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文档简介
血液学与临床检验:
RBC计数液中硫酸钠用于提高相对比密防止粘连,氯化高汞是防腐剂。
HiCN法的缺点:KCN有毒,HbCO转化慢,高白血球和高球蛋白易混
浊。试验后处理应加入(先用水稀释,再用次氯酸钠混匀敞开放置
15小时使CN氧化为N2和C02或C03和NH4。遗传性球形红细胞增多
症的小细胞中生理性中心淡染区消失。碱性点彩红细胞多见于铅锤汞
中毒,是铅中毒的筛选指标。卡波氏环是胞质中脂蛋白变性所致,常
与染色体小体同在,见于巨幼红和铅中毒。LFR,MFR,HMR分别是低,
中,高荧光率。良性肿瘤ESR多正常,恶性肿瘤ESR多增加,低色素
性贫血,遗传性球形红细胞增多症,镰状贫血时一ESR减低。杆状核过
5%或有幼稚细胞为核左移,中性粒分叶5叶以上超3%为核右移。钩
虫病E细胞可达90%以上。E细胞白血病时亦可,但以幼稚为主。E
计中乙醇或丙酮是保护E细胞而破坏其它,伊红或石楠红是使E着色,
一小时内计数。中性粒细胞毒性变化有:中毒颗粒,空泡,Doles小
体,退行性变。异形淋巴细胞多为T淋,分空泡,不规则,幼稚三型。
淋巴细胞有卫星核,即微核,是射线损伤后较为特殊的形态。白血病
时血小板(MPV)增高是骨髓恢复的第一征兆。ABO遗传基因位于第9
号染色体长臂三区四带,脑脊液中无血型物质,抗A与抗B主要是
IgM,。型血中以IgG为主。新生儿不宜做反向定型。新生儿溶血的
直接实验依据:红细胞直接抗人球蛋白阳性。HLA分型的方法主要有:
1淋巴细胞毒试验,一类抗原用T或外周淋,二类抗原用B。2混合
淋巴细胞培养试验3HLA基因分析。强直性脊椎炎有91%带有B27抗
原而正常人只有6虬血液保存液有:1,ACD(A枸檬酸C枸檬酸三钠
D葡萄糖)2,CPD(C枸椽酸三钠P磷酸盐D葡萄糖腺噪吟枸椽酸)。
枸檬酸是防止葡萄糖在消毒中焦化,腺噪吟促进ATP合成延长红细胞
寿命,磷酸盐提高PH。输粒细胞时用ABO和Rh血型相同的血液,一
般BPC小于二万时可输血。糖尿病酮症:烂苹果味,泌尿系感染和膀
胱癌:腐败臭味,苯丙酮尿症:老鼠屎味。尿液渗透浓度(OSM)是
检查尿中可渗透溶质各质点实际浓度的一种指标,与粒子大小及电荷
无关,主要取决于小分子物质的浓度,是评价肾浓缩功能的良好指标。
晨尿比密不过1.018,或差值在0.001-0002间,或恒定在1.010时
说明肾浓缩功能已完。低血钾碱中毒尿酸性高,高血钾酸中毒呈碱性
尿,变形杆菌感染呈碱性,肾小管性酸中毒时尿PH值不低于6。本
周氏蛋白多见于多发性骨髓瘤,尿肌红蛋白多见于骨骼肌严重创伤大
面积心梗。选择性蛋白尿指数(SPI)即测定尿及血中IgG或白蛋白
的比值来求得,大于0.2为选择性差,小于0.1为选择性好,尿中白
蛋白/球蛋白大于5时为选择性蛋白尿。80%饱和硫酸铁可沉淀其它蛋
白而不能沉淀肌红蛋白可用来签别。管型的基质蛋白为
Tamm—Horsall蛋白。肾静脉血栓形成时红细胞管型可能是唯一的表
现。尿PH(甲基红或澳麝香草酚),尿比密(多聚电解质:甲乙烯
酸马来醉),尿蛋白(浪酚蓝),尿糖(色原:碘化钾,邻甲联苯胺),
尿酮体(亚硝基铁氟化钠),尿胆红素(2,4二氯苯胺重氮盐),
尿胆原(二甲氨基甲醛)尿亚硝酸盐(对氨基苯石巾酸和1234四羟基
对苯喳咻3酚)尿白细胞(叫口朵酚酯)尿血红蛋白(过氧化氢茴香素
或过氧化氢烯钻和色原)尿维C(中性红,缓冲剂,二氯酚靛酚钠)。
产后九天或人流25天后HCG恢复正常,产后四天人流十三天后HCG
应小于1000,男性尿中HCG增高要考虑睾丸肿瘤。镜检粪便中脂肪
小滴大于6个/HP视为脂肪排泄过多。正常粪便中G+球菌与G-杆菌
比值约1:10。隐抱子虫是AIDS和儿童腹泄重要病原诊断要查到卵
囊。正常空腹十二小时后胃液残余量为50ML。脑脊液抽取时:第一
管:作细菌学检查,第二管:作生化免疫学检查,第三管:作细胞计
数。单纯疱疹脑炎时脑脊液中淋巴样细胞中可发现胞质内包涵体。粒
细胞淋巴细胞浆细胞同时存在是结核性脑膜炎的特点。蛋白--细胞
分离现象(Froin综合症)是蛛网膜下腔梗阻所致梗阻脑脊液的特征。
髓鞘碱性蛋白(MBP)增高见于多发性硬化症。神经性梅毒检查首选
试验是密螺旋体荧光抗体吸收试验(FTA—ABC)o浆膜积液常规及细
胞学用EDTA抗凝,生化用肝素,一管不加抗凝用于观察有无凝固。
漏出液以淋,间皮细胞为主,渗出液以中粒,淋,嗜酸性为多。如见
到纤毛柱状上皮和尘细胞可确认为痰液标本。夏科一雷登结晶常与
EC,库施曼螺旋体共存,见于支哮喘和肺吸虫。原粒胞质少,透明天
兰色,无颗粒,早幼胞质多含紫红色非特异性的天青胺兰颗粒。原红
边际有钝状或瘤状突起,有核周淡染区,网织红内含嗜碱性物质,单
核进入组织内形成巨噬细胞。正常骨髓片中原巨核为0,一张血片中
可见巨核细胞为7-35个。正常过氧化物酶染色原粒阴性,嗜碱阴性,
嗜酸阳性最强,单核只有幼单和单核呈弱阳性反应,其它除吞噬细胞
有阳性外都是阴性反应,异常时急粒原粒阳性。过碘酸一-雪夫氏反
应:巨核和血小板+为红色斑块,霍奇金+/-,戈谢+,尼曼一皮克:
+/-且空泡中心为阴性反应,腺癌++。碱性磷酸酶染色除成熟中性粒
和巨噬外其它都是阴性,积分值(NAP)指100个中性粒中阳性比例,
参考以一个加号为基准,参考值是7—51。慢粒的NAP积分值常为零,
类白血病时-NAP显著升高。酸性磷酸酶染色:戈谢氏+,尼克一皮克
一,多毛细胞白血病+。铁染色可作为诊断缺铁贫和指导铁剂的临床,
铁粒幼贫血时多有环铁粒红细胞,其中难治性贫血占15%以上。2P35
表示2号染色体短臂3区5带,人类染色体在有丝分裂中期基本特征
最典型清晰。核型:指用显微摄影的方法得到的单个细胞中所有染色
体的形态特点和数目,它代表该个体的一切细胞的染色体组成。其核
型中符号代表的意义:t:易位,inv:倒位,iso:等臂染色体,ins:
插入,:丢失,+:增加,P:短臂,q:长臂,接下第一括号内是
累及染色体的号数,第二括号内是累及染色体的区带。畸变分数目和
结构,原发和继发。培养的羊水细胞有三种形态:上皮,成纤维,羊
水。特异性染色体有:慢粒时的ph染色体:,急早幼粒:
