血液常用检查一

关于血液常用检查一红细胞计数一血红蛋白测定二红细胞形态检查三第二节血液常用检查（一）第2页,共71页，星期六，2024年，5月教学目标掌握红细胞计数、血红蛋白方法熟悉红细胞形态特点了解红细胞计数、血红蛋白测定临床意义第3页,共71页，星期六，2024年，5月红细胞的发育过程

造血干细胞→早幼红细胞→中幼红细胞→晚幼红细胞脱核→网织红细胞→成熟红细胞EPO红系祖细胞→原始红细胞（有丝分裂）48h第4页,共71页，星期六，2024年，5月成熟红细胞

铁→铁代谢原卟啉

→胆色素代谢珠蛋白→蛋白质代谢衰老红细胞红细胞的发育过程120天第5页,共71页，星期六，2024年，5月6

检测方法1.手工显微镜法2.血液分析仪法一、红细胞计数第6页,共71页，星期六，2024年，5月71.手工显微镜法（1）血液分析仪的校正（2）适用基层医疗单位和分散就诊患者（3）费时、重复性差，准确性取决操作者技术水平

2．血液分析仪法

操作简便、重复性好，适用大批量集中检测准确性取决于仪器性能及工作状态，定期校准、质控方法学评价第7页,共71页，星期六，2024年，5月手工显微镜法8定义：用等渗稀释液将血液稀释一定倍数后，滴入改良Neubauer计数板，在显微镜下计数一定范围内的红细胞数，经换算即可求得每升血液中的红细胞数。

第8页,共71页，星期六，2024年，5月9改良牛鲍计数板计数板第9页,共71页，星期六，2024年，5月第10页,共71页，星期六，2024年，5月压线细胞的计数原则：数左不数右，数上不数下第11页,共71页，星期六，2024年，5月12血细胞计数室各计数区的计数对象、范围和单位换算计数区域计数细胞种类换算方式（以细胞个数/L计）四角4个大方格

白细胞

N/4×10×稀释倍数×106四角及中央5个中方格

红细胞、血小板

N×5×10×稀释倍数×106两侧计数室四角及中央

嗜酸性粒细胞、体

N×稀释倍数×1065个大方格共10个大方格

腔液细胞、精子第12页,共71页，星期六，2024年，5月13红细胞稀释液组成与作用稀释液组成作用备注Hayem液

NaCl、Na2SO4、HgCl2

调节渗透压、增加红细胞悬浮性和防腐作用

高球蛋白血症时，蛋白质沉淀致红细胞凝集枸橼酸钠稀释液NaCl、枸橼酸钠、甲醛NaCl和枸橼酸钠调节渗透压

，枸橼酸钠具抗凝，甲醛防腐生理盐水生理盐水急诊时用1%甲醛生理盐水甲醛、生理盐水急诊时用第13页,共71页，星期六，2024年，5月141.准备计数板2.加稀释液：2ml3.加血：10μl混匀4.充池5.计数6.计算：红细胞数=N/5*25*10*200*106/L结果报告方式：X.X×1012/L红细胞计数操作第14页,共71页，星期六，2024年，5月15成年：男性（4～5.5）×1012/L

女性（3.5～5.0）×1012/L新生儿：（6.0～7.0）×1012/L参考值第15页,共71页，星期六，2024年，5月161.分析前质量控制患者准备、标本采集、存储温度和时间2.分析中质量控制

计数误差（技术误差和固有误差）、白细胞影响3.分析后质量控制结合临床资料质量控制第16页,共71页，星期六，2024年，5月血红蛋白(血色素，Hb或HGB)组成二、血红蛋白测定珠蛋白：4条，种属特异性亚铁血红素：4个，无种属特异性第17页,共71页，星期六，2024年，5月

珠PrNNFeNN

亚铁血红素结构示意图O2第18页,共71页，星期六，2024年，5月HbA：

α2β2

成人占95%以上HbA2：α2δ2

成人约占2～3%HbF(胎儿Hb)：α2γ2

成人1%以下每个Hb分子由2条α类肽链和2条非α

类肽链组成，每条珠蛋白肽链含有1个亚铁血红素第19页,共71页，星期六，2024年，5月HbO2(氧合血红蛋白)各种血红蛋白衍生物(据铁原子第六配位键的结合情况)Hbred(还原血红蛋白)HbCO(碳氧血红蛋白)Hi(高铁血红蛋白)SHb(硫化血红蛋白)主要成分少量与氧结合未结合与CO结合Fe2＋→Fe3＋与S结合第20页,共71页，星期六，2024年，5月21氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb）法叠氮高铁血红蛋白(HiN3)法碱羟血红蛋白法叠氮高铁血红蛋白测定法溴代十六烷基三甲胺血红蛋白测定法（CTAB）检测方法第21页,共71页，星期六，2024年，5月一.原理Hb＋CN－氧化HiCN为棕红色，最大吸收峰540nm。根据标本的吸光度可知Hb浓度。HiCNHi氰化高铁血红蛋白测定法(HiCN法)注：硫化血红蛋白(SHb)不能被转化第22页,共71页，星期六，2024年，5月氰化钾0.05g高铁氰化钾0.2g磷酸二氢钾0.14g非离子表面活性剂1.0

ml蒸馏水加至1000

ml二.试剂HiCN转化液(文齐液)调pH7.0～7.4，置棕色玻璃瓶中密封保存。氧化调节pH促溶,防混浊提供CN-氰化高铁血红蛋白测定法(HiCN法)第23页,共71页，星期六，2024年，5月三.方法4.实际工作中，可用HiCN参考液，按生化方法绘制标准曲线，或求出K值后计算。

K＝∑Hb（g）/∑A

1.

