鼠源单克隆抗体制备技术要求

1鼠源单克隆抗体制备通用技术要求24.1制备流程34.2过程要求4.2.1细胞融合前准备脾细胞悬液准备.1小鼠免疫.1.1应选用检疫合格的纯种“BALB/C”小鼠，在细胞融合前两个月左右选择合适的免疫方案.1.2小鼠免疫方案按抗原性质分为：.2免疫小鼠检测.3脾细胞悬液准备.3.1应使用血清滴度测定检测合格的免疫小鼠进行脾细胞悬液准备。.3.3应在无菌环境下获取免疫小鼠脾脏制备成脾淋巴细胞悬液。骨髓瘤细胞培养.1骨髓瘤细胞准备.2骨髓瘤细胞筛选.2.2经筛选后残留有不符合要求细胞的培4.2.2细胞融合4.2.4杂交瘤细胞筛选4经筛选后残留有不符合要求细胞的培4.2.5单克隆化应在克隆前一天按要求准备已有饲养细胞层的96孔培养板。4.2.6单克隆细胞株筛选腹水收集完后，应观测杂交瘤细胞在腹水中的含量，并留样0.2ml，备腹应将过度生长的杂交瘤细胞培养上清，收集于无菌离心管中所有保存腹水和上清的收集管上应写明项目名称、克隆号、腹水/上清数量、生产日期等。4.2.8单克隆抗体纯化应尽可能选用不引起免疫球蛋白聚合应验证所用的纯化方法能去除可能存在的非目标产物污染，如不需要的免疫球蛋白分应验证所用的纯化方法能有效的去除/灭活病毒。4.2.9纯化抗体鉴定4.2.10纯化抗体入库4.2.11培养皿处理培养皿使用后应统一交予具有相关资质的第三方4.2.12小鼠处理5.1.1操作人员应具备基本的专业知识，并接受55.1.4企业应当配备鼠源单克隆抗体制品相应专业知识的生产及质量管理人员和技术人员。5.2工作要求5.2.1任何进入生产区的人员均应当按照规定更衣。工作服的选材、式样及穿戴方式应当与所从事的5.2.3生产用设备、材料等物品进入洁净室，应在洁净室外除去外包装，并进行除尘处理。5.2.4工作时应按要求做好各项试验参数和工作记录。生产、行政、生活和辅助区的总体布局应合理，不得6.1.2厂房应按生产工艺流程及所要求的空气洁净级别进行合理布局。同一厂房内及相邻厂房6.1.3在设计和建设厂房时，应考虑使用时便于进行清洁6.1.4洁净室的内表面应平整光滑、无裂缝、接口严密、无颗粒物脱落，并能耐受和消毒，墙6.1.5应根据生产要求的洁净度划6.2.4实验动物场所为单独区域，与办公和其它实验场所应分开。且应设置安全出口、出口指6.3.3设备的设计、选型、安装、改造和维护必须符合预定用途，应当尽可能降低产生污染、6.3.4应当建立设备使用、清洁、维护和维修的操作规程，并保存相应的操作6.3.6所有计量器具和设备应定期进行6制7.1.1所有原材料、辅料的采购均应在合格供应商处进行采购；外购品均应由供应商提供7.1.2对于经常使用的培养基、血清等重要原材料，在更换供应商之前，应由企业质量部进行质量评估，并组织相关的使用人员对该供应商的原材料进行试用，合格后方能更换。7.2.1生产人员应严格按照作业指导书的要求进行免疫及检测抗原的7.2.2动物应从具有“实验动物生产许可证”的单位购买。不同品种“系”、不同来源的7.2.6应按操作规程抓取、固定动物7.2.7实验废物应由污物走廊传出，专门放在指定位置统一处理，动物尸体专用塑料袋包小鼠骨髓瘤细胞应为不合成或应建立相应的骨髓瘤细胞库，以保证每次融合的骨髓瘤细胞采用适宜的方法进行融合、筛选动物实验设施应有相关部门颁发的二级以7所用的纯化方法能去除可能存在的非目标产物污染，如不需要的免疫球蛋白分子、宿主DNA腹水抗体的刺激物、内毒素、其它热原质、培养液成分或层析柱应验证所用的纯化方法能有效的去连续产生的各批产品必须符合质检要求，批与批之间具有良好的遵循首免50ug抗原/只用弗式完全佐剂，次免25ug抗原/只用弗式不完全佐剂，时间21天+14天+14距上次免疫时间10天后应采血，按照SOP严格执行，进行相应的检测，并根据WLISA、WB、IHC等检加强后三天，应按照SOP严格执行操作实验，10天左右进行细胞根据每个项目的要求，应包被相应的抗原进行ELISA检测，阳性的细胞培养液上清，送对应的7天～15天左右采集腹水，当天采集如果3天内不液体制剂应为接近无色微带乳光的澄清液体，不应含有异物、浑浊或摇不散8产品如为冻干制品，应测定其残余水分含量，残余水分含量应小于等测其亲和常数，对于免疫原为颗粒性抗原的单抗，测其相测定单抗对靶抗原的特异性，宜采用XX方法