t(15;17)(q22;q21),Burkitt淋巴瘤:t(8;14)(q24;q32)o贫血时:
极重度:《30G/L,重度:30—60,中度:60—90,轻度:90—120。
血浆游离蛋白(40MG/L,管内溶血时上升。血清结合珠蛋白(HP):
0o8—2O7G/L增高见于妊娠,慢感,恶性肿瘤,减低见于溶血,肝
病,巨幼贫等。AGLT50:指酸化甘油溶血试验中溶血率按光密度减至
50%所需的时间来计算.蔗糖溶血试验为PHN简易重要试验(+),酸化
血清溶血试验是PHN的确正试验.抗碱血红蛋白测定又称碱变性试验,
胎儿血红蛋白(HBF)具有抗碱和抗酸作用.总铁结合力与血清铁的临
床意义基本相反:缺铁则总铁结合力增高,肝脏肾脏疾病时血清铁有
可能升高.血清铁/总铁结合力*100%=转铁蛋白包和度(20--55%),临
床缺铁分三期:缺铁期,缺铁性红细胞生成期,缺铁性贫血期.红细胞
既有低色素又有正色素为“双形性”,是缺铁粒幼细胞贫血的特征,
且环形铁粒幼占15%以上.急性白血病:某一原始细胞大于30%预后小
于六个月.慢性白血病:某一系白细胞增多接近成熟为主,原始细胞不
过10%.中国急性白血病分型:Ml,原始粒细胞白血病未分化型,原粒大
于或等于90%,早幼粒少,中幼以下阶段不见或少见,POX,SBC(+)的原
粒大于3%.M2,原始粒细胞白血病部分分化型,有M2a,M2b两型,M2a中
原粒大于30%小于90%,单核小于20%,早幼粒以下阶段大于10%,M2b
以异常的中性中幼粒增生为主大于30%,有Phi@小体存在.M3急性早
幼粒细胞白血病,心颗粒增多的异常早幼粒细胞增生为主,大于30%可
见束状Aner小体,依颗粒可分M3a,M3b,M4,粒一单核细胞白血病,按
粒单比例可分M4a,M4b,M4c,M4e(嗜酸性细胞5—3%),M5,单核细胞白
血病,以分化程度分M5A,未分化型,原单大于或等于80%M5B,部分分
化型,M6红白血病,红系大于或等于50%,红系PAS阳性,原粒大于30%
异常幼红细胞大于10%时也可诊断.M7,巨核细胞白血病原巨核大于
30%.CD:即细胞表面分化抗原.CD7,CyCD3同属检测T一急淋的最敏感
指标,但只表达CD7+不能诊断,CD25是激活T,B细胞的标记,Smlg(细
胞膜表面免疫球蛋白)和EM(小鼠红细胞受体)是B细胞成熟的特征性
标志,CD19反应谱广,是鉴别全B系的敏感而又特异的标记CD10,为诊
断Common—ALL的必需标记,CyCD22用于检测早期B细胞来源的急性
白血病是相当特异和敏感的,CD14,为单核细胞特有,抗髓过氧化物酶
(MPO)为髓系特有,CD34为造血干细胞标记,CD38为造血祖细胞标
志,CD41a,CD41b,CD61,血小板过氧化物酶(PPO)为巨核系特
有,Cylg+,PC—1+,PCA+是浆细胞的胞质特点.急淋可分为:LI,L2,L3
三型,AML1基因重排可作为本病基因诊断的标志.浆细胞白血病:WBC
高BPC少血片中浆细胞多至20%以上骨髓增生活跃,糖原与核糖核酸
染色均阳性。多毛细胞白血病:全血细胞少,多毛细胞的特征:胞体
大小不一直径为10—20微米(似大淋)毛发突出的特点是边缘不整
齐有许多不规则纤绒突起,活体染色时优。约有48—60%病例呈干抽,
POX,NAP,SB染色阴性ACP阳性。骨髓增生异常(MDS):贫血BPC,
WBC少。有异形粒细胞(Pelgerbuet样变),可有大而畸形的火焰血
小板。非霍奇金淋巴瘤的组织病理:淋巴细胞型,组织细胞型(网状
细胞肉瘤),混合细胞型,未分化型。玫瑰花结试验:绵羊阳为T淋,
小鼠和EAC阳为B淋。多发性骨髓瘤:单一浆细胞增生,红细胞常呈
“缗前状”,早期骨髓呈灶性分布,异常浆细胞一般5—10虬尿中
可有浆细胞和B—J蛋白(除不分沁型),CA高P和ALP正常或高,
可伴尿毒症,免疫电泳有“M”成份:70%IgG,23—27%IGA,IgD少,
IgE罕见。血小板上有钠泵和钙泵。细胞器主要有:A颗粒,致密颗
粒,溶酶体颗粒。TXA2是腺昔酸环化酶的重要抑制剂促进血管收缩。
血小板功能:黏附,聚集,释放,促凝,收缩,维护内皮完整性。血
小板糖蛋白测定:GPIB缺乏见于巨大血小板综合征,GPHB/HIA缺
乏见于血小板无力症。依赖维生素K凝血因子:FII,FVII,FIX,FXo
接触凝血因子:FXII,FXLPK(激肽释放酶原)。对凝血酶敏感的
凝血因子:FLFV,FVIILFXIIIo内源途径指FXH被激活到
FIXA-VIIIA-CA-PF3o外源途径指从TF到TF-FVHA-CA。PT11秒到
14秒,过3秒异常。PTR(凝血酶原比值,受检值/正常对照),INR
(国际标准化比值):要先求ISI(国际敏感指数):所用组织凝血
活酶与ISI已知的国际参比品相比较的值。ISI=已知ISI*斜率。ISI
值低,试剂敏感度高。INR=PTRISIo血友病是VIII,IX,XI因子异
变。DIC时-,优球蛋白溶解时间(ELT)常缩短小于70分,血浆鱼精
蛋白副凝固试验(3P)在DIC失代偿时为阳性,血清FDP高大于40mg/L
是DIC诊断中最敏感指标之一。ATTP是监测普通肝素的首选指标。
PT是监测口服抗凝剂的首选指标。
生物化学:
糖酵解:葡萄糖至乳糖。葡萄糖-一葡萄糖6磷酸(已糖激酶,不可
逆,1ATP)-一果糖6磷酸(磷酸已糖异构酶)--1,6果糖二磷酸
(6磷酸果糖激酶,最重要点,不可逆,1ATP)一磷酸丙糖(醛缩酶,
可逆)--3磷酸甘油醛-一磷酸烯醇式丙酮酸一-(经丙酮酸激酶)
一烯醇式丙酮酸和ATP(不可逆)。可生成2分子ATP。糖有氧氧化:
糖酵解产物NADH进入线粒体一丙酮酸经其脱氢酶复合体氧化脱竣
-一乙酰C0A(关键不可逆)是进入三竣酸循环的开端(特点:柠檬
酸合成A-酮成二酸为不可逆,故三竣亦不可逆,无净分解也无净合
成,氧化乙酰C0A的效率取决于草酰乙酸的浓度,限速步骤是异柠檬
酸脱氢酶,是变构酶ADP是激活剂,ATP和NADH是其抑制剂。可生
成36或38ATP。糖异生:非糖物质转为葡萄糖。肝脏,是体内单糖
生物合成唯一途径,有四个关键酶:葡萄糖6磷酸酶,果糖1,6二
磷酸酶,丙酮酸竣化酶,磷酸烯醇式丙酮酸激酶。血糖受神经,激素,
