现代实验动物科学与比较医学研究

现代实验动物科学与

比较医学

第一章导论南方医科大学实验动物中心＆比较医学研究所顾为望主要内容:

一、前言二、实验动物在医药研究中的历史、现状和发展趋势三、基本概念四、实验动物标准化五、实验动物在医学研究中的应用与选择六、国外实验动物管理状况及发展趋势七、我国实验动物工作现状八、我省实验动物工作的特点九、我校实验动物工作的现状和发展趋势前言01众所周知：二十一世纪是生命科学的世纪，随着科学技术的发展，经济的繁荣，人们越来越渴望揭示遗传奥秘，攻克各种顽症，延长人类寿命。因此世界各国特别是发达国家投入了巨额经费用于生命科学研究和卫生保健事业。02美国：投入生命科学研究和卫生保健事业费用占国民生产总值的比例逐年增高，超过了航天和原子能事业的投入。生命科学研究离不开实验动物。在美国,60%以上生命科学研究课题需要实验动物。NIH（美国国立卫生研究院）每年科研经费的50%用于动物实验有关的项目。国家科技部在《科研发展“九五”计划和2010年远景目标纲要》中明确提出：实验动物（LaboratoryAnimal）、设备（Equipment）、信息（Information）和试剂（Reagent），简称AEIR，是科学研究的四大基本条件。01在当今，我们要获得精密的仪器，高纯度02的试剂、最新信息是轻而易举的。但获得理想03的实验动物却不那麽容易，一方面是人们重视04程度不够；二是我国实验动物学科起步晚，比05较落后，即使有钱也不一定获得理想的实验动06物。即使获得了所需的实验动物，若动物实验07环境和动物饲养条件达不到标准，也不可能获08得理想的实验结果。由于我国实验动物学科发09展滞后，严重制约了医学、药学及生命科学研究的发展。因此国家科委和有关部门高度重视,颁布了一系列的管理条例和实施细则，来促进我国实验动物事业的发展。1997年国家四部委（国家科委、卫生部、农业部、国家医药管理局）联合发文规定2000年科研和药检的大、小鼠必需达到清洁级以上标准。2001年国家最近颁布的实验动物标准已取消普通级大、小鼠.实验动物在医药研究中的

