动物源性食品中四环素类药物的快速检测

动物源性食品中四环素类药物的快速检测胶体金免疫层析法国家市场监督管理总局发布13.1.3一水合柠檬酸(C₆H₈O₇·H₂O)。3.1.6乙二胺四乙酸二钠(Na₂EDTA·2H₂O)。3.1.8二水合磷酸二氢钠(NaH₂PO₄·2H₂O)。3.2.3柠檬酸溶液(0.1mol/L):称取21.01g一水合柠檬酸(3.1.3)于500mL烧杯中，加入200mL3.2.5样品提取液：分别量取625mL磷酸氢二钠溶液(0.2mol/L)(3.2.2)和1000mL柠檬酸溶液24.0,再加入60.50g乙二胺四乙酸二钠(3.1.6)充分搅拌至溶解。或使用胶体金免疫层析检测试剂盒配套提取液。3.2.6乳品样本稀释液：分别称取5.80g十二水合磷酸氢二钠(3.1.7),0.60g二水合磷酸二氢钠(3.1.8),8.77g氯化钠(3.1.9)于500mL烧杯中，加入200mL水，充分搅拌至溶解，加入适量盐酸(3.1.5)或氢氧化钠溶液(1mol/L)(3.2.4)将pH调节至7.4,加水定容至1L。或使用胶体金免疫层析检测试剂盒配套稀释液。3.2.7组织样本稀释液：分别称取29.01g十二水合磷酸氢二钠(3.1.7),2.96g二水合磷酸二氢钠(3.1.8),5.84g氯化钠(3.1.9)于500mL烧杯中，加入200mL水，充分搅拌至溶解，加入适量氢氧化钠溶液(1mol/L)(3.2.4)将pH调节至8.0,加水定容至1L。或使用胶体金免疫层析检测试剂盒配套稀释液。3.3标准物质四环素类药物标准物质的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量见表1,纯度≥95%。表1四环素类药物标准物质信息中文名称四环素多西环素3.4标准溶液配制3.4.1四环素类药物标准储备液(100μg/mL):分别准确称取适量四环素类药物标准物质(3.3)于烧杯中溶解后转移至100mL容量瓶中，用乙腈溶液(3.2.1)溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成100μg/mL的四环素类药物标准储备液。此溶液密封后避光-20℃保存，有效期6个月。3.4.2四环素类药物标准工作液A(1μg/mL):分别准确移取四环素类药物标准储备溶液(100μg/素类药物标准工作液A。此溶液密封后避光2℃~8℃保存，有效期7d。3.4.3四环素类药物标准工作液B(0.21μg/mL):分别准确移取四环素类药物标准工作液A(1μg/环素类药物标准工作液B。临用现配。四环素类药物胶体金免疫层析试剂盒：金标微孔(含胶体金标记的特异性抗体)、试纸条及配套试剂。4仪器和设备4.1电子天平：感量为0.01g。34.5孵育器：可控温20℃~25℃。温度15℃~35℃。2℃~8℃条件下避光保存。吸取200μL试样于5mL离心管中，加入800μL乳品样本稀释液(3.2.6),涡旋混匀30s,为待准确称取1g±0.05g试样于10mL离心管中，加入3mL样品提取液(3.2.5),振荡提取2min,育器中20℃~25℃孵育3min,将试纸条下端插入到金标微孔溶液底部，于孵育器中20℃~25℃反吸取150μL上述待测液(6.2.3)于金标微孔中，抽吸至孔底的紫红色颗粒20℃~25℃孵育3min,将试纸条下端插入到金标微孔溶液底部，于孵育器中20℃~25℃反应物标准工作液B(0.21μg/mL)(3.4.3),使试样中四环素类药物含量为10μg/L。按照6.2和6.3步骤与6.4.3.2乳粉：准确称取1g±0.05gA(1μg/mL)(3.4.2),使试样中四环素类药物含量为50μg/kg。按照类药物标准工作液A(1μg/mL)(3.4.2),使试样中四环素类药物含量为100μg/kg。按照6.2和6.3步注：获取同类基质的空白试样，经参比方法验证无四环素类污染或四环素类含量远低于检出限。注：也可使用胶体金读数仪判读，读数仪的具体操作与判读原则参照读数仪的使用说明书。干5无效阴性阳性图1目视判定示意图空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。当检测结果为阳性时，应以参比方法对结果进行确证。9性能指标灵敏度≥99%。特异性≥95%。甲烯土霉素、地美环素交叉反应率分别为200%、10%。甲烯土霉素≤200%,地美环素≤10%,罗利环素、米诺环素≤1%,替加环素、奥玛环素、红霉素、庆大霉素、氯霉素、环丙沙星、磺胺二甲基嘧啶≤0.1%。假阴性率≤1%。假阳性率≤5%。6本方法所述试剂、试剂盒信息、操作步骤及结果判定要求是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不做限定。方法使用者在使用替代试剂、试剂盒或操作步骤前，应对其进行考察，应满足本方法规定的各项性能指标。本方法灭菌乳、巴氏杀菌乳、乳粉参比方法为GB/T22990—2008《牛奶和奶粉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定液相色谱-紫外检测法》,猪肉、牛肉、鸡肉、鱼肉参比方法为GB/T21317—2007《动物源性食品中四环素类兽药残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法