器官调节。升高血糖:胰高血糖素,糖皮质激素,生长激素,肾上腺
素。降低血糖:胰岛素(B细胞分泌,其靶细胞受体是酪氨酸特异蛋
白激酶,糖尿病分型:1型:内生胰岛素或C肽缺,易出酮症酸中毒,
高钾血症,多发于青年人。2型:多肥胖,具有较大遗传性,病因有
生物活性低,基因突变,分泌功能障碍。3特异型4妊娠期糖尿病。
LPL(脂蛋白脂肪酶)活性依赖胰/胰高比值。慢性糖尿病人可有:A-
晶体蛋白糖基化而白内障,并发血管病变以心脑肾最重。糖尿病急性
代谢合并症有:酮症酸中毒(DKA,高血糖,高酮血症,代谢性酸中
毒),高血粮高渗性糖尿病昏迷(NHHDC肾功能损害,脑血组织供血
不足),乳酸酸中毒(LA)。血浆渗透压=2(NA+K)+血糖浓度。静
脉血糖〈毛细血管血糖〈动脉血糖。不能立即检查应加含氟化钠的抗
凝剂。肾糖阈:8.82—9.92o了解肾糖阈的方法:六点空腹取血,尿,
餐后七点,八点再取血,尿分别测血糖,尿糖。如果三次血糖都小于
8.82而测出血糖,说明肾糖阈低,如果都大于11.02而无尿糖,则
高。糖耐量试验:禁食10—16,5分钟内250毫升75克葡萄糖水每
30分钟取血一次。糖化蛋白与糖尿病血管合并症有正相关。糖化Hb:
可分为HbAIA,HbAIB,HbAIC(能与葡萄糖结合),测定时主要测HbAI
组份或HbAIC(4%—6%),反映前8周水平,主要用于评定控制程度
和判断预后。糖化血清蛋白:类似果糖胺,2—3周,用硝基四氮哇
篮法或酮胺氧化酶法,C肽的测定可以更好地反映B细胞生成和分泌
胰岛素的能力。乳酸测定时加入L-谷氨酸使之与丙酮酸反应随时除
去反应产物使反应向右。血糖恒定主要是保证中枢神经供能(脑细胞
用能完全来自糖)。血糖降低反应的阈值是:4.6o低血糖症状是指
脑缺糖和交感神经兴奋。胰岛B细胞瘤临床特点:空腹或餐后4—5
发作,脑缺糖比交感神经兴奋明显,有嗜睡或昏迷,30%自身进食可
缓解故多肥胖。糖分解代谢异常:丙酮酸激酶(PK)缺乏病,丙酮酸
脱氢酶复合物缺乏症,磷酸果糖代谢异常。血脂由中性脂肪和类脂。
电泳图:乳糜微粒,B-脂蛋白,前B脂蛋白,A-脂蛋白。超速离心法:
乳糜微粒(APOB48),VLDL,IDL,LDL,LP(A),HDL(密度从小到
大,分子从大到小)。CM90%含TG,VLDL中TG占一半以上,IDL(胆
固醇含量最高)中载脂蛋白以AP0B100为主,LP(A)由一分子的
AP0B100和APO(A)以单个双硫键相连,与纤溶酶原有同源性,可作
为动脉硬化性心血管疾病独立危险因素指标,直接在肝中产生。
HDL(apoal和apoa4)中脂质和蛋白质各占一半。肝脏是载脂蛋白合成
部位。脂蛋白受体是位于细胞膜上能与脂蛋白结合的蛋白质。LDL受
体:APOB/E受体,VLDL受体:肝中未发现,APOE受体:仅存于肝细
胞表面。肝素引起LPL酶释放入血称为肝素后现象,AP0CH是激活
剂,AP0CHI是抑制剂。LCAT(卵磷脂胆固醇酰基转移酶)最优底物
是新生的HDL。HDL的代谢是胆固醇逆转运途径。LDL是血液中主要
携带胆固醇的脂蛋白。胆固醇是胆汁酸唯一前体和所有类固醇激素包
括性激素和肾上腺素的前体。LDL是冠心病的危险因素,是血脂异常
防治的首要靶标。高TG血症中,小而密的LDL(B型)增高,则APOB
(是动脉粥样硬化标志物)多CHOL少,出现LDL—C不高而血清APOB
高的“高APOB脂蛋白血症”。前白蛋白:5.4(分子量)/4.7(等电
点),运载维生素A。白蛋白:6.64/4-5.8内源性氨基酸营养源,酸
碱缓冲能力,载体,维持血浆胶体渗透压。A1-酸性糖蛋白:4.0/2.7-4
包括等分子的已糖,已糖胺,唾液酸。AI-抗胰蛋白酶5.5/4.8。血
红素结合蛋白:5.7/两对肽链(A和B)A2B2四聚体。A2-巨球蛋白:
80/5.4分子量最大。铜兰蛋白:16/4.4糖蛋白,单链,有氧化酶活
性,协助诊断“肝豆状核变性”。B2微球蛋白:1.18存在于有核细
胞表面,特别是淋和肿。CPR:12/6.2O醋酸纤维素薄膜及聚丙稀酰
胺凝胶电泳最常用。蛋白电泳后正极起:白蛋白,Al,A2,B,R-球
蛋白。肝硬化时出现B和R难以分开而连在一起叫:B—R桥,是由
于肝纤维化导致IGA增高所致。疾病急性相时、前白蛋白,白蛋白,
转铁蛋白相应低下。CK和GGT都是男性高于女性,且酒后GGT升高
明显。酶释放的速度与其分子量成反比(可分析各种酶在病理时进入
血液的先后)。酶活性监测方法有:分光,旋光,荧光,电化学,化
学法,核素测定,量热法。用免疫法测酶的优点是灵敏度和特异性高。
酶反应动力学中所指速度就是反应的初速度。KM值只与酶性质有关,
与浓度无关,最小KM值的底物叫最适底物或天然底物。LD,ALP在
融冻时被破坏,LD在低温反不如室温稳定的现象为“冷变性”。在
实验规定的条件下(温度,最适PH,最适底物物浓度时),在一分
钟内催化1UM0L底物发生反应的所需的酶量作为1个酶活力国际单
位。同工酶的差异是由其结构不同造成的。CK—的亚型有:MM1,
MM2,MM3。CK—MB的亚型:MB1,MB2。CK含量和肌肉运动相关,其
量与肌肉总量有关。甲亢,久卧床病人总CK(主要CK—MM)可下降。
LD含量:LD2(H3M)LD1(H4主要在心,RBC)LD3(H2M2,肺脾)LD4
(H3M)LD5(M4横纹肌,肝)。AST的同工酶:细胞质内:C—AST
线粒体内:M—ASToNADH被氧化为NAD,可在340nM处连续监测吸光
度下降速度。重症肝炎由于大量肝细胞死亡,血中ALT可仅轻度升高,
临终时明显下降,但胆红素却进行性升高叫:酶胆分离。405NM处吸
光度增高(可测ALP,GGT等)。双甘肽是谷氨氨酰基的受体。GGT
含量以肾脏最高其次是前列腺,胰,肝,脑。代谢内生水约300ML,
水的出入量调节在下丘脑,NA=HC03+CL+12(10)mmol/L,渗透压
(756—760KPA)中摩尔渗量:294—296mOSM/L,根据钾钠糖尿素的
浓度可计算血浆晶体渗透压,阴离子隙(AG)即钾钠与HC03,CL的
差值,总阳减总阴。升高多见于:肾功不全的氮质血症或尿毒症引起
的磷酸盐硫酸盐储留,乳酸堆积,酮体堆积。调控钠排出:球一管平
