冰箱温度和临床PCR检验流程记录表，通过传递窗再分送至III区记录。试剂放4℃冰XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室分区的配置、功能、管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-002版本号：第2版第0次修改页码：第4页；共6页受控状态：受控号：箱暂存。5.3.4这一工作区的试剂和消耗品切不可带入PCR加样区，因为它们可能污染了不准备扩增的核酸。同样，剩余的主混合液，酶，或者其他试剂也不准返回试剂准备区。5.3.5气溶胶可引起污染，故应避免实验室内不必要的走动。通过实验室内部的排风调节，能减少过道区形成的气溶胶对标本准备区的污染。每次加入待检核酸后含反应混合物反应容器必须关闭，以避免样品间的交叉污染。对于可能有传染性的材料，必须遵守关于处理和消毒的已制定的SOP文件要求。5.3.6本区每天在工作时利用本区的温控设备使本区的温度控制在15~25℃之间。用过的加样头必须丢弃于相应浓度的消毒液容器里。5.3.7每天须记录本区的温度、湿度，记录时间为温控设备开启后半小时。5.3.8标本处理过程均需严格遵守各种标本处理的SOP文件。5.3.9取出冰箱中的PCR试剂，处理好的样品加入试剂后通过传递窗送入Ⅲ区。5.3.10实验前、实验后记录、卫生清洁处理、进出实验室记录、温控记录等要求。6．基因扩增区：6.1配置：7500Plus实时荧光定量PCR检测仪一台，可移动紫外消毒车一台，XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室分区的配置、功能、管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-002版本号：第2版第0次修改页码：第5页；共6页受控状态：受控号：电脑一台，空调一台，其他耗品、办公用品若干。6.2功能：将样品检材（来自样品准备区）和主混合液（来自试剂准备区）加入成为反应混合物，并在这唯一区域进行扩增反应。6.3内务管理：6.3.1着装、标识。该区工作服为粉红色。工作人员进入本区前须在缓冲间内换上专用的工作服、鞋帽等。非本室工作人员严禁进入本区。6.3.2本区每天在工作时利用本区的温控设备，使本区的温度控制在15~25℃范围内。6.3.3进入工作区，打开传递窗门，取出加好试剂待扩增的样本。做好当天PCR检验流程记录表。扩增好必须弃于去指定的容器里。工作结束及下班前，必须清洁和净化（去污染）实验台表面。6.3.4在缓冲间更换衣服，拖鞋，并带手套和帽子。在此区域里手套应该经常更换。离开房间时应将工作服留下。6.3.5按荧光扩增仪的标准操作程序文件对各种样本进行检测。本区在工作开始前、工作中和工作结束后的全过程均要按各相关文件的规定操作。6.3.6每天须记录本区内的温度、湿度，记录时间为温控设备开启后半小时。6.3.7本区内的所有设备、物品为本区内专用，且要有明显的标识，不得移出使用，也不得从事本区工作范围以外的事项。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室分区的配置、功能、管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-002版本号：第2版第0次修改页码：第6页；共6页受控状态：受控号：6.3.8作好扩增仪的维护、实验数据的记录、质控记录。实验前准备、实验后消毒记录等。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室设施和环境管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-003版本号：第2版第0次修改页码：第1页；共1页受控状态：受控号：1.目的：为了防止实验室的污染，特制订本程序。2.范围：分子实验室。3.职责：分子实验室工作人员。4.实验室环境：4.1Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ区的空气流向由实验室区域外向内。4.2Ⅱ、Ⅲ这两区应空气对流通畅，但两区之间不应存在空气对流。4.3实验室工作台应为宽60-80cm，长不小于200cm的坚固、平整、光滑、耐酸、耐紫外照射的台面，台面距地面高度80cm。4.4实验室各区上方应安装40W日光灯一盏，近工作台上方安装两只40W紫外灯。缓冲间上方安装一只40W紫外灯。4.5Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ区应有空气恒温设备（如冷暖空调），室温宜为18-25℃,空气湿度宜≤70%.4.6仪器设备、标本架、枪头盒、离心管盒各区均专用，且有各区专用标志,各物品须摆放整齐,灭菌的物品须与未灭菌物品严格区分放置。4.7冰箱内试剂分类摆放。4.8消毒和污物处理见各自的SOP。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序临床标本管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-004版本号：第2版第0次修改页码：第1页；共1页受控状态：受控号：1.目的：规范标本采集、运送、贮存、废弃的管理，确保检验结果准确性。2.范围：临床各类标本，涉及标本的采集、处理、保存。3.责任人：分子实验室工作人员和临床护士。4.工作程序：4.1实验室所有临床标本必须有唯一性编号，标本的唯一性编号须字迹清晰明了，不得随意作任何涂改。4.2所有标本均可能具有传染性，须严格遵守医院有关院内感染及医用垃圾管理和处理规定，工作人员注意保持并随时检查容器的完整和无标本外泄发生。4.3标本的采集、运送、保存见相应的操作程序文件。4.4接收标本时应该核对标本与检验申请单的一致性。工作人员有权拒收与检验申请单不一致的标本、标识不清的标本。检验申请有不清晰情况时，应即时与临床科室或相关人员联系核实。4.5标本接受人须检查标本状态：标本不合要求（使用不适当的容器、容器有破损、标本外泄污染、标本溶血、标本量不足等），工作人员有权拒受标本，应记录其状态并通知临床重新送检。4.6检测前标本处理时，工作人员须仔细核对标本与标本资料记录的一致性，准确无误时，方可进行处理。4.7标本的废弃处理见“废弃物的处理程序”XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序标本采集、验收、保存标准操作程序文件编号：PCR-BZCZCX-005版本号：第2版第0次修改页码：第1页；共3页受控状态：受控号：1、目的：保证所接收的标本符合实验要求,保证标本的保存质量。