黄芪丹参注射液合用对糖尿病大鼠的心肌病变保护作用的研究

黄芪丹参注射液合用对糖尿病大鼠的心肌病变保护作用的研究黄芪丹参注射液合用对糖尿病大鼠的心肌病变保护作用的研究【摘要】目的：探讨黄芪丹参注射液合用对大鼠心肌病变的保护作用方法：SD大鼠60只,随机分为阴性对照组10只，其余大鼠注射链脲佐菌素STZ造模糖尿病模型，筛选成模动物40只按照空腹血糖值随机分为模型对照组、二甲双胍组、二甲双胍加黄芪丹参注射液低、高剂量组，10只/组。每天给药1次，共6周，二甲双胍组灌胃20mg/mL的盐酸二甲双胍片混悬液10mL/kg体重，黄芪丹参注射液高剂量组腹腔注射3.6mL/kg体重，低剂量组1.8mL/kg体重，模型对照组和阴性对照组灌胃生理盐水。六周后麻醉腹主动脉取血,放血处死后解剖取心脏和肾脏作病理分析结果：模型对照组较阴性对照组GLU、AST、CK、LDH、TC、TG都有着明显的升高（P<0.05），与模型对照组比较，二甲双胍组、低剂量组和高剂量组的GLU均降低（P<0.05），低剂量组和高剂量组的LDH有着明显的降低（P<0.05），并随着剂量的增加，降低越明显。CK和AST都有着不同程度的降低，但未见统计学差异（P>0.05）。二甲双胍组与低剂量组TC和TG均有所降低（P<0.05）。结论：合用黄芪丹参注射液对糖尿病大鼠的心肌病变有着一定的保护作用，LDH水平明显降低，并随着剂量的增加LDH的降低就越明显，CK和AST的水平有所降低但未见统计学差异，需要细化酶的亚型来做进一步的检查和探索【关键词】黄芪注射液；丹参注射液；糖尿病；心脏病

ProtectiveeffectofAstragalusandSalviamiltiorrhizainjectiononmyocardiallesionindiabeticrats[Abstract]Objective:ToexploretheprotectiveeffectofAstragalusandSalviamiltiorrhizainjectiononmyocardiallesioninratsMethods:SixtySDratswererandomlydividedintonegativecontrolgroup(10rats).TherestratswereinjectedwithstreptozotocinSTZtoestablishdiabeticmodel.FortySDratswereselectedandrandomlydividedintomodelcontrolgroup,metformingroup,metforminplusAstragalusandSalviamiltiorrhizainjectionlowandhighdosegroupsaccordingtofastingbloodsugarvalue,10ratsineachgroup.Metforminhydrochloridetabletsuspensionof20mg/mlwasgivenorallyonceadayfor6weeks.ThehighdosegroupofAstragalusandSalviamiltiorrhizainjectionwasgivenintraperitonealinjectionof3.6mL/kgbodyweight,thelowdosegroupwasgiven1.8mL/kgbodyweight,andthemodelcontrolgroupandthenegativecontrolgroupweregivennormalsaline.Aftersixweeksofanesthesia,abdominalaortabloodwastaken,andheartandkidneyweredissectedforpathologicalanalysis.Results:ThecombinationofAstragalusandSalviamiltiorrhizainjectionhasatendencytoprotectmyocardium,butthereisnosignificantdifferencebetweenthehighdosegroupandthelowdosegroupinserumlactatedehydrogenase(LDH),creatinase(CK),aspartateaminotransferase(AST)modelgroup.Conclusion:ThemyocardialprotectiveeffectofAstragalusandSalviamiltiorrhizainjectionondiabeticratsisnotobvious.Furtherexperimentsandstudiesareneeded.