衡,肾素一血管紧张素一醛固酮系统,抗利尿,糖皮质,甲状腺(旁
腺),心钠素。调节钾:醛固酮(潴钠排钾),糖皮质。水过多:高
渗性(盐中毒)等渗性(水肿)低渗性(水中毒)。钠浓度是血浆渗
透浓度的决定因素。低钠有肾性和非肾性,高钠见于:水摄入少,排
水多,钠潴留。不论血钾水平如何,钾的浓度与细胞外液中HC03直
接有关而与PH的变化关系不大。火焰光度法是一种发射光谱分析法。
内标法是标本及标准液采用加进相同浓度的内部元素进行测定。冠酸
指复环王冠化合物。离子选择电极法(ISE)敏感膜将离子活度换成
电信号。血气分析有:PH,P02,PC02,HC03oHC03与H2c03的比值
维持酸碱平衡。PH=PK+log(A—/HA)简称H—H方程。血中Hb02量
与Hb总量之比为血氧饱和度。其达50%时P050(3.54KA)。集合管
不包含在肾单位中。肾小球滤过膜分:内皮细胞,基底膜,上皮细胞
三层。近曲小管是重吸收的重要部位。自身调节是指肾血流量及肾小
球滤过率基本保持不变。肾神经调节主要是对肾入球小动脉作用致肾
小球滤过率下降。球管反馈(TGF)是对更远端的肾小管作更精细调
节。其中最主要的是抗利尿激素和醛固酮。与日增加的血尿素氮和血
肌酎升高是急性肾功能衰竭的可靠依据,分少尿期,多尿期,恢复期。
慢性肾衰多不可逆,分肾贮备能力丧失期,氮质血症期,肾功能衰竭
期,尿毒症期。单位时间内两肾生成的滤过液量为肾小球滤过率。肾
小球清除率:GFR=V/P*U,内生肌酎清除率:Ccr=U*P/V(ml/min),
小于30为重度,20为肾衰,10为终末肾衰,80—50为肾功能不全
代偿期,50—20为失代偿期。血清B2微球蛋白(小于2.5mg/L):与
血清肌酎有正相关,测定对氨基马尿酸(PAH)清除率和碘锐特清除
率均可反映肾血流量,放射性核素肾图能比较敏感地反映肾血浆流
量。远端肾单位功能试验有:浓缩一稀释试验,尿渗量测定,渗透溶
质清除率,自由水清除率等。渗量测定常采用冰点下降法,尿渗量:
600—1000mosm/kg血浆渗量:275—305mosm/kg它们的比值反映重吸
收后形成的尿液中溶质的浓缩倍数,急性肾小管坏死<1.2,尿
NA>20mmol/l肾衰时<1,而小球损伤时此值>1.2,Na<20mmol/lo早期
肾损伤的检测项目可大致分:肾小球标记,肾小管标记,肾组织蛋白
/相关抗原。微量白蛋白(mAlb):尿中排出量为30—300mg/24h内,:
是糖尿病诱发肾小球微血管病变最早期的客观指标之一,是高血压性
肾损伤的早期标志。尿转铁蛋白(UTf)是679个氨基酸构成的糖蛋
白,是反映肾小球滤膜损伤的灵敏指标。选择性指数(SIP):即测
定IGG清除率与转铁蛋白清除率的比值,低分子量蛋白(LMWP)中
A1—微球蛋白和尿B2一微球蛋白(99个氨基的多肽,不含糖)是肾
小管一间质性肾病的早期标志。尿酶:分溶酶体酶和刷状缘酶二类,
常测NAG和AAPo胰液中的碳酸氢盐主要是中和胃酸和激活消化酶。
胰淀粉酶属A—淀粉酶,PH6.9是唯一在正常时尿中的血浆酶,与胰
腺提纯物区带相同为P一同工酶,与唾液腺提纯物相同为S一同工酶。
新生儿主要是S一同工酶,一岁以内测不出P一同工酶。发病后2—12H
升高,12—72H达峰,3—4天后正常。测定时限定性底物一般有4—7
葡萄糖(庚糖等),很多阴离子有激活淀粉酶的作用(CL,Br最强)。
淀粉酶清除率与肌酎清除率比值在2—5%(Cam/Ccr),降低见于巨
淀粉酶血症者。血清脂肪酶在急性胰腺炎时一4一8H内升24H达峰,持
续8—14天,但胭腺炎和巨淀粉酶血症时不升高。现用的尿胰蛋白酶
原一2的试纸定性方法是基于免疫层析的原理。激素(已知150多)
可分:
含氮类(多溶于水),类固醇类(要特殊蛋白结合)。主要受:下丘
脑-一垂体一内分泌腺一激素系统调节。一般用EDTA抗凝。Graves
病:甲状腺性甲亢,TT3是它早期疗效观察及停药后复发的敏感指标,
TRH试验中TSH不升高,TSAB阳性达80%—100%o甲减时严重可出现
黏液水肿。目前认为联合进行FT3,FT4,和超TSH测定是甲状腺功
能评估的首选方案和第一指标。TT4是判定甲状腺功能最基本的筛选
试验。TSH不受TBG浓度影响,是反应下丘脑一垂体一甲状腺轴功能
的敏感试验,尤其是对亚临床型甲亢和亚临床型甲减的诊断。肾上腺
髓质(嗜格细胞瘤最好发部位)是节后神经元转化为内分泌细胞(嗜
铭细胞),能合成,释放肾上腺素(E),去甲肾上腺素(NE),多
巴胺(DA),结构上均为儿茶酚胺类,血液及尿中的肾上腺素儿全为
肾上腺髓质分泌,尿香草扁桃酸(VMA)是儿茶酚胺的代谢产物测定
时芬氟拉明可致假阴性。胰升糖素激发试验禁用于糖尿病人。肾上腺
皮质分(由外向内):球状带(盐皮质激素--醛固酮),束状带(糖
皮质激素-一皮质醇及少量皮质酮,是机体应激反应时的主要激素),
网状带(雄激素和少量雌激素)。皮质醇增多最多见是垂体促肾上腺
皮质激素(ACTH,呈脉冲式分泌,上午8时至10时最高,夜为上午的
二分之一)分泌亢进引起的库欣病。库欣综合症的病理特点:脂肪代
谢障碍•(面部和躯干部脂肪堆积,向心性肥胖),蛋白质代谢障碍(处
氮负平衡,蛋白消耗过多),糖异生加强,电解质紊乱。原发性肾上
腺皮质功能减退(Addison病):醛固醇(人体主要的储盐激素)缺
乏,糖异生减弱,肾排水减弱,出现皮肤色素沉着。尿17—羟皮质
类固醇(17—0HCS):多用传统的Porter—Silber法测,男11—33,
女8—25,用浓盐酸防腐。尿17一酮类固醇(17—KS):男34—69,
女17—52,采用Zimmerman法测。当肾上腺癌或不伴库欣综合症时
KS比OHCS增高更高,而肾上腺瘤却倾向于降低或正常。血游离皮质
醇和尿游离皮质醇呈正相关,是检查肾上腺皮质功能紊乱的首选项
目。肾素由肾小球旁器分泌,是人体最强的升压物质也是让肾上腺释
放醛固醇的主要刺激物。垂体激素均为多肽或糖蛋白,TSH,LH,FSH
均由A,B两个多肽亚基组成。生长激素(缺乏得垂体性侏儒症,GH)
的促生长作用必须通过生长调节素(SM)的介导作用。SM-C及SM结
合蛋白测定因其不跟GH的分泌而波动,故单次即可了解GH功能状况。