2、适用范围：门诊患者和病区患者送检标本。3、责任人：XX科人员、临床护士和运送部人员。4、标本的采集（标本由医护人员采集）血液标本：病区标本由护士采集，门诊标本由门诊抽血处专人采集，全血样本根据需要选择真空无菌无抗凝专用试管抽取静脉血2ml或于含EDTA-K2真空采集管中抽取静脉血2ml。痰标本：用一次性无菌痰杯（带盖）收集清晨第一口痰标本送检。对于无痰或少痰的患者，可用45℃加温的100g/LNaCl水溶液雾化吸入或改变体位以使痰液易于咳出；对于小儿可以轻压胸骨柄上方以诱导咳痰，用消毒棉拭子刺激喉部引起咳嗽反射，用棉拭子采集标本。生殖道拭子：尿道或阴道分泌物由医生用专用一次性灭菌取样拭子采集样本，及时送检。采集生殖道拭子标本，要求病人在采样2小时内排尿，采样时，将棉拭子伸入男性尿道及女性宫颈口2~3cm，转动一周以获得上皮细胞。将取样后的棉拭子管加1ml无菌生理盐水。宫颈脱落细胞：宫颈脱落细胞由医生用专用取样宫颈刷（灭菌，一次性）采集样本，及时送检。采集要求病人在采样有24小时内不能有性交，采样时，用无菌棉球轻拭宫颈表面过多的分泌物及血迹，宫颈刷到达宫颈外口上方10mm左XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序标本采集、验收、保存标准操作程序文件编号：PCR-BZCZCX-005版本号：第2版第0次修改页码：第2页；共3页受控状态：受控号：右，部分毛刷覆盖宫颈外口表面，用适当的外力朝一个方向转3圈。取出后将毛刷置于细胞保存液中，封盖。及时送检。脑脊液和胸腹水：由临床医生采集后放入消毒的试管中及时送检。乳汁标本：由病人直接挤入1.5ml无菌EP管中，封盖送检。尿液标本：由病人自留尿液于无菌封闭的杯中送检。注：定期对临床医护人员进行有关标本采集、保存、运输等知识的培训。5、标本的运送：标本由送检人员统一收取，运送容器为一次性无抗凝剂真空试管，4小时内送到遗传科标本接收区。6、标本验收程序：6.1对符合检测要求的标本及时地用计算机条码系统进行签收，然后进行唯一性编号（详见标本唯一性编号标准操作程序）。6.2认真查对姓名，条码号，ID号，病区床号，项目及标本性状等。对不符合要求者记入拒收标本记录表中，并及时通知采样科室，正确及时地补采样，以免延误病人的检测报告。7、标本的保存：HBV-DNA：血样标本4~8℃短期保存（2天），或分离出血清，-20℃下保存（两周以上）。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序标本采集、验收、保存标准操作程序文件编号：PCR-BZCZCX-005版本号：第2版第0次修改页码：第3页；共3页受控状态：受控号：HCV-RNA：血样标本应尽快分离血清（或血浆），-20℃保存，保存期不得超过2周。长期保存需存放在-70℃以下。痰、乳汁、尿、全血、胸腹水、脑脊液标本置4℃下短期保存。血清、血浆、胸腹水、脑脊液和处理后的痰、尿-20℃下长期保存。注：所有标本在报告发出后保存1周。由专人负责，确保标本保存的温度及状态正常，1周后丢弃并做记录。特殊标本处理：对暂不检测的项目或规定时间外收到的零散标本，要随时登记和交班，以免漏检，遗失和延误检验。对特殊标本或特殊病人的标本，实行“首接”负责制。所谓特殊标本是指难于采集的标本，以及特殊病人的标本。“首接”负责制是指无论那位工作人员，一旦收到标本，均须负其责任，及时和正确保管，转送标本到有关实验室或有关人员，同时作交班记录和双签名，不得以任何借口推托。对于做长期病情动态考察的病人标本一律置-20℃下长期保存，使用时再按需取出检测。注：定期对本科室工作人员进行相关培训。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序标本唯一性编号标准操作程序文件编号：PCR-BZCZCX-006版本号：第2版第0次修改页码：第1页；共2页受控状态：受控号：1.目的：规范待检标本的唯一识别标记的编码规则，保证在任何时候对标本的识别不发生混淆。2.适用范围：基因扩增实验室所开展的检测项目。3.操作人：分子实验室人员和临床护士。4.操作方法：XX科已使用条形码系统，其条形码已具备唯一性标识，但由于病区标本多，项目杂，不能做到PCR检测项目标本的条形码单独特征性区分，且条形码不具有连续性，这给上机标本编辑检测号带来不便和影响工作效率。因此，必须重新为带有条形码的标本编号。编号原则详见下述。4.1按检测类型+检测日期+检测顺序进行。4.2编号步骤：Ⅰ.对当天送来的标本，根据编号的基本原则编号，每个样本的每个检测项目对应一个唯一的编号（如2018年1月1日检测的第3个乙肝标本为HBV-DNA2018010103或20180101HBVDNA03）Ⅱ.用笔在每张检验申请单和对应的样品管上作好相同的标记。Ⅲ.做好标本的接收记录，每个样本的记录都应包括以下信息:接收时间、医院、科室、送检医生、患者姓名、性别、年龄、标本类别、标本状态、送标本者、接收人、标本唯一统编号等。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序标本唯一性编号标准操作程序文件编号：PCR-BZCZCX-006版本号：第2版第0次修改页码：第2页；共3页受控状态：受控号：Ⅳ.处理好样品、点样后，将反应管放入扩增仪上开始扩增。Ⅴ.扩增得到结果后，先在统计簿上填入结果，作好记录，再依次把实验结果填入相应申请单。Ⅵ.发放检验报告单。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室仪器设备操作、维护和校准程序文件编号：PCR-BZCZCX-007版本号：第2版第0次修改页码：第1页；共2页受控状态：受控号：1.目的：保证仪器设备得到正确无误的操作使用、稳定状态，保障仪器设备的使用寿命和结果检测的准确性。2.范围：PCR涉及的主要设备，包括：7500Plus荧光扩增仪，离心机，可调式移液器，恒温金属浴，生物安全柜等。3.职责： 3.1操作者必须严格遵循操作程序的规定。3.2实验室负责人负责程序的落实和督导。4.仪器设备的操作使用：4.1仪器设备的使用授权：仅本实验室工作人员有权使用实验室的仪器设备，仪器设备的使用者在使用前首先必须熟悉仪器设备的操作使用程序并经科室主任考核认可。4.2仪器的使用：仪器设备的使用严格遵守分区使用管理，仪器设备的使用必须严格遵循仪器设备的标准操作规程。5.