[Keywords]Astragalusinjection;Salviamiltiorrhizainjection;Diabetesmellitus;Heartdisease目录引言 引言糖尿病是一组由多病因引起的以慢性高血糖为特征的终身性代谢性疾病。长期血糖增高，大血管、微血管受损并危及心、脑、肾、周围神经、眼睛、足等，据世界卫生组织统计，糖尿病并发症高达100多种，是目前已知并发症最多的一种疾病。糖尿病死亡者有一半以上是心脑血管所致，10%是肾病变所致。因糖尿病截肢的患者是非糖尿病的10～20倍。临床数据显示，糖尿病发病后10年左右，将有30%～40%的患者至少会发生一种并发症，且并发症一旦产生，药物治疗很难逆转，因此强调尽早预防糖尿病并发症。心血管并发症包括心脏和大血管上的微血管病变、心肌病变、心脏自主神经病变，引起糖尿病患者死亡的首要病因。但是，对于糖尿病的并发症的治疗和保护，大多数为肾，神经，血管和眼睛的研究[1-3]，对心肌病变的研究尚欠缺，仅限少数几临床药效观察[4-6]。对于糖尿病所导致的心肌病变尚属空白已有研究表明黄芪和丹参和丹参对于心脏方面的疾病有保护和治疗作用[7-8]，黄芪、黄芪总提物及黄芪有效成分可以通过调节心衰心肌能量代谢过程中的关键酶类、能量代谢相关转运体以及能量产生/储存相关因素,从而纠正心衰时心肌能量底物选择和利用等力能学过程的紊乱,并最终改善心衰心肌的机械收缩力学性能。[9]丹参、丹参提取物、丹参注射液可明显地抑制心肌细胞ICa-L，降低心肌细胞内钙离子浓度，减弱心肌收缩力，发挥其心肌保护作用。[10]糖尿病病人在全球范围内正逐年增加，并且有将近一半的病人死于糖尿病所导致的心血管疾病，而少数的几例临床药效的观察并不能系统性的证明合用黄芪丹参注射液对糖尿病导致的心肌病变有保护作用。因此，需要结合动物实验[11]来初步阐明合用黄芪、丹参注射液对糖尿病心肌病变的保护的机制。1.实验材料与实验动物1.1实验试剂及仪器实验试剂：一水合柠檬酸：批号20151117，有效期至20201117，广东光华科技股份有限公司；柠檬酸钠：批号150528，有效期至20200528，广州市中南化学试剂有限公司；灭菌注射用水：批号M18010602，四川科伦药业股份有限公司；链脲佐菌素：批号Y161101，MPBiomedicals；水合氯醛：批号20161212，有效期至20211211，天津市大茂化学试剂厂；氯化钠注射液：批号A17121902，有效期至201911，贵州天地药业有限责任公司；羧甲基纤维素钠（CMC-Na）：批号20170220，有效期至20220726，天津市福晨化学试剂厂。实验仪器：BS-3000A电子分析天平，感量：0.1g，上海友声衡器有限公司；YP3001N电子分析天平，感量0.1g，上海精密科学仪器有限公司；SQP电子分析天平，感量0.001g，赛多利斯科学仪器（北京）科技有限公司；BS223S电子分析天平，感量0.001g，德国Sartorius；强生稳豪型血糖仪，强生（中国）医疗器材有限公司；KDC-2046低速冷冻离心机，科大创新股份有限公司中佳分公司生产；日立7020全自动生化分析仪，日本株式会社日立高新技术主要试剂配制方法：柠檬酸缓冲液配制方法：称取一水合柠檬酸2.1g，加入适量灭菌注射用水溶解，并定容至100mL，为A液；称取柠檬酸钠2.94g，加入适量灭菌注射用水溶解，并定容至100mL，为B液；用时将A、B液按一定比例混合（1:1~1.2），调节pH=4.2~4.5。造模用STZ的配制：1%链脲佐菌素应用液：称取一定量的STZ，放一干燥有盖的灭菌瓶内，外用锡纸包好，将预冷的柠檬酸缓冲液及装有STZ的瓶子置冰浴，一起带到动物房。因STZ受潮30分钟后即失效，所以需现用现配，用时分多次将STZ溶解在柠檬酸缓冲液中，每次配制30mL，本试验造模共配制了5次，尽量保证溶液在10min内用完。麻醉用10%水合氯醛溶液：称取10.0g水合氯醛，加氯化钠注射液至100mL，混匀，0.2μm滤膜除菌。0.5%CMC-Na溶液配制方法：准确称量5gCMC-Na，磁力搅拌器室温边搅拌边缓慢加入装有约800mL纯净水的烧杯中，搅拌至溶解，2~8℃过夜，第二天量筒中定容至1000mL后混匀，2~8℃保存备用。1.2实验动物及药物实验动物：SPF级雄性SD大鼠，雄性60只，体重范围200~250g，来源：广东省医学实验动物中心；识别方法：采用被毛染色法，使用饱和苦味酸对动物进行编号，在动物体表不同部位的被毛涂染斑点，以示不同号码。