催乳素瘤是功能性垂体腺瘤中最常见的,好发于女性。所有性激素都
是类固醇。睾酮代谢物为雄酮是17—KS的主要来源,雌二醇(生物
活性最强的天然雌激素,女性早熟指标))和雌酮代谢物是雌三醇,
孕酮(确证排卵)代谢物是孕烷二醇(黄体功能指标)。测定早晨的
睾酮(男青春期10—20,成年期:300—1000)水平可以对男性睾酮
水平下降作出最好评价。GNRH兴奋试验主要检测腺垂体促性腺的贮
备功能状况。可以引起性功能紊乱的性激素合成酶有:C—17,20裂
链酶,17—B羟类固醇脱氢酶,5A—还原酶。尿游离皮质醇无昼夜变
化故可靠反映游离皮质醇水平。内标法只适用于双通道型原子吸收分
光光度计。聚丙烯酰胺电泳普遍用于分离蛋白质及较小分子核酸。琼
脂糖电泳适用于分离同工酶及其亚型,大分子核酸。等电聚焦电泳适
合分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组份,分辨率最好。离心力
(FC)=M(质量)3(角度)2X(离轴心距离),相对离心力(RCF)
=1.118*10-5*N(转数)*X。密度梯度离心法:1速率区带离心法:离
心后近轴处密度小,一般用于分离大小相异而密度相同的物质。2等
密度区带离心法:当管底介质的密度大于粒子的密度时,粒子上浮,
用于分离大小相似而密度差异大。凝胶层析常用的是SephadexG系列
主要用于脱盐分离提纯高分子物质。离子交换层析主要用于分离氨基
酸多肽蛋白质也可是核酸等。亲和层析可用于纯化生物大分子,稀释
液的浓缩不稳定蛋白的贮藏分离核酸。聚焦层析常用凝胶是Monop多
元缓冲交换剂是PBE。K值过高线性宽但重复性差,过低精密度好但
线性差。酶偶联法已是是广泛最频繁的酶测定法,主要用30和37,
它有明显的延滞期,最好条件是酶反应为限速度,动力学上为零级反
应而指示酶是一级反应。Q10值即温度增加10度化学速度的变化率,
约在1.5—2.5。
免疫学:
免疫防御(对外)免疫自稳(防自身免疫病)免疫监视(防肿瘤)。
标记免疫技术应用最多,自动化是免疫学检验发展趋势。抗原的表位
至少有二种方式:顺序或线性表位,三维结构的构象表位。天然抗原
绝大多数是胸腺依赖性抗原(TD—AG)o超抗原被T细胞识别时虽然
要与MCHII类分子结合,但不受H类分子的限制,可以直接活化T
细胞而且效率高。抗体由浆细胞产生。抗体分子上VH和VL是抗原结
合部位,CL,CH1是遗传标记所在,CH2有补体结合点,CH5能固定
组织细胞,CH3和CH4还参加I型变态反应。免疫学中常用木瓜和胃
蛋白酶。免疫球蛋白的血清型有:同种型(正常个体都有)同种异型
(只存在同种的某些个体中)独特型(某一个体独有的。独特性网络
在免疫应答的调控中起重要作用)。天然IgG分子无活性。IgM(五
聚体,天然凝集素和冷凝集素,是B细胞膜上主要表面膜Ig)激活
补体能力最强,IgG(单体,电泳最慢,再次免疫应答的主要抗体)
至少要两分子。0.1m,2筑基乙醇能破坏IgM但不破坏IgG,可以区分
它们。母乳中的分泌型IGA提高了婴儿出生后4-6个月内的局部免
疫屏障,常称为局部抗体。人类重链基因位于14号染色体上,K基
因位于第二号染色体上。参与补体激活经典途径的固有成份按先后为
Cl,C2ooooC9,Cl由Clq,Clr,Cls,三种组成。灭活的补体在片
在符号前加i,有酶活性的上加一横。补体大多是糖蛋白多属B球蛋
白,Clq,C8是r蛋白。Cis,C9是a球蛋白。C3含量最多,C2含量
最少。替代途经的激活物主要是细胞壁成分。补体清除免疫复合物的
方式:吞噬调理,免疫粘附,免疫复合物抑制。编码人C4,C2,B因
子的基因在第六染色体短臂上与MHC的基因相邻,命名为III类组织
相容性基因。产生补体主要是肝脏主要是巨噬细胞。已发现的归巢受
体有:CD44,LFA-1,VLA-4,MELT4/LAMT等。CD2表达于全部T细
胞和NK细胞。CD3表达在全部T细胞,CD4(辅助性T细胞)/CD8(细
胞毒性T细胞)相互关联但意义不同是T细胞亚群的表面标志。SIG
的功能是作为B细胞表面的抗原受体可与相应抗原特异性结合并将
抗原内摄处理。MHCH是辅佐细胞(AC)递呈抗原的必须物质是辅佐
细胞(有单核吞噬,树突状,B细胞)的标志。明确的白介素有15
个,IL-2主要由T细胞(CD+4)受抗原或丝裂原刺激后产生,15KD,
113糖蛋白。II型干扰素又称免疫干扰素或IFNR,主要由T细胞产
生。肿瘤坏死因子:TNEa:由细菌脂多糖活化的单核细胞产生引起出
血坏死也称恶病质素,TNFb:由抗原或丝裂原刺激的淋巴细胞产生有
肿瘤杀伤和免疫调节功能又称淋巴毒素。红细胞生成素(EPO)是糖
蛋白,30—39KD,主要由肾小管内皮细胞合成也可由肝和巨噬细胞产
生。人类MHC称为HLA复合体,位于第六对染色体的短臂上。其多态
性为复等位基因所致,当群体中位于同一位点的等位基因多于两种时
为复等位基因,HLA的遗传特点:单倍型,共显性,连锁不平衡。I
和II类MHC分子是引起同种异体移植排斥反应的主要抗原。当抗原
递呈细胞向免疫活性细胞递呈抗原时,免疫活性细胞在识别特异性抗
原时,必须识别递呈细胞的MHC抗原称为MHC限定性。HLA是体内最
复杂的多态性基因系统。抗原一MHCH类分子复合物与T细胞受体的
结合是使TH细胞活化的首要信号。细胞免疫的效应方式有:细胞毒,
迟发超敏。体液免疫以血清中有循环抗体为特征。炎症细胞有:中性,
肥大,嗜酸,嗜碱,血小板,内皮。炎症介质:血管和平滑肌收缩介
质,趋化因子,酶类,蛋白多糖。免疫炎症类型:IGE介导,免疫复
合物,细胞,皮肤嗜碱细胞型。抗原抗体结合基于结构互补与亲和性。
由一级结构决定。结合力有:电荷吸引,范德华力,氢键,疏水性作
用力。常用佐剂有:氢氧化铝,明矶(弗氏)是目前动物免疫中最常
用的,抗血清保存:4度,低温,冰冻干燥。抗体特异性纯化有:亲
和层析,吸附法。特异性鉴定有:效价,特异性,纯度,亲和力。脾
淋巴细胞特征是抗体分泌功能和能在选择培养基中生长,骨髓瘤细胞
则可无限分裂既永生性。细胞融合的选择培养基有三成份:次黄口票吟
(H)氨甲蝶吟(A)胸腺喀咤核昔(T)称为HAT培养基。液体沉淀
试验有:抗原稀释法和抗体稀释法及方阵滴定法。免疫固定电流常用
