分子生物学实验操作技巧试题库

分子生物学实验操作技巧试题库姓名_________________________地址_______________________________学号______________________密封线1.请首先在试卷的标封处填写您的姓名，身份证号和地址名称。2.请仔细阅读各种题目，在规定的位置填写您的答案。一、选择题1.以下哪项不属于分子生物学实验操作的基本原则？

a.严格的无菌操作

b.适当的消毒

c.使用非无菌实验用品

d.注意实验安全

2.在DNA提取过程中，通常需要使用以下哪种化学物质？

a.醋酸铵

b.氯化钠

c.乙醇

d.乙醚

3.PCR反应体系中，以下哪项不是必需的？

a.引物

b.DNA模板

c.Taq聚合酶

d.硫酸铵

4.Northernblotting实验中，以下哪项是错误的？

a.使用RNA探针

b.转移RNA至硝酸纤维素膜

c.使用放射性同位素标记

d.使用DNA作为探针

5.以下哪种方法可以用于基因克隆？

a.Southernblotting

b.Northernblotting

c.Southernhybridization

d.DNAligase

6.以下哪项不是PCR扩增的优势？

a.高度特异性

b.高效

c.简便

d.可以进行大量平行实验

7.在Westernblotting实验中，以下哪项不是必要的？

a.蛋白质样品

b.抗体

c.电泳

d.洗涤液

8.以下哪种技术用于测定基因表达水平？

a.DNAmicroarray

b.RTqPCR

c.ELISA

d.Westernblotting

答案及解题思路：

1.答案：c

解题思路：分子生物学实验操作的基本原则包括严格的无菌操作、适当的消毒和注意实验安全，而使用非无菌实验用品是不符合无菌操作原则的。

2.答案：c

解题思路：在DNA提取过程中，乙醇用于沉淀DNA，是常用的化学物质。

3.答案：d

解题思路：PCR反应体系中必需的成分包括引物、DNA模板和Taq聚合酶，而硫酸铵不是必需的。

4.答案：d

解题思路：Northernblotting实验中，使用RNA探针、转移RNA至硝酸纤维素膜和使用放射性同位素标记是正确的，而使用DNA作为探针是错误的。

5.答案：d

解题思路：DNAligase是连接DNA片段的酶，可以用于基因克隆。

6.答案：d

解题思路：PCR扩增的优势包括高度特异性、高效和简便，而可以进行大量平行实验不是PCR扩增的优势。

7.答案：d

解题思路：在Westernblotting实验中，蛋白质样品、抗体和电泳是必要的，而洗涤液不是必要的。

8.答案：a

解题思路：DNAmicroarray是一种用于测定基因表达水平的技术，而RTqPCR、ELISA和Westernblotting也可以用于测定基因表达水平，但DNAmicroarray是最常用的技术之一。二、填空题1.DNA提取过程中，一般使用__________酶来消化细胞核。

答案：蛋白酶K

解题思路：在DNA提取过程中，蛋白酶K用于消化细胞核中的蛋白质，以便释放出DNA。

2.在PCR反应体系中，引物是一对__________。

答案：互补序列

解题思路：PCR反应中的引物是一对与靶标DNA序列互补的短单链DNA分子，它们是PCR扩增的起始点。

3.Northernblotting实验中，将RNA转移到硝酸纤维素膜的过程称为__________。

答案：转膜

解题思路：Northernblotting实验中，将RNA从凝胶转移到固相支持物（如硝酸纤维素膜）的过程称为转膜。

4.基因克隆过程中，DNA连接酶将__________连接起来。

答案：DNA片段

解题思路：在基因克隆过程中，DNA连接酶用于连接DNA片段，形成完整的DNA分子。

5.DNA微阵列（DNAmicroarray）可以用来检测__________。

答案：基因表达

解题思路：DNA微阵列是一种高通量检测技术，用于分析大量基因的表达水平，从而检测基因表达。

6.在Westernblotting实验中，蛋白质样品在__________电泳后，转移至硝酸纤维素膜上。

答案：SDSPAGE

解题思路：Westernblotting实验中，首先使用SDSPAGE（十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳）对蛋白质样品进行分离，然后转移至硝酸纤维素膜上。

