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文档简介
组培中常见问题及解决办法——污染问题污染：培养过程中，培养基或培养材料上滋生细菌、真菌等微生物，使培养材料不能正常生长导致培养失败的现象。从病原菌方面受到污染表现出两种状况：细菌污染：接种后1-2天可见-----在培养基表面，不离开培养基----一般为接触性污染；培养基某一位置或培养材料周围出现黏液状或浑浊水渍状痕迹，有时呈现发酵泡沫状。真菌污染：接种后3-5天或10天。培养基污染部位发霉长菌丝，颜色丰富颜色黑、白、黄等，污染时间过长会长孢子，形成孢子层，使污染更严重-------接触性及非接触性（真菌孢子窜入培养基）污染来源
植物材料方面：植物表面消毒不彻底或者植物内生菌材料带入培养过程，形成污染
环境方面：空间环境接种室，培养室环境不清洁，或者超净台空间有杂菌窜入培养基
操作过程不规范：接种工具刀镊子及培养基灭菌不彻底、操作不规范导致的如叉动作过多，手触及外植体或过滤纸、盖子倒扣放置，刀镊子摆放不正确或不及时灭菌引起交叉感染、或者操作过程越界到有菌范畴。
污染如何防治（1）植物材料：幼材料嫩刚长出来接触外界环境时间短的）、温室材料（通过特殊环境）、清洁材料、久晴阳光午后（借助强光，紫外线）（2）灭菌严格：难灭菌的外植体多次灭菌、植物材料内生菌可以添加抗生素培养基、工具包灭菌彻底（3）合理安排繁殖程序：获得的无菌培养物一部分保存起来，分批繁殖或者扩繁过程中挑出污染复检后大规模生存（一部分繁殖，一部分留起来以后再繁殖，避免一批全部污染造成大量损失）（4）操作规范：严格按照操作规范、清洁密闭、杀菌.
1、污染菌类零星分散在培养基中是人为引起的污染。
外植体菌类从材料培养基以上部分长起，且发生在5天以后，则说明是材料带的内生菌。
若从培养基以下开始长菌，发生时间较早，且有从里向外的趋势，则说明是切口引起的污染。2、真菌污染后，如果已形成孢子，则必须经高压灭菌后扔掉。但若是细菌污染，只要及时发现，将材料上部未感菌的部分剪下转接，材料仍可以用
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