于M蛋白的鉴定。补体结合试验中5种成份分三个系统(反应,补体,
指示)不溶血为阳性。常用的标记酶有辣根过氧化物酶(底物为邻苯
二胺,四甲基联苯胺)碱性磷酸酶(底物为磷酸酯)。抗体制备常用
二醛法及过碘酸盐法。RIA(放免)核素标记抗原,竞争抑制,2-3
个数量级,标记物限量。IRMA(免疫放射)核素标记抗体,非竞争结
合,3个数量级以上,标记物过量。常用的荧光素有:异硫氟酸(FITC)
四乙基罗丹明(RB200)四甲基异硫氟酸罗丹明(TRITC)。常用标记
蛋白的方法有:搅拌法和透析法。荧光抗体鉴定包括效价及荧光素与
蛋白的结合率,大于L16为理想,一般固定标本的荧光抗体以F/P=l。
5为宜用于活细胞染色的以2。4为宜。时间分辨荧光免疫测定以锢
系元素箱合物为荧光标记物,偏振免疫测定的偏振波长是485(蓝光)。
发光免疫技术:生物发光有荧火虫荧光素,化学发光底物有:氨基苯
二酰肿类主要为鲁米诺及异鲁米诺衍生物,哑咤酯类,电化学发光底
物为三联毗钉另一类为三丙胺。胶体金颗粒由一个基础金核及包围在
外的双离子层构成,其性质有对电解质敏感性,呈色性,光吸收性
(510—550)o双抗体夹心法的质控点最好是相应抗原。外周单个核
细胞的分离的分层液常用:Ficoll(由上到下为血浆,单个核细胞,
粒,红)和Percoll(由上至下:死细胞,单个核细胞,淋,红,粒)。
纯淋巴细胞群的采集有:黏附贴壁法,吸附柱过滤法,磁铁吸引法。
亚型的分离法有:E花环沉降法,尼龙分离法,亲和板结合法,荧光
激活细胞分离仪法。淋巴细胞活力测定常用台盼蓝染色法,死为蓝色。
保存时二甲亚砚为保护剂。植物血凝素(PHA)刀豆素(CONA)刺激
T细胞增殖。增殖试验有:形态法(分别计数淋母,过渡性淋母,核
有丝分裂相及成熟小淋,前三者为转化细胞,计200个,算转化率)
核素法。SMfg是鉴定B细胞可靠的指标。B细胞功能检测方法:溶血
空斑形成试验(直接法只能检测IgM生成细胞,其它用间接法,即在
脾细胞和SRBC混合时加入抗Ig抗体。B细胞增殖能力试验。测定人
NK细胞活性多用以K562细胞株为靶细胞,测鼠NK细胞活性则用YAG
细胞株。嗜酸粒细胞活化产物的测定:产物有:阳离子蛋白(ECP),
主要碱基蛋白(MBP),X,EPD,EDN等,其中ECP毒性最强因而认
为是嗜酸的特异性标志。特异性鼻粘膜激发试验用变应原非特异性采
用乙酰甲胆碱或组胺。新月体性肾小球肾炎的免疫病理类型有:免疫
复合物,抗肾小球基底膜(GBM)抗体,抗中性白细胞质抗体。含有
新月体的肾小球数目和比例是该病的关键。膜性增生性肾小球肾炎
(MPGN)是原发性肾小球病中唯一具有独特的血清补体异常的疾病测
C3NeFo自身免疫病(AID)的特征:高滴度自身抗体,病理特点为免
疫炎症损伤与抗原分布一致,能建动物模型。不溶性DNP(抗核蛋白
抗体)通常完全被DNA和组蛋白吸收,是形成狼疮细胞的因子。抗
dsDNA抗体对SLE有较高的特异性。抗Sm抗体是SLE的特异性标志
之一。ANA阳性的荧光现象分:周边型表示抗DNA抗体存在(SLE),
均质型表示有抗核蛋白抗原(DNP)抗体,斑点型多为抗ENA抗体(结
缔组织病),核仁型多为抗核小体抗体(硬皮病)。抗乙酰胆碱受体
抗体的检测对重症肌无力(MG)具有诊断意义。Hep—2细胞(人喉
癌上皮细胞株),Hela细胞(宫颈癌细胞株),Farr法测定dsDNA抗
体的特异性高为公认标准法,当抗dsDNA抗体结合率大于20%时对SLE
有意义。口干症和干燥性角膜炎是干燥综合症(SS)的主要临床表现。
多发性骨髓瘤(最常见免疫增殖病)以IGG居多,重链病类别常见R,
A,U三型。原发性B细胞缺陷病:全IG缺失(BR0T0N病,女带,男
患病,最先考虑测IG浓度,CD分子,SMIG),部分缺失,IG正常但
无抗原反应。原发性T细胞缺陷病:易发生GVHR。原发性联合免疫
缺陷病,以重症联合免疫缺陷(SCID)的预后最差,属性联或常染色
体隐性遗传,T细胞表面存在特异性CD抗原,通过特异性单克隆抗
体检测是诊断细胞免疫最有价值的试验。补体缺陷发病率最低。性联
慢性肉芽肿(CGD)是性联遗传,女带男患病,特点是吞噬细胞不能
产生超氧化物酶杀菌,白细胞低于1500时应考虑,可作四噪氮蓝
(NTB)还原试验,REBUCK皮肤窗检测。只有感染了乙肝才肢感染丁
肝。艾滋病T淋巴细胞亚群检查可发现T细胞绝对数下降,CD4+淋巴
细胞也下降,CD4/CD8小于1。抗体主要是P24,GP120。CEA大于60
微克/升时可见于结肠,胃,肺癌。手术6周后CEA水平正常。血清
CEA结合甲状腺降钙素测定有助于甲状腺髓样癌的诊断和估计。AFP
是原发性肝癌的最灵敏最特异的标志。胰胚胎抗原(P0A),糖类抗
原有:CA125(上皮性卵巢癌(基因有K-RAS)和子宫内膜癌)CA15-3
(乳腺癌,基因有P53,C-ERB-2))CA19-9(胰腺,结直肠癌)CA50
(胰腺结直肠癌)AFU(A—L岩藻糖普酶)是原发性肝癌的新指标。
神经元特异性烯醇化酶(NSE)是神经母细胞瘤和小细胞肺癌(基因
有P53,RB)的标志物。HLA-A,B,C,DR,DQ位点的抗原可用血清
学方法进行检测,所以称为SD抗原,采用补体依赖的细胞毒(CDC)
试验,HLA-D,DP位点的抗原须用细胞分型进行鉴定,称为LD抗原,
采用混合淋巴细胞培养(MLC)o排斥反应有:宿主抗移植反应(HVGR)
和移植物抗宿主反应(GVHR)o
微生物学:
生物学按界门纲目科属种分类,种是最小单位。
结核菌可利用甘油为碳源,梭状芽胞菌可以氨基酸为碳源,流行性感
冒杆菌要V,X因子才能生长。致病性岛:由基因编码决定的一团与
致病性相关的基因组。细菌诊断流程有:双岐索引法,表解法,数字
编码鉴定法。超净工作台应选择垂直气流通风方式。0/129抑菌试验
对弧菌有用而对气单胞菌无用。杆菌肽用于A(敏感)与非A群链球
菌的鉴定。奥普托欣试验:肺炎链球菌敏感。杂交分:斑点,菌落原
位,Southern(DNA)印迹,Northern(RNA,DNA)印迹。L型细菌(形态
多样,染色不定,可过滤,渗透压敏感,生化减弱等)培养应高渗(20%
蔗糖),染色多为G染阴性,形态不一(巨球形是特征),固定要用
