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文档简介

实验微专题一DNA的粗提取与鉴定一、实验原理1.提取DNA的原理利用DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA,去除其他成分。如:(1)DNA在酒精溶液中的溶解性:DNA不溶于酒精,但某些蛋白质溶于酒精。(2)DNA在NaCl溶液中的溶解性:DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同,它能溶于2__mol/L的NaCl溶液。2.鉴定DNA的原理在一定温度下,DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。二、方法步骤1.称取约30g洋葱,切碎,然后放入研钵中,倒入10mL研磨液,充分研磨。2.去除滤液中的杂质3.DNA的析出4.DNA的鉴定取两支20mL的试管,各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCl溶液中,再向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后,将试管置于沸水中加热5min。待试管冷却后,比较两支试管中溶液颜色的变化。★沸水浴下DNA与二苯胺试剂反应,溶液呈现蓝色三、操作提示1.以血液为实验材料时,每100mL血液中需要加入3g柠檬酸钠,防止血液凝固。2.加入酒精和用玻璃棒搅拌时,动作要轻缓,以免加剧DNA分子的断裂,导致DNA分子不能形成絮状沉淀。(1)充分研磨的目的是裂解细胞,释放DNA。(2)在研磨液过滤获得的上清液中加入体积分数为95%的酒精溶液的目的是使DNA析出(填“溶解”或“析出”),依据的原理是DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些蛋白质溶于酒精。(3)用玻璃棒搅拌时沿一个方向搅拌的目的是防止DNA断裂。例1下表关于“DNA粗提取与鉴定”实验的表述,错误的是()选项试剂操作作用A研磨液与生物材料混合提取溶解DNAB2(mol·L-1)NaCl溶液与提取出的DNA混合溶解DNAC预冷的酒精加入离心后的上清液中溶解DNAD二苯胺试剂加入溶解有DNA的NaCl溶液中鉴定DNA答案C解析DNA不溶于酒精,但是细胞中的某些蛋白质溶于酒精,利用这一原理可以将蛋白质和DNA进一步分离,C错误。例2下列有关“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述,正确的是()A.新鲜猪血、菜花等动植物材料均可用于DNA的粗提取B.植物材料需先研磨破碎细胞C.DNA只能溶于2mol/L的NaCl溶液D.溶有DNA的NaCl溶液中加入二苯胺试剂后颜色呈紫色答案B解析猪是哺乳动物,其成熟红细胞内没有细胞核,所以猪血不能用于DNA的粗提取,A错误;植物细胞有细胞壁,因此选用植物细胞提取DNA时,需先研磨破碎细胞,B正确;DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,在2mol/L的NaCl溶液中溶解度高,C错误;溶有DNA的NaCl溶液中加入二苯胺试剂,沸水浴加热后冷却,颜色应呈现蓝色,D错误。DNA的粗提取与鉴定实验成功关键点(1)本实验不能用哺乳动物成熟的红细胞作实验材料,原因是哺乳动物成熟的红细胞无细胞核(无DNA),可选用鸡血细胞作材料。(2)二苯胺试剂要现配现用,否则会影响鉴定的效果。(3)提取植物细胞的DNA,在研

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