以动物皮肤染色和笼具双重编号标记识别；动物福利：本试验涉及的与动物试验相关的内容和程序将遵从实验动物使用和管理的相关法律法规及本机构实验动物伦理委员会的相关规定，保证实验动物的福利；动物饲养在广东省医学实验动物中心SPF级动物房，实验动物使用许可证号：SYXK（粤）2013-0002。动物饲养条件：5只/箱群养。饲养温度与湿度：20～26℃，40～70％，采用12h:12h昼夜间断照明；饲养室条件始终保持稳定，以保证试验结果的可靠性。试验期间动物均按实验要求喂以相应颗粒饲料，所有饲料均由广东省医学实验动物中心提供。动物自由进食饮水。实验药物：黄芪注射液：编号：TC182215；规格：10mL/支；含量：相当于原药材20g/10mL；包装：安瓿瓶；性状：黄色或淡棕黄色澄明液体；批号：180711B2；生产日期：20180711；有效期至：202006；保存条件：遮光、密封；生产单位：神威药业集团有限公司。丹参注射液：编号：TC182216；规格：10mL/支；包装：安瓿瓶；性状：黄棕色至棕红色澄明液体；批号：180723B2；生产日期：20180723；有效期至：202106；保存条件：遮光、密封；生产单位：神威药业集团有限公司。盐酸二甲双胍片：编号：MC15002；规格：0.25g/片，48片/瓶；包装：塑料瓶包装；性状：白色固体薄膜衣片，除去包衣后显白色；批号：180433；生产日期：20180419；有效期至：20220418；保存条件：密封；生产单位：北京京丰制药集团有限公司。2.实验方法2.1糖尿病大鼠造模造模：全部动物隔夜禁食不禁水约16h，一次性腹腔注射1%的STZ溶液5mL/kg体重，剂量为50mg/kg体重。注射STZ后，每天密切观察动物状态。造模3天后禁食约5h后尾静脉断尾取血测空腹血糖，筛选空腹血糖≥11.0mmol/L的动物，再剔除空腹血糖较高的动物，剩余40只分组后开始给药。2.2动物分组及给药方法检疫结束后，随机分为阴性对照组10只，其余大鼠注射链脲佐菌素STZ造模糖尿病模型，筛选成模动物40只按照空腹血糖值随机分为模型对照组、二甲双胍组、二甲双胍加黄芪丹参注射液低、高剂量组，10只/组。表1动物分组及给药方法情况表组别随机分组代码动物数n二甲双胍剂量mg/kg体重黄芪注射液剂量mL/kg体重丹参注射液剂量mL/kg体重灌胃二甲双胍mL/100g体重黄芪注射液腹腔注射mL/kg体重丹参注射液腹腔注射mL/kg体重阴性对照组—10——————模型对照组A10——————二甲双胍组B10200——1——二甲双胍加黄芪丹参注射液低剂量组C102001.81.811.81.8二甲双胍加黄芪丹参注射液高剂量组D102003.63.613.63.6剂量设计及依据：本动物实验的剂量设计结合了临床药效观察[12-13],GlickD等外国学者对糖尿病并发症治疗的研究[14-17]和魏伟主编《药理实验方法学》[18]等效剂量的换算方法，200g大鼠与70kg人相交处为0.018，黄芪注射液和丹参注射液人的给药剂量均为0.285mL/kg体重，70kg体重人每天最大给药量20mL，于是大鼠的等效剂量为20×0.018/0.2=1.8mL/kg体重，此剂量作为本试验黄芪丹参注射液低剂量，高剂量为低剂量的2倍即3.6mL/kg体重，二甲双胍剂量参考相关文献[19]200mg/kg体重。供试品的配置：20mg/mL的盐酸二甲双胍片混悬液配制：取8片（规格0.25g/片），研磨后加入少量0.5%（m:v）羧甲基纤维素钠溶液继续研磨，配制到终体积为100mL，混匀，用前摇匀。黄芪注射液和丹参注射液以药品原液直接注射。2.3血糖和体重检测血糖：造模期结束后筛选成模动物时测定一次空腹血糖，末次给药结束后禁食8h测量血糖体重：每周检测一次体重以确保动物的健康状态2.4血清采集及检测末次给药24h后，各组大鼠麻醉腹主动脉采血，离心分离血清，采用全自动生化分析仪检测血糖（GLU）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸酶(CK)、谷草转氨酶（AST）。2.6统计学处理所有数据采用（）表示，应用SPSS21.0软件进行统计分析；采用单因素方差检验分析血糖（GLU）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸酶(CK)、谷草转氨酶（AST）、检验水平α=0.05。3实验结果3.1血清乳酸脱氢酶(LDH)结果比较与阴性对照组比较，模型组对照组大鼠LDH水平上升，存在统计学差异（P<0.05）；与模型对照组比较，二甲双胍组未见统计学差异（P>0.05）：低剂量组的LDH水平有所下降，存在统计学差异（P<0.05）；高剂量组的LDH水平下降，存在统计学差异（P<0.05）。