仪器设备的维护保养：5.1维护保养的实施：按PCR实验室仪器设备的维护保养的SOP文件进行。5.2维护保养应有及时的实施记录，实验室负责人对记录应及时检查，核实。6.仪器设备的校准程序：6.1校准方法：XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室仪器设备操作、维护和校准程序文件编号：PCR-BZCZCX-007版本号：第2版第0次修改页码：第2页；共2页受控状态：受控号：6.1.1可调式移液器校准应送到该地区计量单位进行校准。6.1.2恒温金属浴使用经检定的温度计进行日常温度监控，厂家每年校准一次。6.2校准安排在不进行样本检测的日期完成。6.3校准后设备要贴上本次校准的日期及下次校准的预定日期。6.4校准记录保存在各自的设备档案中.。6.5校准计划：6.5.1启用前校准：设备在投入使用前实施校准。6.5.2周期性校准：设备在投入使用后定期进行校准，具体参见各仪器校正SOP。6.5.3维修后校准：设备经维修后须经校准后才可重新投入使用。6.5.4校准计划外的校准：在日常工作中怀疑某些已校准设备出现偏差时，应对其作计划外校准。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室仪器设备的管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-008版本号：第2版第0次修改页码：第1页；共3页受控状态：受控号：1.目的：保证PCR实验室仪器设备得到妥善的管理。2.范围：PCR实验室的所有仪器设备。3.职责：3.1仪器设备的管理、维护、保养等的具体事项由设备操作人员负责执行。3.2由PCR实验室负责人组织执行和监督管理。4.工作内容：4.1建档管理。仪器设备的档案管理应包括以下内容：4.1.1仪器设备的一般情况：名称，制造商，型号，序号，接受日期，接收状态（全新，改装，原件调拨等），启用日期，目前放置地点，接受人员签字等。4.1.2仪器设备的相关文件：仪器设备的说明书，操作手册，保修卡等，有关文件（或复印件）的文件序号，名称，保存方式，管理负责人等。4.1.3仪器设备的损坏，故障，修理须作如下记录：日期，设备名称，设备标记号，损坏或故障的表现，损坏或故障的原因，修理人员及单位，修理的结果，记录人员签名，质量负责人签名等。4.1.4有问题的仪器设备加贴明显的红色停用标识，标识上应有停用XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室仪器设备的管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-008版本号：第2版第0次修改页码：第2页；共3页受控状态：受控号：日期及原因；可搬动的仪器移至设备处报修，不可移动的设备原地使用布罩封存待修，直至修复校验后重新标识。4.1.5仪器设备的报废处理：因使用寿命，损坏，故障导致仪器设备不能满足检测需要时，该设备即行报废。由管理人填写报废申请，科质量负责人核实，设备处批准后由质量负责人在设备档案中签名注销。4.2仪器设备实行严格的分区专用。4.3使用的仪器设备应进行校准和鉴定，具体见文件SOP；4.4为保持仪器设备工作状态的稳定，应对其进行定期的，必要的维护和保养，见文件SOP；4.5为使7500Plus荧光定量PCR检测仪处于稳定的工作状态，在该电脑上不得使用非本室的外来U盘，不能在电脑里加载其它程序和软件；在使用本室U盘进行资料备份时，需在报告系统电脑上预先杀毒方可使用。5、仪器故障时的标记、放置程序：5.1步骤：a）用红牌故障标志标示故障仪器。b）小型仪器送仪器部门维修。c）大型贵重仪器关闭电源开关，取下电源插头。用相应防尘罩遮蔽仪器。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室仪器设备的管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-008版本号：第2版第0次修改页码：第3页；共3页受控状态：受控号：d）维修完成后取下红色故障标示，换上黄色未校准标示牌。e）调试实验通过，去掉未校准标示牌,换上绿色运行标牌。f）仪器重新正常使用。5.2修复后设备必须经校准、检定或检测满足要求后方能正常投入使用。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室仪器设备的管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-009版本号：第2版第0次修改页码：第1页；共2页受控状态：受控号：1.目的：保证PCR检测可靠性和准确性。2.范围：PCR检测前质控、样本分离纯化质控、统计学质控。3.职责：由分子实验室工作人员具体操作，负责人负责本落实。4.试剂质检管理：4.1对PCR检测的试剂首先要验收其三证是否齐全（生产许可证、产品注册证、经营许可证）。4.2外包装检查：包装应完整、无污、无损，各标识清晰（厂家名称、品名、批准文号、生产日期、有效期、贮存条件等）。4.3内包装检查：内包装是否有破损、泄漏，内容物是否齐全，是否有相应的使用说明书，是否有肉眼可见的变质等。4.4上述检查在试剂准备区完成，并同时进行记录，记录放在试剂准备区内。4.5试剂盒的性能检查(见试剂性能检查SOP)5.室内质控：5.1.质控品的来源：由试剂公司提供。5.1.质控品处理：质控品与样本同时处理，排列顺序为：临床样本、阴性质控品阳性质控品，具体见室内质量标准操作程序。6.室间质控：必须参加卫生部临床检验中心组织的全国临床基因扩增检验项目的室间质XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室仪器设备的管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-009版本号：第2版第0次修改页码：第2页；共2页受控状态：受控号：量评价。6.1室间质控标本的接收和验收：收到质控血清后由相关人员登记、签字，根据质控标本的有关况明对血清的数量、批号、包装进行验收并将质控标本按要求置-20℃以下保存与标本处理区。6.2质控标本的检测按常规临床标本对待，若需要，检测前先根据说明对质控物进行复溶。6.3室间质控样本必须按实验室常规工作一样进行，由负责常规工作的人员测试，工作人员必须使用实验室的常规检测方法和试剂，不得特殊对待。检测结果须在截止日期前上报。6.4室间质评的检测结果和反馈结果均记录于室间质评记录表，根据反馈结果分析室间质评的状态，如有失控应查找原因，并采取相应的措施。