5.0

ml

Hb转化液＋血20ul,混匀,静置5min。2.分光光度计比色，波长540nm，以空白转化液调零，测定吸光度“A”。3.如用符合WHO标准的光度计，则可据“A”直接计算Hb浓度。氰化高铁血红蛋白测定法第24页,共71页，星期六，2024年，5月25血红蛋白浓度计算公式：Hb(g/L)=Aג540HiCN/44×64458/1000×251

=A×367.7Aג540HiCN：测定管吸光度44：毫摩尔消光系数64458/1000：1mmol/LHb溶液中所含Hb克数251为稀释倍数第25页,共71页，星期六，2024年，5月三.方法4.实际工作中，可用HiCN参考液，按生化方法绘制标准曲线，或求出K值后计算。

K＝∑Hb（g）/∑A

1.

5.0

ml

Hb转化液＋血20ul,混匀,静置5min。2.分光光度计比色，波长540nm，以空白转化液调零，测定吸光度“A”。3.如用符合WHO标准的光度计，则可据“A”直接计算Hb浓度。氰化高铁血红蛋白测定法第26页,共71页，星期六，2024年，5月Hb(g/L)A500.1281000.2651500.3852000.523K=∑Hb/∑A=500/1.301=384.32Hb=KA氰化高铁血红蛋白测定法第27页,共71页，星期六，2024年，5月1.KCN为剧毒药品，防污染。2.HiCN转化液不能存于塑料瓶中。否则CN-下降，结果偏低。3.分光光度计应定期校正并使用配套的比色杯。4.标准曲线或K值应定期校正。四.注意事项氰化高铁血红蛋白测定法第28页,共71页，星期六，2024年，5月29血红蛋白SDS-HbSDS540nm血红蛋白浓度吸光度十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb）法第29页,共71页，星期六，2024年，5月方法学评价HiCN法SDS-Hb法优点：操作简便；显色快，结果稳定。缺点：氰化钾有剧毒；高白细胞或高球蛋白血症等可致浑浊；

HbCO转化慢。参考方法优点：操作简单；结果稳定；无公害。缺点：摩尔消光系数未确定；破坏白细胞；质量差异大

。次选方法第30页,共71页，星期六，2024年，5月如何采用SDS-Hb法进行血红蛋白测定？1.HiCN法绘制标准曲线2.SDS-Hb法标准工作曲线绘制1)取4份不同浓度抗凝血或溶血液用HiCN法测定吸光度，并求出其Hb浓度。2)再用SDS-Hb法测定4份标本的吸光度。3)以4份标本Hb浓度为横坐标，SDS-Hb法测得的吸光度为纵坐标，绘制标准工作曲线。第31页,共71页，星期六，2024年，5月32

分析前质量控制：同红细胞计数分析中质量控制技术误差：稀释倍数、分光光度计波长、光缝、比色杯光径需校正HiCN转化液：棕色玻璃瓶HiCN参考液：关键质控物：室内质控分析后质量控制：同红细胞计数质量控制第32页,共71页，星期六，2024年，5月33①成年：男性：120～160g／L；女性：llO～150g／L。②新生儿：170～200g／L。③老年(70岁以上)：男性：94～122g／L；女性87～112g／L。

参考值第33页,共71页，星期六，2024年，5月34①轻度贫血，成年男性Hb＜120g/L，成年女性＜110g/L；②中度贫血＜90g/L；③重度贫血＜60g/L；④极度贫血＜30g/L。临床意义第34页,共71页，星期六，2024年，5月35三、红细胞形态检查红细胞大小、形态、染色和内涵物的是否异常第35页,共71页，星期六，2024年，5月

1．显微镜分析法采用人工显微镜法血涂片染色观察，是仪器法校准的参考方法和检测的复核方法。

2．计算机图像分析建立统计模型，以正常红细胞形态为参比、作出分析，可用于与红细胞形态变化疾病的辅助诊断。3.血液分析仪法提供红细胞数量及其他相关参数，对异常结果报警，但不能提供确切信息，需用镜检血涂片核实。