10G/L糅酸不能用火焰。一般菌落有:油煎蛋样(L),颗粒型(G),
丝状菌落(F),鉴定要点:染色易变多形性,生长在增菌液中微浑,
颗粒样沉淀或沿试管壁生长,返祖现象。原生质体与原生质球都是细
胞壁缺陷的细菌。肽聚糖的结构由聚糖骨架,四肽侧链和五肽交联桥
(G-无交联桥)。磷壁酸为G+特有,分壁和膜两种。外膜层由脂多
糖,脂质双层,脂蛋白组成。细胞质内有核蛋白体(蛋白合成地),
核质(主要遗传物质)质粒,胞质颗粒,是细菌蛋白质和酶类合成的
重要场所。鞭毛是由细胞质伸出的蛋白性丝状物。性菌毛仅有1—10
根,毒力和耐药质粒都能通过它转移,有致病性。RNA主要存在于细
胞质中占细菌干重的10%,DNA存在于染色体和质粒中。G+等电点
2—3,G-等电点4—5。细菌营养转运的方式有:离子,透性酶,磷
酸酶。营养摄取的机制:被动扩散,主动吸收,基团转位。嗜冷菌最
适温为10—20,嗜温菌为20—40,嗜热菌为50—60o细菌代谢所需
能量主要以生物氧化作用而来。G-菌的菌体脂多糖能引起发热故称热
原质。土中的厌氧芽胞杆菌是创伤感染病原菌的主要来源。饮用水中
每毫升总数不过100个,1000毫升水中大肠杆菌群不过3个。有芽
胞破伤风菌需沸水煮三小时才杀死。水中加入2%碳酸钠能将沸点提
到105度又能防止金属生锈。紫外线波长265—266时杀菌力最强。
无芽胞菌一般的致死为1800—6500微瓦/CM,杀死芽胞要十倍。滤菌
器用于除菌的孔径是0.22微米,另外以石棉板为滤板的金属滤器称
SEITZ滤器(蔡氏滤器)按滤孔大小分K:最大,澄清用,EK—S最
小,可阻止大病毒通过EK:居中,除去一般细菌。玻璃滤菌器分
Gl—G6,G5,G6两型能阻止细菌通过。高压灭菌指示物:嗜热脂肪
芽胞杆菌(ATCC7053),紫外线杀菌指示物:枯草芽胞杆菌黑色变种
(ATCC9372)o细菌遗传物质主要在于染色体质粒和转位因子中。影
响基因表达的因素有:调控部位,调节蛋白,效应分子。质粒:不依
赖染色体而复制,不相容性,转移性,指令性。主要有耐药质粒,C0L
质粒(编码肠毒素)VI质粒(编码细菌与致病性有关的蛋白)。转
位因子为存在于细菌染色体或质粒上的一特异的核甘酸序列可在DNA
中移动,主要有三类:插入顺序(最小的转位因子),转座子,转座
噬菌体。病毒突变株分:空斑和宿主依赖性。遗传型变异机制有突变,
基因转移,重组。突变:突变率由复制的准确度,DNA发生损伤的机
会,及对损伤DNA修复程度来决定。一般在106—109。碱基的置换:
喋吟换喋吟,喀咤换口密咤为转换,喋吟换喀咤为颠换。转化:受体菌
直接撮取供体菌提供的游离DNA片段整合重组使受体菌的性状发生
变异。一般有链,嗜血,芽胞菌有此功能。G+菌的感受态是由感受态
因子(CF)的胞外信号诱导的。转导:以噬菌体为媒介,将供体菌的
基因转移到爱体菌内而致受体菌基因改变,分普遍和局限。接合:受
体菌和供体菌直接接触,供体菌通过性菌毛所带的F质粒或类似遗传
物质转移到受体菌。溶源性转换:是噬菌体的DNA与细菌染色体重组,
使宿主遗传结构发生变异。原生质融合:两种经过处理失去细胞壁的
原生体混合和可发生融合后的双倍体可发生染色体间的重组。基因重
组可使基因再激活表现为:交叉复活和多重复活。粘附素是细菌表面
的蛋白质有菌毛和非菌毛。进入宿主:黏附,定植,侵入,转归。毒
力有侵袭力和毒素。侵袭力:菌体表面结构,菌毛,侵袭性酶(凝固
酶,透明质酸酶,链激酶,胶原酶等)。细菌的内毒素一般由:脂质
A(主要成份),非特异性核心多糖,菌体特异性多糖。一般7--10
天后机体产生特异性免疫。IgG和IgM能在血中直接中和病毒。医院
感染大多以散发形式流行。抗感染治疗原则:安全,有效,经济,关
键是有效。细菌种的科学命名采用拉丁文种属双命名法,前一字为属
名,名词,后一为种名,形容词。目前国际上普遍采用伯杰分类系统,
也有用CDC(USA)o目前以细菌细胞壁的结构特点作最高一级分类
依据将原核界分为薄,坚,软,疵壁四门。科,属,种分类主要依靠
生化特性和抗原结构。日光灯波长约0.5微米。显微镜的分辩率为波
长一半。荧光显微镜的光源为高压汞灯。抗酸染色:5%石碳酸一3%
盐酸酒精一美蓝。糖类发酵是鉴定细菌最常用的生化反应。怀疑细菌
性心内膜炎时血培养不少于三次。不能立刻接种的血应用SPS抗凝。
直接镜检2H报告,最后鉴定和药敏一般不过3天,除血外,必须在
24H内预报。肠杆菌科的强选择(SS琼脂)弱选择(EMB,麦康凯)。
A溶血是草绿色,b溶血是透明环,r溶血红细胞不溶解,双环。细
菌数量达106—107CFU/ML时培养肉汤才见混浊。血培养中有105菌
落形成单位(CFU)/血时才能通过革兰氏染色检出细菌。近交系动
物:采用兄妹交配(或亲子交配)繁殖20代以上的纯品系动物。突
变种纯系动物:实验动物正常染色体中某个基因发生了变异的具有各
种遗传缺陷的突变品系动物。纯杂种动物:无计划随意交配的动物。
无菌动物:体表肠道内无菌体内无抗体。悉生动物:给出无菌动物引
入已知的5—17种正常肠道菌的动物。小白鼠对肺链,破伤外毒素敏
感,脯鼠对结核白喉易感,猫对金葡萄菌肠毒敏感。测定病原体的感
染性最好选用无菌动物或悉生动物。冷冻干燥保存法是最有效的方
法,利用各种斜面和半固体加石蜡油是最常用和最简便的方法,一般
不含糖,不用液体。真菌,霍乱,铜绿及粪碱需在室温保存,而脑膜
炎,淋球,初次分离的流感嗜血菌保存于37度。每转种三代要鉴定
一次。AMS系统是目前微生物鉴定中最常用的自动化仪器。葡萄球菌:
产生脂溶性色素,多数分解甘露醇产酸液化明胶和产生血浆凝固酶。
蛋白抗原(A蛋白)种属特异无型特异,多糖抗原(A,B,C)是半
抗原,有型特异。是抵抗力最强的无芽胞菌。粪便呕吐物应接种高盐
卵黄或高盐甘露醇琼脂,触酶阳性,凝固酶阳性玻片法筛选,试管法
确证。必须做苯哇西林的敏感试验。链球菌:沉淀生长(肺链为混浊),
在含腹水的培养物上生长良好,溶血株呈絮状或颗粒状生长,不溶血
株呈均匀混浊生长。A链对杆菌肽敏感青霉素G为首选,B链CAMP试
验阳性氨基糖昔类合用,B溶链致病性最强,A溶链为条件致病菌。
儿乎所有的肺链对OPTOCHIN敏感。肺链:最适PH7.6—8.0,在含