历史、现状和发展趋势（一）历史

历史上许多重大发现是通过动物实验得到的。年份 发现人 发现所用动物

1628 哈维（英国） 血液循环 蛙.蛇.鱼.其它1829Jerner牛痘免疫预防天花牛、马、猪 1846 玛登（德国） 乙醚麻醉 鸟类，其它 1878 科赫（德国） 结核杆菌，细菌牛，羊与疾病的关系 1885 巴斯德（法国）狂犬病免疫 狗 1921 冯·梅林（德国）胰岛素 狗1932 Domagk(德国)磺胺药的发现小鼠1936 巴甫洛夫（俄国）条件反射、消化生理 狗 低温麻醉、体外循环、器官移植、断肢再植 现状虽然用动物做实验有上千年的历史但作为一门学科仅有50年的时间。随着生命科学的发展进一步深入，三项重大突破即：近交系小鼠（1909）、无菌动物（1915）和免疫缺陷动物（1966）的发现和培育成功，为创建实验动物科学奠定了基础。近交系小鼠对研究遗传规律和各种遗传病的诊断和防治起到了重要作用。免疫缺陷动物裸小鼠为肿瘤免疫学的研究提供了很好的实验材料。用无菌动物可了解各种病原体对机体的影响。随着克隆动物的出现，各种转基因动物的培育成功和应用，把实验动物学科带到了全新的境地。大大促进了生命科学的研究和发展。美国哈佛大学医学研究院96年统计报导：在1991--1996年全世界人类健康研究中有51项突破性重大研究成果，其中22项是通过实验动物模型遗传研究得到的，占43%。01南京军区总医院1987--1997年，十年中获得全国，全军科技进步及医疗成果二等以上的奖项共52项。其中通过动物实验取得的有38项，占73%。(肾小球肾炎的诊断治疗，系列肠漏的外科治疗，脑垂体移植，小肠移植等成果都是通过动物实验取得的）。022002年广东省申报医药类科技进步奖277项，其中使用实验动物获得的成果177项，占63.9％。03实验动物的发展趋势：模型动物的大量发展和使用，正在逐渐取代常规实验动物。（高血压大鼠、肥胖症小鼠和肿瘤的动物模型等）。整个实验动物的供应，趋向于社会化、商品化。实验动物的管理标准化、法制化。高等级动物（清洁级、SPF级）被大量使用。转基因动物的大量使用（AIDS病毒、乙肝病毒和人白血病I型病毒的小鼠转基因模型）。实验动物的福利、保护和“3R”运动呈现全球化趋势。“3R”即：替代（Replacement）、减少（Reduction）和优化（Refinement），其核心是对作为人的替身或“替难者”善待、减少痛苦、降低用量，更重要的是通过“3R”研究进一步开拓人们进行科研的思路，使研究手段更加完善。基本概念实验动物科学（LaboratoryanimalscienceLAS）：是研究实验动物及其应用的一门科学，包括实验动物和动物实验。实验动物（laboratoryanimalLA）：指经人工培育，对其携带的微生物进行控制，遗传背景明确，可用于科学实验、药品、生物制品的生产和检定及其它科学研究的动物。人们运用现代手段和方法培育的具有新的生物学特性的动物品种（系）用于科学研究。遗传控制不同01微生物控制等级不同02培育的形质和目标不同03实验动物与实验用动物的区别：为科研、教学、药品检定等目的，对动物进行物理、化学和生物因素处理，观察其反应，获得实验数据，解决科研中的问题。动物实验（animalexperiment）：是指医学研究中建立的具有人类疾病模拟表现的动物实验对象和相关材料。人类疾病的动物模型：实验动物标准化实验动物标准化定义：对动物的质量，繁育条件，实验条件等方面规定的统一技术标准。内容：实验动物遗传学质量控制实验动物微生物学质量控制实验动物设施环境标准化实验动物饲料营养标准化实验动物遗传学质量控制：按遗传学控制标准即基因的纯合成度,实验动物分为:近交系（inbredstrain）C3H（300多种）突变系（mutantstrain）裸鼠杂交群（hybridcolony）F1封闭群（closecolony）昆明小鼠、wister大鼠近交系：连续全同胞交配20代以上的动物称为近交系。特点:其基因纯合度达到98.6%,个体差异小,似同卵双生反应一致重复性好，用少量动物即可获得精确度很高的实验结果，个体相互之间可以接受皮肤、器官移植。隐性基因纯合使许多病态性状得以暴露,可获得大量先天性畸形及先天性疾病的动物模型.如高血压、白内障、糖尿病.动物模型.缺点:出现近交衰退.F1代动物：两个无关近交系杂交形成的后代.特点：虽然基因杂合，但个体之间基因杂合的一致,个体差异小。除具有近交系的优点,还具有生命力强耐受性强,可长期进行观察，个体相互之间可以接受皮肤、器官移植。封闭群动物：以非近亲交配方式繁殖生产的一个实验动物种群。在人类遗传研究、药物筛选、毒物实验等方面起着不可代替的作用等。突变系动物：指正常染色体的基因发生了变异，动物具有一种或多种遗传缺陷。例如：无胸腺裸鼠、严重联合免疫缺陷动物SCID小鼠。为肿瘤、免疫疾病的研究提供了理想的材料。01实验动物微生物学质量控制.02通过微生物学的检测手段,根据微生物净化程度03我国把实验动物分为四个等级:04一级：普通级动物05二级:清洁级动物06三级：SPF级动物(无特定病原体动物)07四级:无菌动物01实验动物生产与动物实验环境02标准化03普通级环境：一级动物（普通级）04屏障系统：SPF级05亚屏障系统：二级动物（清洁级）（亚屏障系统现已取消）06隔离系统：无菌动物表1实验动物繁育、生产设施环境指标（静态）表2动物实验设施（设备3））环境指标（静态）实验动物在医药研究中的