检测原理和方法学评价第36页,共71页，星期六，2024年，5月1.有合格的血液细胞形态检验人员2.选择细胞分布均匀区域进行镜检3.注意完整规范的检查顺序低倍镜细胞分布和染色油镜细胞形态,是否存在其他异常细胞4．减少人为影响因素全片浏览质量保证第37页,共71页，星期六，2024年，5月38第38页,共71页，星期六，2024年，5月39正常红细胞双凹圆盘形大小均一，平均7.2μm(6.7-7.7μm)；淡粉红色，Hb充盈良好，中央部位为生理性淡染区，大小约为直径的1／3；胞质内无异常结。第39页,共71页，星期六，2024年，5月40第40页,共71页，星期六，2024年，5月外周血红细胞形态变化红细胞大小异常小、大、巨、大小不均红细胞性状异常球、椭圆、靶、口、镰、棘、钝锯齿、泪滴、裂片、形态不整血红蛋白充盈度与着色异常低色素、高色素、嗜多色、着色不一红细胞内异常结构嗜碱性点彩、豪焦小体、卡波环、寄生虫、疟色素红细胞排列异常缗钱状形成、自凝现象有核红细胞第41页,共71页，星期六，2024年，5月1.红细胞大小异常(1)小红细胞：指直径小于6μm的红细胞。提示血红蛋白合成障碍，见于缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血。(2)大红细胞：指直径大于l0μm的红细胞，常见于巨幼细胞性贫血，也可见于溶血性贫血、恶性贫血等。第42页,共71页，星期六，2024年，5月第43页,共71页，星期六，2024年，5月(3)巨红细胞：指直径大于15μm的红细胞。最常见于巨幼细胞性贫血。(4)红细胞大小不均：指同一患者的红细胞之间直径相差一倍以上。大者红细胞直径可达12μm，小者直径仅2.5μm。常见于严重的增生性贫血，巨幼细胞性贫血时尤为明显第44页,共71页，星期六，2024年，5月第45页,共71页，星期六，2024年，5月第46页,共71页，星期六，2024年，5月2．红细胞形态异常

(1)球形细胞：该红细胞在血液中为球形，而在涂片上则显示细胞中心着色深浓，体积较小，有球形之立体感。(2)椭圆形细胞：红细胞呈椭圆形、杆形，两端钝圆，长轴增大，短轴缩短。见于遗传性椭圆形细胞增多症、大细胞性贫血；偶见于缺铁性贫血、骨髓纤维化、巨幼细胞贫血、镰形细胞性贫血。正常人血液中约占l％，但不超过15％。第47页,共71页，星期六，2024年，5月第48页,共71页，星期六，2024年，5月(3)靶形细胞：红细胞中心部位和细胞周缘染色较深，其间为不染色的苍白区环，形如射击之靶。常见于各种低色素性贫血，尤见于珠蛋白生成障碍性贫血、HbC病，也见于阻塞性黄疽、脾切除后状态。

(4)口形细胞：红细胞中央有裂缝，中心苍白区呈扁平状，颇似张开的口形或鱼口。常见于口形红细胞增多症，小儿消化系统疾患引起的贫血，也可见于乙醇中毒、某些溶血性贫血及肝病患者等。正常人偶见(<4％)。第49页,共71页，星期六，2024年，5月第50页,共71页，星期六，2024年，5月第51页,共71页，星期六，2024年，5月(5)镰形细胞：红细胞外形呈镰刀状、线条状。镰状细胞贫血(HbS-S，HbS-C)和镰状细胞特性(HbA-S)的血标本，在缺氧的条件下，有大量镰细胞。(6)棘形细胞：红细胞表面有针尖状突起，其间距不规则，突起的长度和宽度可不一。多见于遗传性或获得性β-脂白缺乏症，可高达70％～80%；也可见于脾切除后、酒精中毒性肝脏疾病、尿毒症。第52页,共71页，星期六，2024年，5月第53页,共71页，星期六，2024年，5月第54页,共71页，星期六，2024年，5月(7)新月形红细胞：红细胞残缺不全，体积大，状如新月形，直径约20μm。见于阵发性睡眠性血红蛋白尿。(8)泪滴形细胞：成熟红细胞形如泪滴或梨状。多见于贫血、骨髓纤维化症时，偶见于正常人。第55页,共71页，星期六，2024年，5月第56页,共71页，星期六，2024年，5月

(9)缗钱状形成：红细胞表面电荷发生改变，而使其互相连接如缗钱状。(10)裂红细胞：为红细胞碎片或不完整的红细胞。见于弥散性血管内凝血、微血管病性溶血性贫血、重型珠蛋白生成障碍性贫血、巨幼细胞性贫血、严重烧伤。正常人血涂片中裂片细胞小于2%。第57页,共71页，星期六，2024年，5月第58页,共71页，星期六，2024年，5月(11)红细胞形态不整指红细胞形态发生各种明显改变，出现不规则的奇异形状，如豆状、梨形、蝌蚪状、麦粒状和棍棒形等。此种细胞在某些感染或严重贫血时多见，最常见于巨幼细胞性贫血。第59页,共71页，星期六，2024年，5月3．染色异常(1)正常色素性：见于正常人外，还见于急性失血、再生障碍性贫血和白血病等。(2)低色素性：红细胞的生理性中心浅染区扩大，提示其血红蛋白含量明显减少。常见于缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、