细胞转染技术试题及答案

细胞转染技术试题及答案一、单项选择题（每题2分，共30分）1.下列哪种细胞转染方法属于物理方法？A.磷酸钙共沉淀法B.脂质体转染法C.电穿孔法D.病毒介导法答案：C。解析：电穿孔法是利用高压脉冲电场在细胞膜上形成暂时性的小孔，使外源DNA进入细胞，属于物理方法；磷酸钙共沉淀法和脂质体转染法属于化学方法；病毒介导法是生物方法。2.脂质体转染法的优点不包括以下哪项？A.转染效率高B.对细胞毒性小C.可转染多种类型细胞D.不受血清影响答案：D。解析：脂质体转染法转染效率较高，能转染多种类型细胞，对细胞毒性相对较小，但血清会影响脂质体与DNA复合物的形成和细胞摄取，所以通常需要在无血清条件下进行转染。3.以下关于细胞转染的描述，正确的是？A.转染只能将DNA导入细胞B.稳定转染细胞中，外源基因会随机整合到宿主基因组中C.瞬时转染细胞中外源基因不会表达D.原代细胞比细胞系更容易转染答案：B。解析：转染可以将DNA、RNA等核酸分子导入细胞；瞬时转染细胞中外源基因能在短时间内表达；原代细胞通常比细胞系更难转染；稳定转染时，外源基因可随机整合到宿主基因组中。4.病毒介导的细胞转染中，常用于基因治疗研究的病毒载体是？A.腺病毒B.痘苗病毒C.逆转录病毒D.以上都是答案：D。解析：腺病毒、痘苗病毒、逆转录病毒等都可作为病毒载体用于细胞转染，且在基因治疗研究中都有应用。5.磷酸钙共沉淀法转染细胞时，形成的磷酸钙DNA复合物的最佳pH范围是？A.6.56.8B.6.87.2C.7.27.4D.7.47.6答案：C。解析：磷酸钙共沉淀法中，磷酸钙DNA复合物形成的最佳pH范围是7.27.4，在此pH下能形成合适大小和稳定性的复合物，利于细胞摄取。6.电穿孔法转染细胞时，影响转染效率的关键因素不包括？A.电压大小B.脉冲时间C.细胞密度D.培养基成分答案：D。解析：电穿孔法中转染效率受电压大小、脉冲时间、细胞密度等因素影响，而培养基成分对电穿孔过程本身影响较小。7.细胞转染后，检测外源基因是否表达，最常用的分子生物学方法是？A.Southern印迹B.Northern印迹C.Western印迹D.PCR答案：C。解析：Western印迹用于检测蛋白质表达，可直接检测外源基因表达的蛋白质产物，是检测外源基因是否表达最常用的方法；Southern印迹用于检测DNA；Northern印迹检测RNA；PCR用于扩增核酸。8.以下哪种细胞系对脂质体转染法的转染效率通常较高？A.HEK293细胞B.原代神经元细胞C.原代肝细胞D.原代成纤维细胞答案：A。解析：HEK293细胞是常用的易于转染的细胞系，对脂质体转染法的转染效率通常较高；原代神经元细胞、原代肝细胞、原代成纤维细胞等原代细胞转染难度较大。9.为了提高细胞转染效率，在转染前对细胞进行的预处理措施不包括？A.更换新鲜培养基B.对细胞进行饥饿处理C.降低细胞密度D.去除抗生素答案：C。解析：转染前更换新鲜培养基可提供细胞良好的生长环境，去除抗生素可避免其对转染过程的影响，对细胞进行饥饿处理有时可增强细胞对转染复合物的摄取；而降低细胞密度可能会影响细胞的生长状态和转染效率，一般需保持合适的细胞密度。10.病毒介导转染时，病毒载体的滴度是指？A.每毫升病毒溶液中病毒颗粒的数量B.每毫升病毒溶液中感染性病毒颗粒的数量C.每微克病毒DNA中病毒基因的拷贝数D.每毫升病毒溶液中病毒蛋白的含量答案：B。解析：病毒载体的滴度是指每毫升病毒溶液中感染性病毒颗粒的数量，反映了病毒的感染能力。11.下列关于细胞转染的用途，错误的是？A.基因功能研究B.蛋白质表达与纯化C.细胞免疫治疗D.细胞癌变答案：D。解析：细胞转染可用于基因功能研究，通过导入外源基因观察其对细胞功能的影响；也可用于蛋白质表达与纯化，使细胞表达特定蛋白质；还应用于细胞免疫治疗，如导入免疫相关基因来增强细胞免疫功能。而细胞癌变不是细胞转染的正常用途。12.脂质体转染试剂与DNA的最佳比例通常需要通过以下哪种方式确定？A.文献查询B.经验估计C.预实验摸索D.固定比例答案：C。解析：不同的细胞类型、DNA种类和脂质体转染试剂，其最佳比例可能不同，通常需要通过预实验摸索来确定合适的比例。