选择与应用PART1动物和人有共同的进化起源，共用一套遗传密码系统。因此把动物和人的各种生理病理现象加以比较分析有助于揭示生命的本质、遗传的奥秘同样可以依据这种进化上的同源性和遗传上的同质性在实验动物体复制具有人类疾病模拟表现的模型，进而采取有效的防治措施。药物是人类战胜疾病的重要手段，应用药物在一定程度上保障了人类的生存和繁衍，促进了社会的繁荣昌盛、社会进步、科学的昌明。人们日益讲究生活质量，对药物的需求也不断增加。有病当治病，无病需防病。人们在激烈的竞争中迫切需要提高智能和体能，延年益寿，延缓衰老，保持青春常驻和旺盛的精力，所有这一切药物是不可缺少的。但是任何事物均具有两面性。“是药三分毒”，药品如使用不当对人体都会产生毒性作用。“药疗事故”、“药源性疾病”或“药害事件”教训很多。所以新药在进入临床使用前均需经过安全性评价。历史上重大的药害事件举例(1)药品时间国家药害作用亮菌甲素注射液2006年中国广州市急性肾功能衰竭龙胆泻肝丸2000-2002年中国肾损害四咪唑20世纪70、80年代中国温州市迟发性脑病氨基甙类抗生素20世纪90年代中国药物致聋、致哑磺胺酏剂1937年美国肾功能衰竭氨基比林1922～1934年欧洲、美国白细胞减少症二硝基酚1937年美国、欧洲部分国家、巴西白内障、骨髓损害三苯乙醇20世纪50年代后期美国脱发、皮肤干燥、男性乳房增大、阳痿、视力下降、白内障非那西丁1953年后瑞士、西德、捷克等国肾功能衰竭历史上重大的药害事件举例(2)药品时间国家药害作用氯磺羟喹1963年日本亚急性脊髓视神经病孕激素50年代美国女婴外生殖器男性化畸形己烯雌酚1966～1969年间美国波士顿市少女阴道癌二碘二乙基锡1954年法国巴黎中毒性脑炎反应停（沙利度胺）1960年左右欧洲、日本、北美、拉丁美洲海豹肢畸形醋酸铊1930～1960年各国慢性中毒心得宁1968～1979年美国眼-皮肤-黏膜综合征拜斯亭2001年德国、意大利严重的横纹肌溶解综合征替马沙星1991年7月美国替马沙星综合征米贝拉地尔美国致死性心律失常特非那丁和阿斯咪唑1997～1998年6月法国/冰岛/毛里求斯药物相互作用引发致命性的心脏毒性阿洛司琼2001年8月美国缺血性结肠炎、严重便秘苏丹红一号1995～2005年欧盟、中国等国家第三类致癌物质芬氟拉明和右芬氟拉明1962～1997年美国增加心脏瓣膜病发生率奈韦拉平2003年荷兰肝脏毒性和皮肤过敏以上药害事件的发生决大部分是因为临床前动物实验没做好，有的是时间过短、有的是动物数量不够、还有的是实验动物选择不当。所以，美国早在七十年代就制定了《GLP规范（草案）》。GLP是非临床实验的优良实验室规范的英文缩写。现在一般翻译为“药品非临床安全性研究质量管理规范”。主要就是针对药品临床前动物实验研究制定的法规性文件，其主要精神就是所有的动物实验方法和步骤都是按照既定的标准操作规程（SOP）进行，确保所有的数据都经过两个以上的人审核，所有数据和结论的更改都必须记录在案。由于GLP对动物实验的要求非常严格，使得我们在医学和生命科学研究中进行动物实验时都借鉴GLP规范制定各种SOP。选择与人的机能、代谢、结构及疾病特点相似的实验动物（laboratoryanimalsLA）医药研究中动物选择的原则：选择遗传背景明确，得到良好微生物控制，具有模型性状显著且稳定的LA，如：猴、小鼠的NH4OH致咳选择解剖、生理特点符合实验目的要求的LA。如：裸鼠、青光眼兔、糖尿病大鼠选择靶器官效应好的LA。选择科研、检定及生产中传统使用的LA。如：家犬的甲状旁腺位于甲状腺表面利于甲状旁腺切除选择具有特殊反应性的实验动物品种（系）。如：对血压的影响，狗、猫、鼠易复制高血压模型。过敏反应，变态反应：豚鼠呕吐反应：狗对皮肤的局部作用：家兔、豚鼠、猪致热反应：兔，不能用狗（无汗腺或汗腺不发达）动脉粥样硬化：鸽、鸡、家兔致癌作用：小鼠、大鼠考虑到品种品系放射病：狗（不用兔，非常敏感）免疫：C57BL/6国际通用小鼠。动物模型的设计原则：相似性：复制的模型尽可能近似与人类疾病。