7.实验结果的判断：7.1实验结果合格，即发报告。7.2实验结果不合格，报告实验室负责人，会同有关人员，查找原因，妥善解决。7.3每次检测质控结果须有记录。7.4失控原因及纠正措施须有记录。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序化学试剂的管理及配制操作程序文件编号：PCR-BZCZCX-010版本号：第2版第0次修改页码：第1页；共2页受控状态：受控号：1.目的：保证实验室化学试剂安全使用及正确配制。2.适用范围：基因扩增检测实验室常用化学试剂(NaOH、乙醇、含氯消毒片)。3.管理程序:3.1化学试剂的购买或领用：每次实验前清点试剂，发现试剂存量不足时，及时领用或提交进购申请。发现有试剂过期或明显变质时要立即报废，并将报废试剂妥善处理。3.2化学试剂贮存：临床基因扩增实验室常用化学试剂均置于避光、阴凉、干燥处保存。实验中常用到的一些化学试剂则根据要求保存于不同环境(如预冷乙醇保存于4℃)。PCR试剂贮存于-20℃或以下。3.3化学试剂使用：临床基因扩增实验室常用化学试剂均无毒性或仅有低腐蚀性，故使用时主要应注意分类、分区保存、关注失效日期和使用后的及时清洁等。3.4化学试剂由专人负责管理，未经主任许可不能随意带出实验室。4.化学试剂配制：4%的NaOH配制1.用天平称取4克分析纯的NaOH固体，置于一只三角烧瓶中。2.200ml量桶取100ml双蒸水，缓缓注入盛放NaOH固体的三角烧瓶中。3.摇三角烧瓶使NaOH固体充分溶解。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序化学试剂的管理及配制操作程序文件编号：PCR-BZCZCX-010版本号：第2版第0次修改页码：第2页；共2页受控状态：受控号：4.缓缓倾倒入250ml广口瓶中密封保存备用。75%酒精的配制常规消毒的75%酒精由医院药剂科提供。含氯消毒液的配制1升水加2片含氯消毒片浓度为500mg/L。一般桌面，器具和地面的消毒只要使有效氯达到500mg/L,即可达到消毒作用。如需加大消毒力度，则有效氯浓度加大。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室PCR试剂性能质检程序文件编号：PCR-BZCZCX-011版本号：第2版第0次修改页码：第1页；共2页受控状态：受控号：1.目的：保证每批用于临床实验的试剂的质量良好。2.适用范围：各种用于临床实验的核酸扩增荧光检测试剂。3.操作人：实验室负责人及工作人员。4.质检步骤：4.1收到试剂后，目测试剂是否处在冻存状态。4.2核对试剂品种和数量，检查试剂批号。4.3及时将试剂转入－20℃以下冰箱保存。取出阳性、阴性对照，提取液、稀释液，从传递窗传至Ⅱ区保存。将上述检测核对情况在记录本上登记。4.4最迟在前批次试剂存量尚可维持常规实验一周时，按如下要求对新批号试剂进行效验实验。4.5效验实验要求设置：空白对照、阴性对照、阳性对照各一，阳性标准品梯度（104、105、106、107）。4.6出现如下情况中任何一种的，判断为试剂不合格，不能用于临床检测：a）空白对照和阴性对照出现扩增。如扩增曲线CT值大于35，需重复实验确证试剂污染。b）阳性对照和阳性标准品均未检出，或阳性对照未检出而阳性标准品检出率大幅下降，表示试剂失效或检测灵敏度大幅下降。4.7阳性对照未检出，阳性标准品检测正常，提示样品提取液可能存在问题。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室PCR试剂性能质检程序文件编号：PCR-BZCZCX-011版本号：第2版第0次修改页码：第2页；共2页受控状态：受控号：重复新旧提取液阳性对照实验，确定提取液失效问题。更换提取液后该批试剂方可使用。4.8空白对照无扩增，阴性对照有扩增，排除其他污染可能性后，提取液存在污染可能。单独用提取液点样上机，出现扩增，需更换提取液后方可使用该批试剂。4.9阳性对照检出，阳性标准品未检出或扩增曲线明显系统性CT值4.9偏大3个循环以上。提示阳性标准品存在问题。更换阳性标准品后该批试剂方可投入使用。4.10空白对照、阴性对照无扩增，阳性对照正常检出，阳性标准品导出的标准曲线之斜率（－2.6～－3.4）、截距（36～44）、相关性（﹤－0.98）均在使用范围内，表明该批试剂良好，可以投入临床使用。4.11将实验结果归入记录。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序样本核酸提取操作程序文件编号：PCR-BZCZCX-012版本号：第2版第0次修改页码：第1页；共2页受控状态：受控号：1.目的：规范临床基因扩增检验实验室样本预处理的操作过程。2.范围：经《临床基因扩增检验实验室样本接收程序》确认合格的样本。3.工作流程：血清、胸腹水、脑脊液标本的DNA获取：1）按待测标本数和定量标准品数，取0.5ml离心管做好标记；2）取待测样本血清100ul，胸腹水、脑脊液离心后取沉淀，分别加到1.5ml离心管中；3）分别加入裂解液100ul，裂解液使用前应振摇混悬；4）然后分别加入待测标本或标准品50ul，振荡混悬，室温静置10分钟；12000rpm离心5min，去上清；5）加入150ul洗涤液，振荡混悬，12000rpm离心5min，去上清；6）加入150ul重复洗涤液振荡混，12000rpm离心5min，去上清备用。痰标本处理：标本加入等量的半胱氨酸液化剂或NaOH液化，室温振摇25-30分钟，取0.5ml加入1.5ml离心管中，12000rpm离心10min，吸去上清，沉淀用500ul生理盐水充分混悬，12000rpm离心10min，吸去上清，沉淀中加入裂解液100uL，振荡混悬，室温静置10分钟；（标准品无需NaOH液化处理，直接加入裂解液100ul振荡混匀，室温静置10分钟）。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序样本核酸提取操作程序文件编号：PCR-BZCZCX-012版本号：第2版第0次修改页码：第2页；共2页受控状态：受控号：2）10000rpm离心5min，去上清；加入150ul洗涤液，振荡混悬,10000rpm离心5min，去上清；加入150uL重复洗涤，振荡混悬，10000rpm离心5min，去上清备用。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室一次性离心管和吸嘴的质检程序文件编号：PCR-BZCZCX-013版本号：第2版第0次修改页码：第1页；共2页受控状态：受控号：1.