基因工程操作程序(共22张)

基因工程操作程序第一页，共22页。1、基因表达载体包括哪些必需组分？2、将目的基因导入植物、动物、微生物细胞的方法分别有哪些？3、目的基因的检测有哪些方法？第二页，共22页。二、基因表达载体的构建——基因工程的核心目的：组成：1、使目的基因在受体细胞中稳定存在，且可以遗传给下一代，2、使目的基因能够表达和发挥作用。它们各自的作用是什么?目的基因+启动子+终止子+标记基因第三页，共22页。位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质，但启动子本身不被转录启动子：终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录第四页，共22页。鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来标记基因：有时需要确定目的基因表达的产物存在于细胞的什么部位，往往要加上可以标识存在部位的基因（或做成目的基因与标识基因的融合基因），如绿色荧光蛋白基因等。第五页，共22页。寻根问底：将目的基因直接导入受体细胞不是更简便吗？如果这么做，结果会怎样？提示：有人采用总DNA注射法进行遗传转化，即将一个生物中的总DNA提取出来，通过注射或花粉管通道法导入受体植物，没有进行表达载体的构建，这种方法针对性差，完全靠运气，也无法确定什么基因导入了受体植物。此法目前争议颇多，严格来讲不算基因工程。构建目的为了使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能表达和发挥作用。第六页，共22页。三、将目的基因导入受体细胞转化—目的基因进入_________内，并且在受体细胞内维持_____和_____的过程受体细胞稳定表达1.将目的基因导入植物细胞农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法2.将目的基因导入动物细胞显微注射技术3.将目的基因导入微生物细胞Ca2+处理第七页，共22页。1、将目的基因导入植物细胞的方法：农杆菌转化法（1）农杆菌介绍：（2）原理（3）适用范围感染双子叶植物和裸子植物具有趋化性（酚）第八页，共22页。适用于单子叶植物基因枪法第九页，共22页。花粉管通道法适用于被子植物第十页，共22页。2、将目的基因导入动物细胞（1）方法：显微注射法（2）程序：目的基因表达载体提纯取卵（受精卵）显微注射受精卵早期胚胎转移到雌性动物的输卵管或子宫内

新性状动物第十一页，共22页。

用口径为1μm的DNA注射器，将大量的目的基因片段注入到受精卵的核内，然后把经过注射的受精卵移植到另一只雌性动物的子宫内，使受精卵发育为转基因动物。什么叫显微注射技术？第十二页，共22页。3、将目的基因导入微生物细胞（1）原核生物特点：

繁殖快、单细胞、遗传物质少（2）方法：

第十三页，共22页。细菌0℃二价阳离子Ca2+42℃用Ca2+处理细胞感受态细胞表达载体溶于缓冲液中与感受态细胞混合感受态细胞吸收DNA分子第十四页，共22页。微生物细胞Ca2+处理第十五页，共22页。四、目的基因的检测与鉴定检测:是否插入目的基因是否转录是否翻译鉴定:功能活性鉴定抗性鉴定分别提取什么进行检测归纳步骤第十六页，共22页。①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因过程:A.首先取出转基因生物的基因组DNAB.对含目的基因的单链DNA片段作放射性同位素或荧光分子标记，以此做探针C.使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带，表明染色体已插入染色体DNA中方法:DNA分子杂交第十七页，共22页。第十八页，共22页。第十九页，共22页。②检测目的基因是否转录出了mRNA方法:分子杂交过程:用上述探针和转基因生物的mRNA杂交，若出现杂交带，表明目的基因转录出了mRNA.第二十页，共22页。3、将目的基因导入微生物细胞②检测目的基因是否转录出了mRNA将目的基因导入植物细胞抗体？将目的基因编码的蛋白质注射进提示：有人采用总DNA注射法进行遗传转化，即将一个生物中的总DNA提取出来，通过注射或花粉管通道法导入受体植物，没有进行表达载体的构建，这种方法针对性差，完全靠运气，也无法确定什么基因导入了受体植物。1、使目的基因在受体细胞中稳定存在，且可以遗传给下一代，首先取出转基因生物的基因组DNA2、使目的基因能够表达和发挥作用。用上述探针和转基因生物的mRNA杂交，若出现杂抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等交带，表明目的基因转录出了mRNA.寻根问底：将目的基因直接导入受体细胞不是更简便吗？如果这么做，结果会怎样？2、将目的基因导入动物细胞②检测目的基因是否转录出了mRNA①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入寻根问底：将目的基因直接导入受体细胞不是更简便吗