重复性可靠性适用性和可控性易行性和经济性动物模型的复制方法：01物理诱发方法：放射线（萎缩性胃炎）、机械损伤02化学诱发方法：致癌剂（Ｄ－氨基半乳糖致大鼠肝硬化）化学毒物、强酸强碱烧伤等03生物诱发方法：细菌、病毒、寄生虫、生物毒素等04复合方法：如用细菌加寒冷方法复制豚鼠慢性支气管炎05遗传工程方法：AIDS、老年痴呆症的动物模型06动物模型的优点避免了在人类进行实验所带来得风险。临床上平时不易见到的疾病可用动物随时复制出来。例如：放射病、毒气中毒、战伤。可以克服人类某些疾病潜伏期长、病程长和发病率低的缺点。例如：肿瘤、肺心病、再障可以严格控制实验条件，增加实验条件的可比性可以简化实验操作和样品收集。按时采集所需的各种样本，及时或分批处死动物收集样本，以便更好了解疾病过程，完成实验目的，这点在临床时办不到的。有助于更全面的认识疾病和疾病本质。但是动物机体结构和代谢与人类有较大差异，实验结果不能完全照搬于人。实验动物既是生命科学研究的支撑条件，又是生命科学研究的对象和内容。其发展和应用程度是衡量一个国家或地区生命科学研究水平高低的重要标志。实验动物在保障人类健康和改善人类生存条件方面所起的作用是勿庸置疑的。天花的灭绝、各种人和动物疫苗的研制、断肢再植、器官移植以及转基因和克隆技术等重大突破，都是借助于实验动物获得成功的。当前人类仍面临癌症、艾滋病、SARS等重大疾病的威胁，各种疾病的诊断、治疗和预防，药品、保健食品、美容化妆品的安全性评价以及农药、化肥、除草剂、促生长剂、兽药添加剂的研制开发、毒性残留、生物安全性的评定以及与人们生活环境密切相关的重大研究都离不开实验动物。然而与西方发达国家相比，我国实验动物基础明显滞后于生物高科技的发展需求。近些年，为提高实验动物科学技术水平、加强实验动物工作管理，国家科技部（原国家科委）联合有关部门努力工作，使我国实验动物工作逐步走上了法制化、标准化。国外实验动物工作现状及发展趋势随着生命科学发展推动了实验动物科学的现代化进程，以无菌动物、近交系动物和免疫缺陷动物的培育成功奠定了现代实验动物科学的基础，而转基因动物和克隆动物的培育成功又把实验动物科学推进到一个崭新阶段。主要表现如下：随着实验动物质量标准化程度越来越高，实验动物使用总量减少。01因为实验动物质量提高，减少了个体差异，提高了实验结果的均一性和可重复性，少量实验动物即可获得准确的实验结果；另一个原因就是当前普及“3R”原则，替代方法和替代材料的发现使用减少了实验动物用量。以英国为例，2000年使用实验动物数量比1976年减少50％，而美国在1994年使用实验动物数量与1968年相比，减少了近60％。02高等级实验动物、转基因动物、模型动物使用量增加。01在日本1985年大鼠使用：普通级﹕清洁级﹕SPF级为2﹕5﹕12，而到1991年该比例则改为2﹕11﹕50。在英国1990年科研使用转基因动物只占实验动物总数的3％，而在2000年短短十年发展到转基因动物占动物数量的18.8％；此外，模型动物和各种人类疾病动物模型使用数量急剧上升。02国外实验动物管理趋于法制化随着实验动物在生命科学研究和产品检验中全方位使用，西方发达资本主义国家基本上在上个世纪50～70年代先后立法管理，近几十年又在不断加以完善和改进。在国外实验动物生产逐渐向专业化、商品化、社会化方向发展。在发达国家，十分重视通过立法管理实验动物，尽管国际上不同国家对实验动物管理和立法有不同的尺度，但都是围绕保障动物福利和实验动物质量两个方面同时进行的。3.1美国美国政府不直接设置专门的管理机构，而是通过立法经过动植物检疫局（APHIS）、食品与药品管理局（FDA）、国家卫生研究院（NIH）、动物饲养管理与应用委员会（LACUC）等官方或民间渠道，对实验动物及其设施条件进行监督与调控。1966年，第一部保护农用动物法规－《动物福利法》由APHIS颁布实施；1966年颁布《濒危物种保护法》；1985年颁布《食品安全法》,对动物福利作出了规定。1990年颁布的《食品和农业保护贸易法》规定宠物保护。1963年，NIH颁布了《实验动物饲养管理与使用指南》，覆盖了实验动物在使用、饲养管理、照料、保健过程中的各个方面。1985年，卫生部颁布了《人道主义饲养和使用实验动物的公共卫生服务方针》。该方针对政府制定的《美国政府关于在测试、科研和培训中使用和管理脊椎动物的原则》和《动物福利法》作了全面的补充和完善。