目的：保证每批用于临床实验的离心管和吸嘴的质量良好。2.适用范围：分子实验室。3.操作人：实验室负责人及实验人员。4.离心管质检：目测是否管子有破损、畸形、管盖不严等情况。4.1离心管的PCR抑制物质检:从新购的样品离心管中，抽取3支，采用已知的中、低2个浓度（105和103IU/ml）的HBVDNA质控血清，使用抽取的离心管按程序进行检测，每一浓度双管重复，同时使用已知无PCR抑制物的进口或无DNase和Rnase的离心管作为对照，然后观察测定结果。如果检测待检离心管结果较对照或预期结果明显偏低，如低1--2个数量级，则证明其有抑制物的存在。4.2离心管的密封性质检方法：抽取3支新购离心管，每管准确加入一定量如500ul（对1.5ml离心管）或50ul（对0.2ml离心管）水，在离心机上12000转离心10分钟，看其是否有破损和漏液情况发生，然后按核酸提取程序煮沸或金属浴加热，观察其是否有爆盖或漏液现象，如果有则应进行更换处理。5.带滤芯吸头的质检：5.1对带滤芯吸头密封性的质检：首先制备一个含1%~2%甘油及色素（如甲基橙、红墨水、蓝墨水等）的水溶液，如果吸头的最大体积为100ul，则将加样器吸取体积调至110~120ul，再套上吸头后吸取上述有色液体。如果吸头质量好，则有色液体不应出现在滤芯以上，否则说明滤芯不严。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室一次性离心管和吸嘴的质检程序文件编号：PCR-BZCZCX-013版本号：第2版第0次修改页码：第2页；共2页受控状态：受控号：5.2带滤芯吸头质量的质检：加样器吸取量设至扩增加样所需的体积，使用待评价带滤芯吸头对一份107阳性模板,来回吸取10次（模拟10份阳性样本的吸取），将最后1次的吸取液加至一含扩增反应液的管中，之后，换一个新吸头，连续吸取10份阴性模板,将最后1次的吸取液加至一含扩增反应液的管中,按所用试剂方法进行扩增检测。强阳性样本应为强阳性，阳性弱或出现阴性说明吸头可能含有扩增抑制物。阴性样本应为阴性，出现阳性则表明吸头不能有效地防止气溶胶对加样器的污染。5.3记录质检日期,离心管和吸嘴批号。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室HBV-DNA室内质控程序文件编号：PCR-BZCZCX-014版本号：第2版第0次修改页码：第1页；共3页受控状态：受控号：1.目的：随时了解并控制实验室检测的精密度变化。2.适用范围：核酸扩增荧光定量检测实验室。3.操作人：实验室工作人员。4.操作步骤：4.1低值定值质量控制品4.1.1医院自配HBV阳性血清。4.1.2每管200µl。7管/盒。置于Ⅱ区-20℃冰箱,有效期半年。4.1.3本质控适用于利用基因扩增技术检测HBV-DNA实验室，进行HBV-DNA检测的质量控制，试剂方法评估等。4.1.4质控品定值定值标准来源于国家技术监督局批准的GBW(E)090031所提供的乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBV-DNA）血清标准物质。项目名称平均数（X）IU/ml靶值（LOG）标准差（S）变异系数（CV）X±2S（IU/ml）低值3.63E±0.55.560.264.68％1.10E+05~1.20E+0.64.2质控流程：4.2.1工作人员进入II区,取出中值质控血清,恢复室温,低速离心,放置项目标本最后位置,同样本一起操作。操作程序见标本DNA流程SOP。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室HBV-DNA室内质控程序文件编号：PCR-BZCZCX-014版本号：第2版第0次修改页码：第2页；共3页受控状态：受控号：4.2.2记录结果,每天将结果登记在质控图中,得出质控曲线。4.3.3分析质控图形4.3.3.1如果在X±3s线以外，则为失控，应立即报告有关负责人，迅速查找原因。必要时复测标本，然后方可发出报告，并将失控情况、查找过程及处理结果等详细记录。4.3.3.2如果在X±2s线以外，或出现连续5点以上在一侧等规律变化，均应即使向有关负责人反映，并积极查找原因。但当天的检验结果一般可以发出。4.3.3.3通过观察图形的规律性变化进行误差分析，消除误差来源。曲线漂移：提示有系统误差，准确度发生了一次性的向上或向下改变。这种变化往往是由于一个新的情况引起的。如更换不同批号试剂，启用新批号的质控血清、操作人员的变换等。在找原因时，应重点注意“漂移”前后发生了那些变动的因素。趋势性变化：向下或向上的趋势性变化表明检测的准确度发生了渐渐地变化。这种变化往往是由于一个逐渐改变的因素造成的。如质控血清的降解，试剂效价的降低等。连续多点分布在靶值一侧：目前，一般认为质控血清的检测结果连续5天以上出现在靶值同一侧，则应迅速查找原因，争取尽快使之回复围绕在靶值随机分布的状态。因为按照统计学原理，由纯随机误差造成的这种情况的可能性很小。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室HBV-DNA室内质控程序文件编号：PCR-BZCZCX-014版本号：第2版第0次修改页码：第3页；共3页受控状态：受控号：连续6天以上出现在靶值同一侧可能性小于1.5％。因此凡出现连续5天以上出现在靶值同一侧者均有可能存在非随机误差因素。如结果与靶值偏离并不太大，不会给临床使用带来太大影响时，一般化验报告可以照常填发。4.3.3.4其他规律变化（周期性等）：通过图形的资料对比进行误差分析，消除误差来源。每个月的月底将该月的全部质控血清检测结果的X和s与该批测定的X和s进行比较。如果X发生了变化，说明准确度发生了变化提示有非随机误差存在。如果当月s不同侧表明检测的精密度发生了变化。将使用同一批号质控血清的CT值的X和s按月份列出。如果X逐在月上升，应考虑保存不当造成的试剂效价降低或质控血清本身出现降解。如果各月份X基本一致而s逐月加大，则主要提示常规工作的精密度下降，应重点从操作、管理上找原因。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室检测结果报告和审签管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-015版本号：第2版第0次修改页码：第1页；共2页受控状态：受控号：1.