7.ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种__________测定方法。

答案：定量测定

解题思路：ELISA是一种常用的定量测定方法，用于检测和分析抗原或抗体。

8.在分子生物学实验中，__________是防止交叉污染的重要措施。

答案：无菌操作

解题思路：在分子生物学实验中，无菌操作是防止细菌、病毒等微生物污染实验样本和设备的重要措施。三、判断题1.DNA提取过程中，细胞破碎是第一步操作。（×）

解题思路：在DNA提取过程中，通常的第一步是使细胞裂解，释放细胞内的DNA，但这一步并不直接称为“细胞破碎”，而是细胞裂解或细胞破碎，因此这一说法不够准确。

2.PCR反应体系中，引物长度越长，扩增效率越高。（×）

解题思路：PCR反应中引物的长度通常在1825个碱基之间最为适宜，过长的引物可能导致扩增效率下降，因为它们可能与模板DNA的非目标序列发生非特异性结合，从而影响扩增反应的特异性。

3.Northernblotting实验中，探针与靶RNA的结合是随机的。（×）

解题思路：在Northernblotting实验中，探针与靶RNA的结合是基于序列互补的，因此结合不是随机的，而是有选择性地与靶RNA结合。

4.基因克隆过程中，质粒是一种载体。（√）

解题思路：在基因克隆过程中，质粒是一种常用的载体，它能够携带外源DNA片段并在宿主细胞中复制。

5.DNA微阵列可以同时检测数千个基因的表达水平。（√）

解题思路：DNA微阵列技术可以通过一次实验同时检测数千甚至数万个基因的表达水平，是一种高通量基因表达分析工具。

6.在Westernblotting实验中，抗体与蛋白质的特异性结合是必要的。（√）

解题思路：Westernblotting实验中，抗体的特异性结合是识别和检测特定蛋白质的关键步骤，保证了实验结果的准确性。

7.ELISA可以用于检测蛋白质浓度。（√）

解题思路：ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种常用的检测蛋白质浓度的方法，通过酶标记的抗体与目标蛋白结合，产生可检测的信号。

8.分子生物学实验中，无菌操作是防止交叉污染的重要措施。（√）

解题思路：无菌操作是分子生物学实验中防止交叉污染和保持实验结果可靠性的基本要求。四、简答题1.简述DNA提取实验的基本步骤。

解题思路：此题要求考生能够详细描述DNA提取实验的步骤，包括样品的处理、溶解、沉淀、洗涤和溶解等环节。

答案：

DNA提取实验的基本步骤包括：

1.样品处理：将含有DNA的细胞或组织破碎，释放DNA。

2.溶解：使用适当的缓冲液溶解DNA。

3.沉淀：通过加入酒精使DNA沉淀。

4.洗涤：洗涤沉淀物以去除杂质。

5.溶解：将沉淀的DNA溶解于适当的缓冲液中。

2.解释PCR反应体系中各组分的作用。

解题思路：此题要求考生理解PCR反应体系中的关键组分及其功能。

答案：

PCR反应体系中的组分及其作用

1.模板DNA：作为PCR扩增的起始模板。

2.引物：与模板DNA的特定序列互补，引导DNA聚合酶的延伸。

3.DNA聚合酶：催化DNA的合成。

4.dNTPs（脱氧核糖核苷酸）：DNA合成的原料。

5.Mg2：作为DNA聚合酶的辅助因子。

6.PCR缓冲液：提供适宜的pH和离子强度。

3.介绍Northernblotting实验的原理和应用。

解题思路：此题要求考生掌握Northernblotting实验的基本原理及其应用领域。

答案：

Northernblotting实验的原理是利用DNA与RNA的杂交特性，通过电泳分离RNA，然后将固定在膜上的RNA与探针进行杂交，检测特定的RNA分子。其应用包括：

1.定量或定性分析特定RNA的表达水平。

2.鉴定未知RNA序列。

3.研究基因表达调控。

4.解释基因克隆的原理和步骤。

解题思路：此题要求考生了解基因克隆的基本原理和操作步骤。

答案：

基因克隆的原理是利用分子生物学技术将目的基因插入载体中，使其在宿主细胞中复制和表达。步骤包括：

1.目的基因的获取。

2.设计并合成引物。

3.PCR扩增目的基因。

4.提取质粒DNA。

5.DNA连接：将目的基因插入载体。

6.转化宿主细胞。

7.选择和鉴定阳性克隆。

5.简述DNA微阵列的基本原理和用途。

解题思路：此题要求考生理解DNA微阵列的工作原理及其应用。

答案：

DNA微阵列的基本原理是将大量探针固定在固体表面，与待测样本中的靶标DNA进行杂交，通过检测杂交信号来分析基因表达水平。其用途包括：

1.大规模基因表达分析。

2.基因功能研究。

3.疾病诊断和预后。

6.介绍Westernblotting实验的原理和应用。

解题思路：此题要求考生掌握Westernblotting实验的基本原理及其应用领域。

答案：

Westernblotting实验的原理是利用抗原抗体反应，将蛋白质样品中的目标蛋白通过电泳分离，然后转移到固相支持物上，与特异性抗体结合，通过检测抗体与抗原的结合来分析蛋白质的表达水平。其应用包括：