FDA颁布了《良好实验室操作规程》（GoodLaboratoryPracticeGLP）,制定了非临床测试标准。在英国，早在1867年会议通过了《防止虐待动物法》。1986年颁布了新的动物法。新动物法最大的特点之一是其许可证制度，它规定开展与动物有关的科研工作需要同时具有3种许可证，即房屋及设施许可证、项目研究许可证和人员资格认可证。英国内务部还颁布了《科研用动物居住和管理操作规程》、《繁育和供应单位动物居住和管理的操作过程》、《废弃物的管理操作规程》、《运输过程动物福利条例》等。01在德国，新的《动物保护法》也于1986年颁布。其他国家，比他比利时、芬兰、法国、意大利等也有类似的法令。023.2欧洲日本日本有关实验动物管理的法规有30多种。如20世纪70年代颁布的《动物保护与管理的法律》、《家畜传染病预防法》、《兽医法》、《狂犬病预防法》、《动物进出口检疫法》、《确保建筑物卫生环境的法律》、《确保建筑物卫生环境的法律实施令》、《确保建筑物卫生环境的法律实施细则》等。20世纪80年代颁布的《实验动物饲养及保育基本准则》、《动物实验的准则》、《实施医药品安全性试验的标准》等。1983年和1988年两次修订GLP标准。我国实验动物工作现状及发展趋势据统计，目前我国实验动物生产使用单位有3000多家，从业人员数万人，年产实验动物总量约1300万只。但受到认识观念、经费投入以及整体科研发展水平的限制，我国实验动物的质量和品种数量还远远落后于西方发达国家。科研单位、高等院校、药检机构、疾控部门包括医疗系统购买先进的仪器设备的时候都舍得投资，一台机器动辄几十万上百万，仪器的价值成为实力雄厚的象征。而对于实验动物生产和使用设施的投入总是排不上议事日程，一拖再拖。所以“老子革命几十年都没有住上空调房，小老鼠还要住空调房”的论调一度甚嚣尘上，因此动物也就只好养在厕所边、楼梯口、阳台上。这样的动物质量无法保证，实验结果难以令人信服，科研成果的价值大打折扣。我国的实验动物管理法规制定起步比较晚。1988年11月14日，《实验动物管理条例》实施。这是我国第一部实验动物管理法规，从此我国实验动物管理走上了法制化轨道。十几年来，先后发布了国家和地方法规100余项。其核心是对实验动物及其环境设施实行质量合格证制度；各有关部门也制定了相应的配套规章及地方法规，关于实验动物标准也相继制定，基本形成了法制化管理体系，还很不完善，但正如国际实验动物学会主席、加拿大的鲁塞尔教授所说：“新中国的实验动物事业，（从1988年算起）只用了不到10年的时间，走完了西方半个世纪的路程。”2001年国家七部委联合下发《实验动物许可证管理办法（试行）》，对实验动物生产和使用单位实行许可证制度，对从事实验动物和动物实验人员实行资格证认可制度。0102其中国家法规有：《实验动物管理条例》、《实验动物质量管理办法》、《药品非临床研究质量管理规定（试行）》、《国家医药管理局实验动物管理办法》、《国家医药管理局实验动物管理实施细则（试行草案）》、《医学实验动物管理实施细则》、《卫生部实验动物管理委员会合格证管理办法》、《中国科学院实验动物管理暂行条例》、《中华人民共和国实验动物47项国家标准》、《中华人民共和国卫生部医学实验动物标准》、《实验动物种子中心管理办法》、《国家啮齿类实验动物种子中心引种、供种实施细则》、《省级实验动物质量检测机构技术审查准则》、《省级实验动物质量检测机构技术审查细则》、《关于当前认可证发放过程中有关实验动物种子问题的处理意见》等。其中北京在1996年人大立法通过了《北京市实验动物管理条例》，2004年又进行了修订；湖北省2003年借SARS病毒源于动物的契机积极加强实验动物管理，于2005年人大立法通过《湖北省实验动物管理条例》；2008年云南省实验动物立法通过正式实施《云南省实验动物管理条例》，辽宁省和重庆市分别以省长令、市长令的形式发布了“实验动物管理办法”；其他省市如天津市、山东、江苏、湖南、吉林、河北、甘肃、江西、安徽等省已颁布或正在研究制定实验动物管理条例和有关管理法规。广东地区实验动物工作现状广东省是医药大省，医药收入占有国民经济重要成分，同时广东省又是我国医药产品进出口的重要口岸（约占全国的60％多）。