目的：确保结果的准确发放。2.范围：PCR检测试验报告的审核、发放及管理。3.职责：经相关培训后获得上岗资格的工作人员方有权审核签发检验报告。4.工作流程：4.1报告的要求：检测报告应准确、清晰、客观。4.2报告的形式:见各检测项目SOP文件规定。4.3实时荧光PCR测定时，其检测数据要经过分析，避免因非特异性荧光而造成假阳性,根据质控品判断PCR扩增的有效性，只有当质控品的扩增结果符合有关项目SOP条件时，才可发出报告,否则应重新测定。4.4检测项目其结果报告HBV-DNA以每毫升活力单位（IU／ml）报告，如结果高于测定方法线性范围上限，则对样本稀释后再测，结果乘上稀释倍数；如结果低于方法的测定范围下限，则报告小于测定范围下限，不能报告为“0”、“阴性”或其它各种形式的结果。4.5服务台工作人员凭“取检验报告单凭证领取单”（或发票）发放检验报告。4.6当临床科室医生要求电话报告结果时，应先确认对方身份，核对其所查询的病人姓名、病区床号等情况，方可报告，并明确告知对方，实验的最终结果以检测报告单为准。4.7当患者要求电话报告结果时，应让患者提供病人检验报告单凭证号码后XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室检测结果报告和审签管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-015版本号：第2版第0次修改页码：第2页；共2页受控状态：受控号：方可告知对方其检测结果，并需明确告知对方，实验的最终结果以检测报告单为准；不得在无有效证据的情况下以任何方式提供诸如某人做过某项检查和/或检测结果的信息（包括提示性、暗示性语言）。当需邮寄报告时，应由患者填写地址及邮政编码等，并作记录。本实验室暂不提供其它的报告方式。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室试剂、耗材的购买和管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-016版本号：第2版第0次修改页码：第1页；共2页受控状态：受控号：1.目的：规定试剂购买原则、验收的程序和试剂的正确贮存。2.范围：适用于实验室所购的诊断试剂盒、实验耗材。3.职责：3.1本程序由实验室工作人员一个月统计一次试剂采购订单，提交给负责人，负责人审核好后，开始订货。3.2本程序的改动，可由任一使用本程序的工作人员提出，经论证其合理性后，报经科主任批准签字后实施。4.工作程序：4.1试剂的购买和管理4.1.1试剂购买原则：试剂的购买须本着“质优价廉”进行，所购基因诊断试剂必须三证齐全（生产许可证、产品注册证、经营许可证），并能与7500Plus荧光定量PCR检测仪相配套。4.1.2试剂购买程序：1）试剂厂家的确定：购买时首先考虑中标试剂。中标厂家无试剂情况下考虑操作方便、质量好的厂家，提交西药库，由西药库决定购买。2）试剂厂商的变更：为保证试剂使用的稳定性，原则上一年内不变更试剂厂商，如在使用过程中发现质量问题，由室负责人向科主任提出申请，交试剂审核小组讨论决定。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室试剂、耗材的购买和管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-016版本号：第2版第0次修改页码：第2页；共2页受控状态：受控号：4.1.3试剂的验收：供货商送来试剂后由科专门人员和项目操作人员共同验收，在厂家的供货清单上签字，项目操作人员负责试剂质量验收（内外包装），科专门人员核对试剂的数量和价格，供货清单交室试剂管理人员保管，试剂验收后登记。4.1.4试剂贮存：试剂登记后，及时放入试剂贮存区的冰箱，保存条件按说明书规定进行。4.1.5试剂的质检：按试剂质检SOP进行。4.2实验耗材的购买和管理4.2.2购买：由实验室负责人填写申请，按需提出所购耗材的品名、规格、数量，由科室主管采购人员交院设备科购买。4.2.3验收：消耗品购进后由科相关人员验收。核对数量、规格，查验外包装是否破损，如发生破损或其它质量问题，给予退回。4.2.4贮存：消耗品按要求存入各区指定位置。4.3项目具体负责人发现试剂或耗材少于一定的数量时（不足2周使用时），应向室负责人提出，以便及时购买；使用过程中发现试剂有质量问题时向室负责人提出，由室负责人核实后采取措施。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室生物防护和清洁废弃物处理程序文件编号：PCR-BZCZCX-017版本号：第2版第0次修改页码：第1页；共4页受控状态：受控号：1.目的：对各种危险因素采取有效的控制措施，预防实验室中存在的污染源对实验室、实验人员和环境的污染。2.范围：分子实验室全体人员。3.职责：所有工作人员必须在工作中严格遵守本程序各项措施规定。4.工作流程：临床实验室工作人员应知晓在实验工作中存在的污染途径和防护措施。4.1感染途径：4.1.1空气传播：其他病原体及化学物的气溶胶。4.1.2直接接种：工作中偶然的针刺、碎玻璃划伤直接引起传染。4.1.3皮肤、粘膜接触：临床标本中的感染源通过破损皮肤，粘膜接触造成感染。4.1.4化学物质：溴化乙锭（EB）、焦碳酸二乙酯（DEPC）、丙烯酰胺有致癌性。若处理的扩增片段来自潜在的肿瘤基因，应考虑采取保护措施。4.2预防措施4.2.1来自所有病人的血液、体液、痰等标本都被认为是具有传染性。标本采集、运送过程中，应保持容器完好，无泄漏。完成检测后及时处理。4.2.2处理标本的工作人员都应戴上双层手套，穿防护服，戴帽子、口罩。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室生物防护和清洁废弃物处理程序文件编号：PCR-BZCZCX-017版本号：第2版第0次修改页码：第2页；共4页受控状态：受控号：4.2.3实验过程中若接触血液或其它标本、毒物等后必须立即彻底清洗。4.2.4在实验过程中，病人标本或试剂不慎溅入眼内应立即用清水冲洗。4.2.5实验过程中在使用针具等锐器时，尽量小心防止受伤。若被锐器刺破时，应立即脱下手套，尽量挤压伤处，使血流出，然后用碘酒、酒精消毒，必要时进行预防补救措施。4.2.6在实验过程中病人标本（血液、体液）外漏时，应立即用10％次氯酸钠消毒，再用75％酒精擦净消毒。4.2.7实验完毕离开时，应脱下所有该实验区个人防护装备。4.2.8标本处理区应备有急救包,包内存有75%酒精,复合碘、棉签、创口贴等。