13.转染后的细胞培养过程中，为了筛选稳定转染的细胞，通常使用的方法是？A.荧光显微镜观察B.抗生素筛选C.流式细胞术分选D.密度梯度离心答案：B。解析：在稳定转染中，常通过构建带有抗性基因的载体，转染后用相应的抗生素筛选，能在含抗生素培养基中存活的细胞即为稳定整合外源基因的细胞。荧光显微镜观察主要用于观察转染细胞的荧光标记；流式细胞术分选可根据细胞的荧光或其他特性分选细胞，但不是筛选稳定转染细胞的常用方法；密度梯度离心主要用于细胞或生物大分子的分离。14.下列哪种物质可用于增强磷酸钙共沉淀法的转染效率？A.甘油B.乙醇C.甲醇D.丙酮答案：A。解析：在磷酸钙共沉淀法中，甘油休克处理可增强细胞对磷酸钙DNA复合物的摄取，提高转染效率；乙醇、甲醇、丙酮一般不用于此目的。15.细胞转染实验中，阳性对照的作用是？A.验证实验操作的有效性B.排除实验污染C.确定转染的最佳条件D.检测细胞的活性答案：A。解析：阳性对照使用已知能有效转染的体系，可验证整个实验操作过程是否有效，保证实验方法的可靠性；排除实验污染通常用阴性对照；确定转染最佳条件需要进行一系列条件优化实验；检测细胞活性有专门的细胞活性检测方法。二、多项选择题（每题3分，共30分）1.细胞转染的化学方法包括以下哪些？A.磷酸钙共沉淀法B.脂质体转染法C.DEAE葡聚糖转染法D.电穿孔法答案：ABC。解析：磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法、DEAE葡聚糖转染法都属于化学转染方法，利用化学试剂帮助核酸进入细胞；电穿孔法是物理方法。2.影响细胞转染效率的因素有？A.细胞类型B.核酸质量和浓度C.转染方法D.培养条件答案：ABCD。解析：不同细胞类型的转染难易程度不同；核酸的质量和浓度会影响转染效果；不同转染方法的效率有差异；培养条件如培养基成分、温度、pH等也会影响细胞状态和转染效率。3.病毒介导的细胞转染的优点有？A.转染效率高B.可感染多种类型细胞C.可将外源基因整合到宿主基因组D.安全性高答案：ABC。解析：病毒介导转染效率较高，能感染多种类型细胞，部分病毒载体可将外源基因整合到宿主基因组。但病毒载体存在一定的安全隐患，如可能引发免疫反应、有潜在的致癌风险等，安全性并非其优点。4.以下哪些是细胞转染后可能出现的结果？A.外源基因瞬时表达B.外源基因稳定整合到宿主基因组C.细胞死亡D.细胞表型改变答案：ABCD。解析：细胞转染后可能出现外源基因的瞬时表达，也可能稳定整合到宿主基因组；转染过程可能对细胞造成损伤导致细胞死亡；外源基因的表达可能会引起细胞表型的改变。5.用于检测细胞转染后外源基因表达水平的方法有？A.RTPCRB.实时荧光定量PCRC.免疫荧光D.酶联免疫吸附测定（ELISA）答案：ABCD。解析：RTPCR和实时荧光定量PCR可检测外源基因的mRNA水平；免疫荧光可通过荧光标记抗体检测外源基因表达的蛋白质在细胞内的定位和表达情况；ELISA可定量检测细胞培养上清或细胞裂解液中表达的蛋白质。6.细胞转染实验中，需要注意的事项包括？A.严格无菌操作B.准确控制转染试剂和核酸的用量C.选择合适的细胞培养条件D.对转染后的细胞进行适当的观察和检测答案：ABCD。解析：细胞转染实验需严格无菌操作，防止污染；准确控制转染试剂和核酸用量可保证转染效果；合适的细胞培养条件利于细胞生长和转染；对转染后的细胞进行观察和检测可评估转染效果。7.关于电穿孔法转染细胞，以下说法正确的是？A.可用于原代细胞和悬浮细胞的转染B.能快速将核酸导入细胞C.对细胞的损伤较小D.转染效率与电场强度和脉冲时间有关答案：ABD。解析：电穿孔法可用于原代细胞和悬浮细胞的转染，能快速将核酸导入细胞，转染效率受电场强度和脉冲时间等因素影响。但电穿孔法对细胞有一定的损伤，可能导致部分细胞死亡。8.以下哪些病毒可作为细胞转染的载体？A.腺相关病毒B.慢病毒C.单纯疱疹病毒D.流感病毒答案：ABC。解析：腺相关病毒、慢病毒、单纯疱疹病毒都可经过改造作为细胞转染的病毒载体；流感病毒通常不用于细胞转染载体，因其感染具有较强的宿主特异性和致病性。9.提高细胞转染效率的策略有？A.优化转染条件B.