实验动物在广东省的科学研究和社会经济发展中起着重要作用，受到广东省政府和科技工作者的高度重视，“九五”期间，我省的实验动物建设相关研究和技术水平发展迅速，实验动物管理、设施条件建设、学科建设、人才培养、学术交流于合作等方面取得较大进展，为广东省科学技术和地区经济的发展起到了支撑和促进作用，实验动物管理与建设向法制化、标准化、规模化、社会化、产业化和商品化的目标迈进了一大步。但与迅速发展的科学技术的要求仍有差距，存在结构不合理、发展不平衡、资金投入不足、人才缺乏等问题。0102广东省实验动物学会中国水生实验动物专业委员会中国中医药实验动物专业委员会广东省实验动物技术质量监督站广东省实验动物质量监测所南方医科大学比较医学研究所（1996年成为实验动物学硕士点）（2002年招收比较医学方向博士研究生）国家实验用Beagle犬种子基地中国实验动物科技信息网我国第一个水生实验动物——剑尾鱼培育成功西藏小型猪实验动物化初步培育成功HBV转基因小鼠培育成功及商品化生产SPF兔和SPF白化豚鼠种子基地（一）广东省实验动物工作特色1988年制定了《广东省实验动物管理办法》。为了落实许可证管理制度。2002年广东省八个厅局联合下发了《广东省实验动物许可证管理细则（试行）》，依法管理，全面推行了实验动物合格证和许可证制度。2006年开始进行立法调研推进立法进程，广东省实验动物工作在广东省科技厅的有力领导下，正飞跃发展，独具特色，从以前落后状况一跃据全国先进行列，仅次于北京和上海。目前机构落实、有国家相关政策指引、标准配套，有一支精干的执法队伍基本形成。因此，亟待对《实验动物管理条例》立法，使广东实验动物工作者及执法者有法可依。我校实验动物工作的现状和发展趋势011996年成为硕士点；2002年招收比较医学博士；2006年成立比较医学研究所；自行培育有FMMU白化豚鼠，实验用西藏小型猪，建立有SPF新西兰兔及SPF白化豚鼠种群；有近交系Wistar大鼠，成立有南方医科大学实验动物伦理委员会和管理委员会。02优势和特色：2002年，国家实行实验动物许可证制度以来广东省最先取得实验动物生产、使用许可证（军队颁发）；2006年取得广东省科技厅颁发的实验动物生产、使用许可证广东省首家规模化生产SPF级大、小鼠，2003年广东省首家带头取消了普通级大、小鼠的生产广东省首先繁殖裸鼠、SCID鼠、近交系Wistar大鼠、SPF兔等特色实验动物的单位广东省唯一一家能够生产提供SPF级兔和FMMU白化豚鼠的单位，广东省SPF新西兰兔和SPF豚鼠的种子基地广东省最早建立SPF级动物设施的单位广东省首批取得实验动物饲料生产许可证国内首次进行西藏小型猪实验动物化培育，填补了广东省小型猪生产研究领域的空白，取得了广东省首张“实验用小型猪动物质量合格证”。成立了“南方医科大学实验动物管理委员会和伦理委员会”，起草的“南方医科大学实验动物管理办法（试行）”和“南方医科大学动物实验伦理审查指南（试行）”已作为学校《科研管理办法》内容在科研项目实施中贯彻执行。3、成绩（1）近几年所获各类基金一览表序号课题项目名称资金来源金额(万元)启动时间主持/参与1运用四环素调控系统建立HBV全基因的转基因小鼠模型国家自然科学基金603主持2可调控胰腺癌转基因小鼠模型的制备研究省科技计划项目2003主持3Cre/loxP系统介导的时空表达HBV转基因小鼠模型的建立省自然科学基金503主持4可视化胰酶外分泌功能转基因动物的制备及应用研究省科技计划项目1204主持5虫草子实体培养基再利用暨功能性预混料开发研究省科研条件建设项目1005主持续上表：6人类风湿关节炎滑膜－软骨－鼠嵌合体模型研制及应用省科技计划项目1005主持7SPF级兔和SPF级豚鼠种子基地建设的研究省科研条件建设项目1005主持8西藏小型猪实验动物化研究省科研条件建设项目1005主持市科研条件建设项目5005合作主持9西藏小型猪遗传背景分析及标准化分子标记的建立”由顾为望教授指导的博士生李洪涛成功申请）省科技计划项目1006主持10“西藏藏猪引入广州地区的驯化、培育研究”省科技计划项目1006主持11磁共振受体成像检测微小肝癌实验研究国家自然科学基金3106合作主持9合计184

