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文档简介

15I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定儿师范高等专科学校、鄂尔多斯市农牧业生态与1马铃薯病毒RT-PCR检测技术规程GB/T34265Sanger法测序技术GB/T40974核酸样本质量评价SN/T2497.21进出口危险化学品安全试验方法第21部分：琼脂糖凝又感染性RNA，是一种和病毒相似，但不具有蛋白质外壳的一类环状闭合的单链R反转录reversetranscrip互补DNAcomplementary聚合酶链式反应Polymerasechainr2模板的特定区域进行体外扩增的技术。反应混合物通常由DNA聚合酶、脱氧核苷三磷酸、引物和缓冲液组成，反应过程主要包括变性、退火和延为复制延伸的起始位点。4.1主要RNA病毒种类黄瓜花叶病毒(Cucumbermos马铃薯奥古巴花叶病毒(Potato马铃薯卷叶病毒(Potatoleafrollvirus,PLRV)。马铃薯帚顶病毒(Potato马铃薯A病毒(PotatovirusA,PVA)。马铃薯M病毒(Potatovirus马铃薯X病毒(PotatovirusX,PVX)。马铃薯Y病毒(PotatovirusY,PVY)。马铃薯纺锤块茎类病毒(Potatospindle注：类病毒虽然不具有病毒所具有的蛋白质外壳，但具有RNA基因组，检测方法与RNA病毒一致。因此，列为本标准采用5点法抽样。种植面积小于2001m²(含2001m²),抽检100株。种植面积在2001m²到20010m²之间(含20010m²),之后每增加2001m²增检20株。置于自封采样袋内。运输。样品在检测点存储时间较短时(一般不超过24h),在4℃存放即可。长期存放样品时，需要将样品用液氮预冷后，保存于-80℃超低温保存箱。3选择市售的用于提取含有多糖多酚材料RNA的试剂盒，按照试剂盒自带的说明书进行操作。核酸质cDNA。反应体系和反应程序按照试剂盒自带的说市售产品通常为预混液或单品，根据所选产品提供的说明书，进行PCR反应混合物配制，并按书指示加入cDNA模板以及病毒检测引物。各种病毒的特异性AMVAMV-FaAMVAMV-RbACCCAAGCGTTCCTATATACACATCTGAGGACATGATGC4两个引物退火温度不一致时，取较低温度；72℃延伸，延伸时间根据所选产品说明书提供的参数进行计算。最后，72℃终延伸5min。7.5琼脂糖凝胶电泳检测用Tris-乙酸缓冲液溶解琼脂糖，制备质量体积比为1%的琼脂糖凝胶。琼脂糖凝胶的制备按照SN/T2497.21执行。时，凝胶置于紫外灯或凝胶成像系统进行观测和拍照，获取的图片用于结果判定。8.1异常结果根据琼脂糖凝胶电泳图，与图中DNA相对分子质量标准品相比，从阴性对照样品

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