5.实验室的清洁:5.1PCR实验室人员要明确造成污染的来源有前一次PCR产物、检测样本及阳性质控物，标准品。PCR实验室人员要明确造成污染的途径有空气，吸液嘴，移液器的气腔、外表，标本处理过程中的开盖闭盖，手套，夹取标本用的镊子，标本处理的公用设备如离心机、样本架等。5.2离心管在使用前要经高压消毒灭菌。5.3所有灭好菌的物品先放置在试剂准备区，在灭菌效期内由传递窗传至各区。5.4工作人员工作结束后，实验台面均应用10%次氯酸钠清洁液的抹布擦拭，XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室生物防护和清洁废弃物处理程序文件编号：PCR-BZCZCX-017版本号：第2版第0次修改页码：第3页；共4页受控状态：受控号：再用75%乙醇清洁，最后用清水擦拭。5.5移液器的外表每天用75%乙醇清洁一次，加样器的气腔每月用75%乙醇浸洗一次。5.6夹标本用的镊子应浸泡在75%乙醇中，使用过的试管架、净化台及操作台面用10%次氯酸钠擦拭1遍后，再用75%酒精擦拭1遍，然后用紫外灯至少照射60min。5.7已灭菌的离心管在取用时须用镊子取，不允许用手去拿。5.8各区实验结束后，应做好各区的清洁工作，并将各区的废弃物、垃圾带出实验区，打开该区紫外灯进行紫外线消毒60分钟，作好实验后处理记录。5.9每天须对各区的地面进行清洁，各区地面的清洁抹布须严格分开使用，清洁顺序严格按一区到三区顺序进行。5.10污染的处理：实验中若在操作台面发生液体外泻，应立即用浸有10%次氯酸钠溶液的卫生纸覆盖污染处，半小时后再用软布浸水擦拭干净。5.11实验用过Tip头、离心管的处理见废弃物处理程序。5.1210%次氯酸钠每月新配一次。5.13对使用过的一次性手套，应将其反一面后再丢入专用拉圾袋中。5.14对以上所有的生物垃圾在移交给技工时，应作好交接记录，确保焚烧。6.实验室废弃物处理:XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室生物防护和清洁废弃物处理程序文件编号：PCR-BZCZCX-017版本号：第2版第0次修改页码：第4页；共4页受控状态：受控号：6.1实验过程中的废液缸应装有足量浓度的施尔康消毒液，在实验完成后将废液缸中弃置物转入密闭垃圾桶袋中。每天更换废液缸里面的施尔康消毒液，并保证用量为废液缸内总液量的1/3左右。6.2临床标本，扩增后产物及一次性使用物品等实验材料，实验完毕密封包装进行焚烧。6.3检查操作台面和设备内是否有遗漏的吸头，试管等。如有，捡起置于施尔康消毒液废液缸内，并立即用1%次氯酸钠对可能污染区域擦拭2-3遍，再用75%酒精擦拭1遍，最后用清水擦拭。6.4扩增后的反应管严禁在实验室内打开。6.5手套、口罩等废弃物投入废物桶，交接给专人处理并做好登记。6.6实验区域的所有垃圾袋以黄色为标志，各区域垃圾在实验区缓冲间内封口，实验完毕后移出各实验区域，在公共走廊内移交专人处理，并做好记录。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室记录管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-018版本号：第2版第0次修改页码：第1页；共3页受控状态：受控号：1.目的：保证试验资料的原始性、真实性、可靠性，便于回顾。2.范围：检验过程产生的数据资料，诸如病人信息资料、样本资料、检测数据、检验结果等。3.职责：检测人员对记录负责，室负责人对管理措施的落实和监督负责。4.工作流程：4.1试验记录分为两个部分：4.1.1检测前的记录：病人信息资料、样本资料的书面记录。4.1.2检测结果的电子记录。4.1.3记录的种类：PCR标本接收记录、临床拒收标本记录、PCR检验流程记录、PCR结果记录、PCR质控记录、抱怨记录、室间质量评价记录、试剂和消耗品的质检记录、应急记录、人员培训记录。4.2记录方法：4.2.1接受标本记录：以书面形式记录病人信息、样本信息、是否保存，同时对样本作标识，记录人签名；检验时，将标识的样本、记录本带入样本处理间处理。4.2.2PCR扩增检测记录：a）记录文件必须保存在非系统分区中，如D盘、E盘等。保存路径要清晰、便捷、易查找。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室记录管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-018版本号：第2版第0次修改页码：第2页；共3页受控状态：受控号：b）文件夹目录结构要求层次感分明：一整年的实验结果均保存在一个年度文件夹里，如“2019年”文件夹；每个年度文件夹又包含12个月文件夹，如“9月”、“10月”，每天的实验结果就保存在当月文件夹里。c）SDS文件保存时以当天日期命名，如2019年9月10日的保存为20190910HBV，20190910XB。d）若某天进行了多次实验，须保存多个SDS文件，命名时在后面以01、02、03等字母标识，如2019年9月10日做的两次实验，分别保存为20190910HBV01和20190910HBV02，20190910XB01和20190910XB02。e）为了防止储存实验结果的电脑发生系统崩溃、硬件故障等问题导致实验结果丢失、无法查询等情况，每个月的实验结果记录文件都要用移动存储设备（如U盘、移动硬盘等）拷贝备份；如“2019年实验结果备份”。4.2.3电子保存的软件备份要求：a）保存周期：每一个月进行一次电子报告的软件备份；安排在每月的最后一个工作日完成。备份路径为D盘PCR备份。b）备份注明：备份由分子实验室人员进行。4.3记录的归档：4.3.1PCR标本接收记录、临床拒收标本记录、PCR检验流程记录、PCR结果记录装订成册。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室记录管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-018版本号：第2版第0次修改页码：第3页；共3页受控状态：受控号：4.3.2记录保存期为3年，科室统一保管。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室抱怨和应急处理程序文件编号：PCR-BZCZCX-019版本号：第2版第0次修改页码：第1页；共4页受控状态：受控号：1.目的：为避免因仪器设备发生故障和试剂盒发生质量问题而影响到临床检测报告的及时性和准确性，特制定本程序。