我们将利用医学院校的实验动物学暨比较医学学科的交叉优势，与相关科研院所和医药研发机构联合开展西藏小型猪生物医学应用研究。1、近交系猪的培育2、加强西藏小型猪遗传质量控制将分子遗传学的研究成果与遗传育种紧密结合，指导遗传育种工作的实施。3、免疫学研究（细胞水平、分子水平、基因水平）4、SPF西藏小型猪的培育及其在兽用生物制品生产检定中在应用5、人类疾病西藏小型猪动物模型研发：

1）建立西藏小型猪感染性疾病模型

2）多种器官移植模型建立

3）心肌梗死、动脉粥样硬化及糖尿病等人类重大疾病6、转基因及基因敲除克隆猪的研究

1）四色荧光蛋白转基因克隆猪研究

2）猪诱导多能性干细胞（iPS）克隆猪

3）人CPT1A-E3G突变基因转基因克隆猪研究

4）猪iPS嵌合体制作

5）热休克蛋白转基因克隆猪研究

6）酪氨酸激酶基因敲除获得白化藏猪的研究

7）抗PRRS病毒转基因克隆猪研究工作展望Inthefuture获得的相关资助项目西藏藏猪引入广州地区的驯化培育研究广东省农业攻关计划(NO.2006B20201053)西藏小型猪的实验动物化研究广州市科研条件建设项目广东省科研条件建设项目(NO.2005B60302007)西藏小型猪遗传背景分析及标准化分子标记研究广东省科研条件建设项目(NO.2006B60101059)西藏小型猪与比格犬和人的血液流变学特性的比较医学研究广东省科技基础条件建设项目(NO.2007A060305002)无特定病原体(SPF)试验用西藏小型猪的培育研究广东省农业攻关计划项目(NO.2007B020706002)西藏小型猪在药物临床前安全评价中的应用研究广东省科研条件建设项目(NO.2008B60181056)藏猪异地保种、实验用猪培育及优质特色品系培育研究广东省重大科技攻关计划项目(NO.2008B030908013)封闭群FMMU白化豚鼠育种及生产标准化研究胶原涂层煅烧复合成骨细胞治疗骨缺损的研究类风湿性关节炎病理模型制作普鲁卡因胺抗血小板聚集作用近几年取得的科研成果成立了南方医科大学实验动物管理委员会和伦理委员会主任委员由业务副校长担任，副主任委员由著名学者和实验动物学专家担任，委员由各单位负责人和知名专家组成，对实验动物的生产、繁殖和供应实施规范化管理。在动物实验中坚持3R原则，把应用合格实验动物和在合格动物实验环境条件下开展动物实验作为申报科研课题和鉴定科研成果的基本条件，对使用不合格实验动物和在不合格动物实验环境条件下进行的实验、检定或者安全评价结果无效，课题不予申报，成果不予鉴定。南方医科大学动物实验申请表编号：2007—申请日期：年月日一、申请者基本情况科室课题负责人职称电话E-mail课题名称课题执行人1职称课题执行人2职称拟实验时间年月日至年月日二、所需实验动物品种品系年龄体重性别数量来源动物质量合格证编号饲养场所环境设施许可证号实验场所环境设施许可证号三、实验内容概述：使用实验动物的原理；动物实验的设计和操作程序等四、其它事项：有毒（害）物质的使用；特殊操作和仪器设备等五、课题负责人承诺以上内容填写属实，本人对动物实验设计的科学性、合理性和可行性负全责。课题负责人签字年月日六、动物实验设施管理部门意见：负责人签（章）：年月日南方医科大学实验动物伦理审查表课题名称：课题负责人：项目意义及必要性动物处置方法声明:我将自觉遵守实验动物福利伦理原则，随时接受实验动物伦理委员会的监督与检查，如违反规定，自愿接受处罚。声明人签（章）：