选择合适的转染方法C.对细胞进行预处理D.增加核酸的浓度答案：ABC。解析：优化转染条件如调整电压、时间、比例等，选择合适的转染方法，对细胞进行预处理如更换培养基、去除抗生素等都可提高转染效率。而增加核酸浓度不一定能提高转染效率，过高的核酸浓度可能会对细胞造成毒性，反而降低转染效率。10.细胞转染在生物医学研究中的应用有？A.基因治疗研究B.药物筛选C.疫苗研发D.细胞信号通路研究答案：ABCD。解析：细胞转染在基因治疗研究中可导入治疗性基因；在药物筛选中可通过转染特定基因构建细胞模型来筛选药物；在疫苗研发中可用于表达抗原蛋白；在细胞信号通路研究中可导入相关基因观察信号通路的变化。三、判断题（每题2分，共20分）1.细胞转染只能将外源基因导入真核细胞。（×）解析：细胞转染不仅可以将外源基因导入真核细胞，也可用于原核细胞，如细菌的转化也可看作一种转染形式。2.脂质体转染法对所有细胞类型的转染效率都一样高。（×）解析：不同细胞类型对脂质体转染法的转染效率不同，如HEK293细胞转染效率较高，而原代细胞通常转染效率较低。3.病毒介导的细胞转染不会触发细胞的免疫反应。（×）解析：病毒载体具有抗原性，病毒介导的细胞转染可能会触发细胞的免疫反应，这也是病毒载体应用中需要解决的问题之一。4.磷酸钙共沉淀法转染细胞时，形成的复合物越大，转染效率越高。（×）解析：磷酸钙DNA复合物过大不利于细胞摄取，存在一个合适大小的复合物才能有较高的转染效率。5.转染后的细胞只要存活就一定有外源基因表达。（×）解析：转染后的细胞存活并不意味着外源基因一定表达，可能存在转染失败或外源基因沉默等情况。6.电穿孔法转染细胞时，电压越高，转染效率越高。（×）解析：电压过高会对细胞造成严重损伤，导致细胞死亡增加，转染效率反而降低，需要选择合适的电压。7.稳定转染的细胞系可以长期传代并保持外源基因的表达。（√）解析：稳定转染的细胞中外源基因整合到宿主基因组中，在合适的培养条件下可以长期传代并保持外源基因的表达。8.细胞转染实验中，阴性对照应不添加任何核酸。（√）解析：阴性对照不添加核酸，用于排除实验过程中的污染等因素对结果的影响。9.免疫荧光法只能检测细胞内的蛋白质，不能检测细胞外分泌的蛋白质。（×）解析：免疫荧光法可通过不同的操作方式检测细胞内和细胞外分泌的蛋白质，如对细胞进行固定染色可检测细胞内蛋白，对培养上清中的蛋白质进行包被等处理后也可进行检测。10.细胞转染技术只能用于基因表达研究，不能用于基因编辑。（×）解析：细胞转染技术可用于将基因编辑工具（如CRISPR/Cas9系统）导入细胞，实现基因编辑的目的，并非只能用于基因表达研究。四、简答题（每题10分，共20分）1.简述脂质体转染法的原理和操作步骤。答：原理：脂质体是一种人工合成的磷脂双分子层膜结构，它可以与核酸结合形成脂质体核酸复合物。这种复合物能够与细胞膜相互作用，通过膜融合或内吞作用将核酸导入细胞内。操作步骤：（1）细胞准备：将细胞接种于合适的培养器皿中，培养至适当的细胞密度（一般为50%80%汇合度）。（2）复合物制备：分别将脂质体转染试剂和核酸用无血清培养基稀释，然后将两者混合，轻轻混匀，室温孵育一定时间（通常1530分钟），使脂质体与核酸充分结合形成复合物。（3）转染：将细胞培养上清吸出，用无血清培养基洗涤细胞，然后加入含有脂质体核酸复合物的无血清培养基，置于培养箱中培养一定时间（一般46小时）。（4）更换培养基：转染一定时间后，吸出含有复合物的培养基，更换为含血清的正常培养基继续培养。（5）检测：在转染后的适当时间（根据实验目的而定），检测外源基因的表达情况。2.比较病毒介导法和化学转染法在细胞转染中的优缺点。答：病毒介导法：优点：（1）转染效率高：能够高效地将外源基因导入细胞，尤其是对于一些难以转染的细胞类型，如原代细胞。（2）可感染多种细胞类型：可以感染不同组织来源和分化状态的细胞。（3）可将外源基因整合到宿主基因组：实现外源基因的稳定表达，适合长期研究。缺点：（1）安全性问题：病毒载体可能引发免疫反应，有潜在的致癌风险，需要严格的安全控制措施。（2）制备和操作复杂：病毒载体的制备需要特殊的技术和设备，操作过程要求严格的无菌条件和生物安全