1-2ANA检测策略课件

抗核抗体（ANA）实验室检测策略1-2ANA检测策略抗核抗体检测策略多特异性检测如：间接免疫荧光法1. 初筛实验结果单特异性检测如：ELISA,Immunoblot2. 确认/分型实验1-2ANA检测策略美国风湿学会(ACR)立场声明HEp-2细胞包含大约100至150种自身抗原

其它初筛方法仅具有少量自身抗原(8-10)…大约35%SLE患者和IFT-ANA阳性患者在其它初筛实验中为阴性结果…建议：•IFT-ANA仍然为ANA检测的金标准!•医院或商业诊断所应用其它ANA检测方法时，必须要求为临床大夫提供足够的数据证明其它ANA检测方法与IFT比较具有同样或更高的敏感度和特异性.•实验室在ANA报告当中必须注明ANA检测方法.EUROIMMUN1-2ANA检测策略ANA筛查:

间接免疫荧光法(IFT)

抗原谱完整(细胞核、细胞浆)

检测ANA的金标准，具有很高的敏感性和特异性

基质组合:HEp-2细胞+灵长类肝1-2ANA检测策略HEp-2细胞+灵长类肝- 确认IIF的荧光模型，如

-肌动蛋白

-核糖体P蛋白- 区分IIF的荧光模型，如： -着丝点

核点

-SS-A/-B

Sm/RNPKu- 还可获得其它结果，如： -ANCA

-肌内膜/谷氨酰胺转移酶1-2ANA检测策略确认IIF的荧光模型

HEp-2细胞灵长类肝肌动蛋白核糖体P蛋白1-2ANA检测策略区分IIF的荧光模型

HEp-2细胞灵长类肝着丝点核点1-2ANA检测策略

区分IIF的荧光模型

HEp-2细胞灵长类肝着丝点和核点1-2ANA检测策略区分IIF的荧光模型

HEp-2细胞相似的颗粒型–很难区分Sm/RNPSS-A/SS-BKu1-2ANA检测策略区分IIF的荧光模型

灵长类肝区分荧光模型–容易区分Sm/RNPSS-A/SS-BKu1-2ANA检测策略区分IIF的荧光模型

Sm/RNPSS-A/SS-BKu灵长类肝HEp-2细胞1-2ANA检测策略灵长类肝:结果肌内膜pANCAEUROIMMUN1-2ANA检测策略ANA检测：分型实验

ELISA:

- 单特异ELISA：适合大批量标本的检测

- ENA谱：各种高纯抗原的组合

欧蒙斑点法/欧蒙印迹法:

-ENA谱：各种高纯抗原的组合

免疫印迹法:

-适合用于区分一些特殊抗体(如RNP：70K,A,C)

-适合检测针对目前还不能纯化的抗原的抗体(如Ku)1-2ANA检测策略ELISA:ENA谱1-2ANA检测策略欧蒙斑点法:ENA谱1-2ANA检测策略欧蒙印迹法:ENA谱1-2ANA检测策略免疫印迹法：

HEp-2细胞抗原提取物1-2ANA检测策略欧蒙推荐的ANA稀释方案1-2ANA检测策略欧蒙ANA—IIF稀释方案欧蒙ANA间接免疫荧光法检测系统的起始稀释度为1:100。即该检测系统的正常参考范围为1:100。梯度稀释时的稀释因子为1:3.2。推荐每个标本至少平行做两个稀释度：1:100和1:1000。由于不同厂家ANA检测系统的起始稀释度和稀释因子不同，因而不同厂家的ANA滴度结果不能直接进行比较。1-2ANA检测策略欧蒙实验室ANAIIF的研究结果起始稀释度1:100时：正常人血清中ANA95％以上为阴性，ANA阳性的抗体滴度明显低于风湿性疾病患者。多数风湿性疾病患者血清中ANA滴度大于1:100， 但大于1:32000以上的抗体滴度也较少见。例数抗体滴度1:100风湿性疾病患者15000份正常人1:10000EUROIMMUN1-2ANA检测策略欧蒙实验室推荐的ANA稀释方案起始稀释度：1:1001:1,000

抗体滴度：1:1001:1,000

1:3201:3,200 1:10,000

报告结果抗体浓度范围：（＋）＋＋

＋＋＋＋ ＋＋＋＋EUROIMMUN1-2ANA检测策略原因1:高滴度抗体在低稀释倍数时可能被非特异性反应遮盖抗Yo抗体(猴小脑)1:101:100抗表皮基底膜抗体(喉舌)1:101:100AMA(鼠肾)1:1001:1000pANCA(人中性粒细胞)1:11:10推荐一个标本平行作两个稀释度

1:100和1:1000(1)1-2ANA检测策略原因2：在低稀释倍数时多种自身抗体可能相互掩盖1:10001:1000ANA核均质型和着丝点型1:1001:100ANA核均质型和核仁型推荐一个标本平行作两个稀释度

1:100和1:1000(2)1-2ANA检测策略推荐一个标本平行作两个稀释度

1:100和1:1000(3)两个滴度平行检测：1:100和1:1,000，通过一次实验，就可估计抗体的滴度1:1,000ANA均质型（滴度1:10,000）1:1001:1,000ANA均质型（滴度1:1,000）1:1001-2ANA检测策略推荐一个标本平行作两个稀释度

1:100和1:1000(4)各稀释度的反应性抗体滴度及强度临床意义1:1001:1000弱＋—1:100（＋）可疑阳性。强＋—1:320＋弱阳性，提示可能存在相关疾病。强＋弱＋1:1000＋＋中等阳性，提示可能存在相关疾病强＋＋1:3200＋＋＋强阳性，高度提示存在相关疾病强＋强＋1:10000＋＋＋＋极强的阳性，高度提示存在相关疾病。1-2ANA检测策略ANA结果报告及注意事项1-2ANA检测策略ANA结果报告报告ANA结果时，应包括如下几个方面： -定性结果：阴性或阳性。

-荧光模型：看到的所有模型均应报告。

-每种荧光模型的滴度。-建议：如下一步的确认实验等。-所用检测系统的参考范围。

1-2ANA检测策略ANA结果报告举例1:1000核均质型：1:100核仁型：1:10001:100结果报告核均质型：1:100着丝点：1:10001-2ANA检测策略ANA检测的注意事项（1）ANA的滴度结果非常重要 -所用检测系统的起始稀释度（正常参考范围）只是一个统计值，如果以此为临界值，部分正常人也可出现阳性（5-10%），在年龄大于60岁的老年人中，阳性率更高，但滴度较低。

-ANA滴度越高，与自身免疫性疾病的相关性就越大。1-2ANA检测策略ANA检测的注意事项（2）ANA的荧光模型 -荧光模型与相应靶抗原在细胞内的分布相关，可初步提供自身抗体针对的靶抗原信息，并可为下一步的确认实验提供指导作用。

-还可根据荧光模型结果判断确认实验结果的有效性，以排除非特异性反应。1-2ANA检测策略ANA检测的注意事项（3）ANA检测流行病学资料的积累 -目前，IIF检测ANA时，有很多荧光模型相对应的靶抗原尚不清楚，尤其是这些荧光模型的临床意义不明确，但随着人们对自身免疫病及其相关自身抗体研究的深入，越来越多的以前认为没有临床意义的抗体成为新的研究焦点。-对临床意义和靶抗原不明确的荧光模型也应向临床报告，以引起