保证对抱怨的正确处理，提高工作质量。2.范围：来自于患者，临床医护人员和/或实验室工作人员针对检测结果质量、服务质量和/或实验室管理等问题的投诉和/或抱怨。注：本程序适用于检验科权限内能处理解决的问题。科室不能妥善解决的，移交医院医务处，遵循医务处处理程序和办法。3.职责：3.1实验室负责人负责抱怨的处理，必要时应会同科主任采取更进一步的措施。3.2对于外部抱怨，任何一个工作人员不得推卸，须负责将抱怨人领到实验室负责人处或科主任处，对电话抱怨须作记录并及时报告负责人。4.工作流程：4.1抱怨的接受：执行者在接受抱怨时，应记录抱怨者姓名、地址、联系方式、抱怨内容（必要时首先稳定抱怨者情绪）。4.2抱怨的处理：4.2.1能当时处理的抱怨应给予及时解决，记录处理意见及结果。4.2.2不能当即答复的报怨应约定反馈时间，同时为了防止报怨的扩大化，根XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室抱怨和应急处理程序文件编号：PCR-BZCZCX-019版本号：第2版第0次修改页码：第2页；共4页受控状态：受控号：据情况尽快召集有关人员处理。4.2.3抱怨的处理以抱怨者的满意为目的，但必须以遵重科学，遵重事实为原则，在不违背科学原则，医疗行为规范的基础上，争取抱怨者最大程度的理解。4.3抱怨处理的方式：4.3.1患者对服务态度抱怨的处理方式：a）接到抱怨后，由室负责人责成相关人员向患者致歉。b）对患者提出的合理要求及时进行处理。c）调查事情原委，根据调查结果对相关责任人进行处罚。d）记录抱怨及其处理结果。4.3.2患者对结果准确性抱怨的处理方式a）为患者展示原始实验数据。b）向患者解释相关实验程序和可能临床情况，帮助患者解除疑虑。c）如确有实验结果不符合有效性要求或出现错误，则应及时纠正错误，重新实验以得到准确结果。同时由室负责人向患者致歉以争取得到其谅解，按有关条例对责任人进行相应处罚，并记录。4.3.3医生对检测结果和临床诊断的符合率抱怨的处理方式a）针对医生抱怨的检查项目进行从实验前到实验后的全程调查，查找是否存在影响结果的因素，并形成书面报告。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室抱怨和应急处理程序文件编号：PCR-BZCZCX-019版本号：第2版第0次修改页码：第3页；共4页受控状态：受控号：b）就调查发现的问题进行针对性解决。c）与医生建立定期交流机制，定期了解临床使用情况和对临床作出解释。4.3.4医生对结果发放时效性抱怨的解决方式a）严格按承诺时间发放临床报告。b）在与医生交流会上就报告发放过程及时间作出解释，获取临床对结果报告时效性的理解。4.4 抱怨处理程序：a）接到抱怨。b）记录抱怨。c）提出针对具体抱怨的处理方法。d）将处理方法交室负责人审核。e）征求抱怨方对处理方法的意见。f）执行解决方案。g）记录最后的处理结果。5.应急处理：5.1为避免因仪器设备发生故障和试剂盒发生质量问题而影响到临床检测报告的及时性和准确性，严格遵循下列程序。5.2工作程序：XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室抱怨和应急处理程序文件编号：PCR-BZCZCX-019版本号：第2版第0次修改页码：第4页；共4页受控状态：受控号：5.2.1实验室负责人接到仪器设备故障的报警后，立即现场确认异常情况的性质和故障程度并及时排除。5.2.2仪器设备故障本室不能解决的，应及时通知有关设备维修人员或供应商，具体程序见仪器设备管理程序。对于发生故障的仪器设备，及时维修的同时，采取以下处理办法。5.2.3有满足使用要求的替用设备的，启用替用设备。5.2.4可借用其他部门仪器设备时，核实该设备的使用状态良好后可借用。5.2.5替用、借用或备用设备的使用在满足质量要求的同时，必须同时满足实验室管理措施（特别是防污染）的要求。5.2.6试剂盒质量发生问题，经核实后，及时通知供货商更换另一批次试剂，使用前需先作质量检测，合格后方可使用。5.2.7仪器设备故障或试剂质量问题不能得到解决，预期将会影响到检测报告的及时发出，可将标本送至其它实验室检查（该实验室同样应为获同类认准的PCR检测实验室）；如己影响到报告的及时发出，应向病人或相关病区公告，取得病人和医生的谅解。5.2.8影响到检测报告的情况，应在应急处理登记表作记录。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室保密制度文件编号：PCR-BZCZCX-020版本号：第2版第0次修改页码：第1页；共1页受控状态：受控号：1.目的：为了确保实验室工作的有序开展；保护病人的隐私权，防止不必要的医患纠纷，特制定此制度。2.本程序的改动程序：本程序的改动，可由任一使用本程序的工作人员提出，经论证其合理性后，报经科主任批准签字后实施。3.适用范围：本实验室所有人员应熟知并遵守本程序。4.职责：4.1实验室所有原始资料包括病人的原始化验单、实验原始记录及总汇表应各自归档保存于专柜中。所有病人资料和实验检测记录非经许可，一般人员不可查询或借阅，特殊情况时必须在科主任或本室负责人同意的情况下方可查询。4.2当临床科室要求电话报告结果时，应先确认对方身份，核对其所查询的病人姓名、病区床号（或检验报告单凭证号码）情况后，由室负责人或其授权者报告结果，并明确告知对方，实验的最终结果以检测报告单为准。4.3实验室所有标本建挡保存，放置在-20℃以下冰箱，并建立标本挡案，冰箱上锁，科研所需保留的核酸模板由使用者自行保管，但不得用于其它用途。XXX医院XX科分子生物学检验标准化操作程序分子实验室人员实习、培训和进修管理程序文件编号：PCR-BZCZCX-021版本号：第2版第0次修改页码：第1页；共1页受控状态：受控号：1.目的：保证分子实验室有足够的技术力量和发展潜力。2.范围：分子实验室人员培训。3.职责：分子实验室负责人负责督促指导，由实验室全体工作人员实施。4.工作计划：4.1实验室现有上岗证5人，计划培养2人。4.2待培训人员在分子实验室负责人辅导下，先完成分子生物学基础理论、检验技术的理论学习。（自学或有机会参加继续教育项目）4.3新培训的人员需本科或研究生毕业。4.4教材为《临床基因扩增检验技术》，李金明主编。4.5有理论基础后，在分子实验室负责人辅导下，参加分子实验室轮转。4.6严格遵守实验室管理文件的规定。4.7严格按分子实验室SOP规定正规操作，不得更改。4.8争取参加上级部门专业培训，取得上岗证。4.9经过学习的人员有责任指导实习生的理论