1.蛋白质定量和定性分析。

2.研究蛋白质相互作用。

3.疾病诊断。

7.简述ELISA实验的原理和应用。

解题思路：此题要求考生理解ELISA实验的基本原理及其应用。

答案：

ELISA实验的原理是利用抗原抗体反应，通过酶催化底物反应产生颜色变化来定量检测目标分子。其应用包括：

1.检测病原体、抗体和抗原。

2.检测药物浓度。

3.疾病诊断。

8.如何防止分子生物学实验中的交叉污染？

解题思路：此题要求考生了解分子生物学实验中交叉污染的预防措施。

答案：

防止分子生物学实验中的交叉污染的措施包括：

1.使用专用的实验器材和耗材。

2.实验操作前后彻底清洗双手和实验器材。

3.实验室分区，避免交叉操作。

4.使用紫外线消毒。

5.定期检测实验环境中的污染水平。五、论述题1.请论述PCR技术在分子生物学研究中的应用。

PCR技术，即聚合酶链式反应，是分子生物学中的一种关键技术，具有广泛的应用。

用于基因克隆：通过PCR技术可以从复杂的DNA混合物中扩增特定的DNA片段，便于后续的克隆、测序等操作。

基因突变检测：PCR技术可以用来检测基因突变，如单核苷酸多态性（SNP）的检测。

DNA指纹分析：PCR技术可用于DNA指纹分析，用于法医学和亲子鉴定。

病原体检测：PCR技术可用于检测病原体，如HIV、疟疾等。

基因表达分析：PCR技术可用于检测目的基因的表达水平，通过定量PCR可以定量分析基因表达水平的变化。

2.分析DNA微阵列在基因表达调控研究中的优势。

高通量：DNA微阵列可以同时对成千上万的基因进行检测，大大提高了研究效率。

多样性：可用于研究不同生物或同一生物不同发育阶段的基因表达模式。

定性定量：不仅可定性分析基因表达，还可进行定量分析，为后续研究提供更多信息。

检测范围广：可同时检测多种类型的RNA，如mRNA、miRNA等。

3.讨论Westernblotting实验在蛋白质组学中的应用。

蛋白质定量：Westernblotting实验可以检测特定蛋白的表达水平，通过对比不同样本的信号强度，进行蛋白质的定量分析。

蛋白质鉴定：通过对比已知蛋白和待测蛋白的分子量，鉴定待测蛋白。

蛋白质相互作用：通过Westernblotting实验可以检测蛋白之间的相互作用。

筛选候选靶标：在蛋白质组学研究中，可以通过Westernblotting实验筛选出与疾病相关的候选靶标。

4.分析ELISA技术在生物医学研究中的作用。

蛋白质定量：ELISA技术可用于检测和定量特定的蛋白质，如激素、抗体等。

疾病诊断：ELISA技术可用于检测病原体、抗体等，为疾病诊断提供依据。

药物筛选：在药物研发过程中，ELISA技术可用于筛选具有潜在疗效的化合物。

细胞因子检测：ELISA技术可用于检测细胞因子等生物活性物质。

5.探讨分子生物学实验中如何保证实验结果的准确性。

严格控制实验条件：保证实验条件符合实验要求，如温度、pH、离子浓度等。

标准化操作：严格按照实验规程进行操作，减少人为误差。

重复实验：进行重复实验，提高结果的可靠性。

数据分析：使用科学的统计方法分析实验数据，排除偶然因素。

答案及解题思路：

1.答案：PCR技术在分子生物学研究中的应用广泛，包括基因克隆、基因突变检测、DNA指纹分析、病原体检测和基因表达分析等。

解题思路：首先列举PCR技术的应用领域，然后针对每个领域简要说明其具体应用。

2.答案：DNA微阵列在基因表达调控研究中的优势包括高通量、多样性、定性和定量以及检测范围广。

解题思路：针对每个优势，结合实际应用进行简