3%—5%的兔血清中生长良,培养时间过长会自溶管底澄清,分解菊糖,
胆汁溶解阳性。肠球菌属:能在高盐(6.5%NACL)高碱(PH9.6)40%
胆汁培养基上和10—45度生长,是G+菌中仅次于葡萄球菌的重要院
内感染病菌。临床上分离最高的是粪肠球菌,可分庆霉素高耐药和低
耐药,一般用B—内酰胺类和氨基糖昔类联合。脑膜炎奈瑟菌:脑液
中位于中性细胞内,不分解麦芽糖,能产生自溶菌不宜冰箱应立即送
检,冬末春初为流行高峰,青G为首选。淋球奈瑟菌:人类是唯一天
然宿主和传染源。最适PH7.5,对糖类生化最低只能发酵葡萄糖,主
要有菌毛蛋白,脂多糖,外膜蛋白抗原。细菌培养是目前世卫推荐的
唯一方法,培养基中应含两种以上抗生素(多为万古和多粘)。肠杆
菌科分型多采用苯丙氨酸脱氨酶和葡萄糖酸盐试验。可疑菌分别接种
克氏双糖铁(KIA)尿素靛基质动力(MIU)来定属。大肠杆菌:。引
%甲基红,V-P,枸椽酸)IMVIC试验:++—,KIA产酸产气,MIU+—,
有菌体(0)荚膜(K)鞭毛(H)三抗原,已知有171个0,99个K,
56个H,肠产毒(ETEC):霍乱样肠毒腹泻,肠致病性(EPEC):婴
儿腹泻,肠侵袭性(EIEC):志贺样腹泻,肠出血(EHEC):其中
0157:H7可引起出血性腹泻和溶血性尿毒症,是4岁以下儿童急性
肾功能衰的主要病原,678三月最高,北美最多见,肠黏附性(EAGGEC):
腹泻。志贺氏菌分痢疾,福氏,鲍氏,宋内四群,我国以福氏和宋内
常见,无荚无芽无鞭,KIA:K/A,产气+/-,H2S-,MIU-+/一,最后
可用诊断血清作群型鉴定。沙门菌:无芽无荚有鞭毛(除鸡沙门)多
数有菌毛,H2s可阳性,伤寒菌产酸不产气,菌体抗原有58种,鞭
毛抗原有两相即特异性和共同,表面抗原有VI,M,5三种,变异有:
S—R,H—0,V—W,相位。凡符合:KIA:K/A,产气+/-,H2S+/-,
MIU+-+,硝酸盐还原阳性,多价血清阳性的为沙门属。变形杆菌属有:
普通,产黏,奇异。普罗威登斯属有:产碱,斯氏,雷极,摩根菌只
有摩氏摩根菌。有明显多形性,呈球状或丝状,生长于10—43度,
普通和奇异呈迁徙样生长,三属氧化酶阴性,苯丙氨酸脱氨酶阳性
G-杆菌,加入石炭酸或苯乙醇使终浓度为lg/L和0.25%可抑制变形
菌迁徒样生长。耶尔森氏菌:有7种,鼠疫,假结核,小肠与致病有
关。鼠疫:有荚无芽无鞭,两极浓染,28—30度,PH6.9—7.1,液
体中培养好,底部可有钟乳石样,加入亚硫酸钠或脱纤维血有刺激生
长,龙胆紫亚硫酸钠为其选择性培养基,3%氯化钠上生长呈多形性。
小肠:无动无芽无荚G-,25度有周鞭毛,最适温20—28度,VP试
验25度阳性,37度阴性,KIA只利用葡萄糖,MIU22度动力阳性37
度阴性。假结核:25度有周鞭毛有动力37度无动力,最适温30,
PH6—8o枸椽酸杆菌:有弗劳地,异型,无丙二酸盐。只有弗劳地靛
基质-,H2S+,仅异型的丙二酸盐+,B一半乳糖甘酶,赖氨酸脱竣酶,
枸檬酸利用三试验:枸橡酸菌+-+,沙门-/+++,爱德华-+-。克雷伯
菌属:以肺炎克雷伯菌多见,菌体呈卵圆形或球杆状成双排列,有时
菌落出现黏液型用接种环可成丝,动力和鸟氨酸脱竣酶阴性是本菌最
大特点,三亚种区别:IMVIC试验:肺炎亚种一++,臭鼻亚种-+4),
鼻硬结亚种-+―。肠杆菌属:最适温30度,氧化酶阴性,有动力,
与大肠杆菌区别:IMVIC试验:肠:一++,大:++-o沙雷菌:最适
温10—36度,4%氯化钠下可长,产生灵红霉素(非水溶)和毗竣酸
(水溶),关键生化是DNA+和葡萄糖酸盐+。弧菌科:极端鞭毛,昔
露醇,脂酶,生长需要NaCL,对0129敏感五项,弧菌属+++++,气
单胞菌属-++一,邻单胞菌属---+,发光杆菌一+/-++。前三可引起
人类感染。霍乱菌:呈弧状或豆点状,滴片检查见鱼群状G-菌,常
用PH8。5的碱性蛋白陈水增菌培养,在硫代硫酸盐一柠檬酸盐一胆
盐一蔗糖平板(TCBS)上形成较大黄菌落,在含亚硫酸钾或庆大霉素
平板上呈灰褐色,有耐热的特异性0抗原(0--1群分AC的稻叶型,
AB的小川型,ABC的彦岛型)和不耐热的非特异性H抗原,1992年
发现的新流行的0139群,它即不被0—1群抗血清凝集,也不被
02—0138群抗血清凝集,常用的保存或运送有碱性蛋白陈水,文一
腊二氏,卡一布运送液。副溶血性弧菌:嗜盐性弧菌,是我国沿海地
区最常见的食物中毒病原菌,两极浓染,NaCL最适35g/L,无盐不长,
PH7.0—9.5,最适7.7,在TCBS上不发酵蔗糖菌落绿色,100g/L盐
内不长,神奈川试验是致病株能使人或兔红细胞发生溶血对马红细胞
不溶血为阳性。气单胞菌最适生长温度30度,但在0—45度皆可生
长。弯曲菌属是一类微需氧菌,不分解糖,氧化酶+,菌体弯曲逞豆点
状,S状或螺旋状有动力G-菌,5种5亚种,对人致病的主要是空肠
(人类腹泻最常见之一,43度生长,25度不生长)和胎儿亚种(免
疫功能低下时的败血症,脑膜炎等,25度生长,43度不生长),简
明弯曲菌在25度,43度均不生长,但都能在37度生长。要加入血
液血清才能生长,常用Skirrow,Butzler,Campy一BAP等培养基,
滴片可见投镖式或螺旋状。幽门螺杆菌:氧化酶+过氧化氢酶+,微需
氧,37度生长,25度和42℃均不生长的G-菌,初分要三四天,与十
二脂肠溃疡和胃癌有关。《伯杰系统细菌学分类》的标准:G染特性,
形态,鞭毛,芽胞,荚膜,代谢产物。有芽胞的厌氧菌只有梭菌属包
括83个种。厌氧菌每克粪中高达1012个,标本绝不能被正常菌污染,
应尽量避免接触空气。最理想的标本是组织,送到实验室后20—30
分钟内处理完不超过2H。应接种固体和液体两种培养基:尽量用新
鲜培养基,2—4小时内用完,应使用预还原培养基,液体培养基应
煮沸10分钟以驱氧并立即冷却。每份标本至少接种三个血平板,置
于有氧,无氧,5%—10%C02环境中培养。厌氧手套箱培养法是迄今
最佳厌氧培养仪器之一,太氧状态的指示剂有:美蓝和刀天青,无氧
时白色,有氧时美蓝蓝色,刀天青粉红色。紫外线下
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