年月日伦理委员会审批意见：审查人签（章）南方医科大学实验动物伦理委员会批准人签（章）年月日填表说明：1、课题负责人、执行人均需在声明人签字栏签字。2、需随申请书递交审查资料（电子文档及书面资料各一份）。要求写明项目的意义、必要性、项目中有关实验动物的用途、饲养管理或实验处置方法、预期出现的对动物的伤害、处死动物的方法、项目进行中涉及动物福利和伦理问题的详细描述。伦理审查依据的基本原则：动物保护原则：禁止无意义滥用和滥杀实验动物；制止没有科学意义或不必要的动物实验；优化动物实验方案以减少不必要的动物使用量。动物福利原则：保证实验动物生存时包括运输中享有最基本的权利，享有免受饥渴、生活舒适自由，享有良好的饲养和标准化的生活环境。伦理原则：应充分考虑动物的利益，善待动物，防止或减少动物的应激、痛苦和伤害，尊重动物生命，制止针对动物的野蛮行为，采取痛苦最少的方法处置动物。综合性科学评估原则：公正性：伦理委员会的审查工作应保持独立、公正、科学、民主，不受政治、商业和自身利益的影响；必要性：各类实验动物饲养、使用或处置需要的充分理由；兼顾人类和实验动物的利益平衡.实验动物生产情况品种SPF级普通级小鼠BALB/cBALB/c-nuNIHKMSCIDC57BL大鼠SDWistar豚鼠FMMU白化豚鼠（省种子基地）三色豚鼠白化豚鼠兔新西兰兔（省种子基地）新西兰兔猪/犬比格犬西藏小型猪特色品种SPF级新西兰兔FMMU白化豚鼠FMMU白化豚鼠西藏小型猪特色实验动物SPF兔实验用西藏小型猪FMMU白化豚鼠Wistar近交系大鼠本实验中心已开展的疾病模型工作（一）基因工程动物模型显微注射法转基因技术平台胰蛋白酶原Ⅱ转基因小鼠绿色荧光蛋白转基因小鼠1.3copyC型HBV转基因小鼠转基因克隆和体细胞基因打靶技术平台TYR基因敲除西藏小型猪红、黄、蓝、绿四色荧光蛋白转基因克隆西藏小型猪慢病毒载体法红色荧光蛋白转基因小鼠整体成像仪下的转基因小鼠胰腺组织冷冻切片结果（普通光源,200×）胰腺组织冷冻切片结果（荧光光源,200×）01利用显微注射法建立绿色荧光蛋白转基因小鼠02整体成像仪观察F0代的小鼠SelectationofG418resistantclonesby500ug/mlG418fortwoweeksnucleartransfer:cellsco-expressingfourfluorescentproteinswereselectedasnucleidonorssurrogates—TibetminiaturepigsLinearpEGFPC1,pEYFPN1,pECFPN1andpDsRed-N1respectivelytransfectedintoporcinefetalfibroblastcells(Landrace)byelectroporationsimultaneously转基因克隆方法制备红、黄、蓝、绿四色荧光蛋白转基因西藏小型猪clonedpigletsTransgenicfetalfibroblasts(A-E)SurrogatemotherClonedpigletsskintissueofclonedpiglets(H-L),Non-transgenictissue(Non)ascontroltotransgenictissue(Tg)hai