结果见表23.2肌酸酶(CK)结果比较与阴性对照组比较，模型组对照组大鼠CK水平上升，存在统计学差异（P<0.05）；与模型对照组比较，二甲双胍组未见统计学差异（P>0.05）；低剂量组CK水平有所下降，但未见统计学差异（P>0.05）；高剂量组CK水平下降，未见统计学差异（P>0.05）。结果见表23.3谷草转氨酶（AST）结果比较与阴性对照组比较，模型组对照组大鼠AST水平上升，存在统计学差异（P<0.05）；与模型对照组比较，二甲双胍组未见统计学差异（P>0.05）；低剂量组AST水平有所下降，但未见统计学差异（P>0.05）；高剂量组AST水平下降，未见统计学差异（P>0.05）。结果见表23.4血脂总胆固醇（TC）结果比较与阴性对照组比较，模型组对照组大鼠TC水平上升，存在统计学差异（P<0.05）；与模型对照组比较，二甲双胍TC水平下降，存在统计学差异（P<0.05）；低剂量组TC水平有所下降，存在统计学差异（P<0.05）；高剂量组AST水平下降，未见统计学差异（P>0.05）。结果见表23.5甘油三酯（TG）结果比较与阴性对照组比较，模型组对照组大鼠TG水平上升，存在统计学差异（P<0.05）；与模型对照组比较，二甲双胍TG水平下降，存在统计学差异（P<0.05）；低剂量组TG水平有所下降，存在统计学差异（P<0.05）；高剂量组AST水平下降，未见统计学差异（P>0.05）。结果见表23.6血糖（GLU）结果比较与阴性对照组比较，模型组对照组大鼠GLU水平上升，存在统计学差异（P<0.05）；与模型对照组比较，二甲双胍GLU水平下降，存在统计学差异（P<0.05）；低剂量组GLU水平下降，存在统计学差异（P<0.05）；高剂量组GLU水平下降，存在统计学差异（P<0.05）。结果见表2表2黄芪丹参注射液合用对心肌保护作用的生化指标组别剂量mg/kg体重动物数nASTCKLDHTCTGGLU阴性对照组—10101±17325±133447±2111.42±0.121.74±0.6310.29±1.17模型对照组—9145±56*501±129*686±205*2.24±1.05*4.44±3.21*35.97±9.58*二甲双胍组20010150±84522±304633±2741.64±0.24**1.32±0.71**20.39±6.14**二甲双胍加黄芪丹参注射液低剂量组2001.810118±37453±230441±1711.64±0.21▲1.57±1.39▲23.76±10.49▲二甲双胍加黄芪丹参注射液高剂量组2003.610112±82339±195368±272▲▲1.70±0.331.70±1.0124.38±10.00▲▲注：模型对照组与阴性对照组采用T检验；模型对照组分别与二甲双胍组、低剂量组、高剂量组进行单因素方差分析，组间比较用LSD法；其中TC经对数转换后用单因素方差分析，TG采用非参数检验（*与阴性对照组比较P<0.05，**与模型对照组比较P<0.05，▲与模型对照组比较P<0.05，▲▲与模型对照组比较P<0.05）4讨论4.1心肌酶系指标的结果分析乳酸脱氢酶(LDH)是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一，可催化丙酮酸与L-乳酸之间的还原与氧化反应，也可催化相关的α-酮酸。几乎存在于所有组织中，以心、骨骼肌和肾脏最丰富。采用电泳法可将人组织中的乳酸脱氢酶同工酶分离出5种同工酶区带，根据其电泳迁移率的快慢，依次为LDH-2、LDH-1、LDH-3、LDH-4、LDH-5。[20]乳酸脱氢酶同工酶分布存在明显的特异性，通常用于心肌疾病的诊断。LDH水平升高主要见于心肌梗死、肝炎、恶性肿瘤等疾病，有学者研究，急性心肌炎发作后48小时内开始升高，2-4天达到峰值，8-9天可恢复正常。[21]本次实验中，模型组的糖尿病大鼠的LDH显著升高，且阴性对照组与模型组对比存在统计学差异（P<0.05），则说明大鼠由于糖尿病导致心肌产生了一定的损伤，与模型组对比，二甲双胍组、低剂量组和高剂量组均有所下降，但二甲双胍组未见统计学差异，低剂量组和高剂量组都与模型对照组存在统计学差异（P<0.05），即合用黄芪丹参注射液可以显著改善LDH的水平，在一定程度上保护心肌细胞。肌酸酶(CK)通常存在于动物的心脏、肌肉以及脑等组织的细胞浆和线粒体中，是一个与细胞内能量转运、肌肉收缩、ATP再生有关的重要激酶。它可逆的催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应。[22]肌酸酶的同工酶在临床诊断中有十分重要的意义，特别是在心肌梗塞等心肌病变方面的诊断。有研究表明，当心肌发生病变时，特别是心肌梗塞肌酸酶的水平会迅速提高，[23]目前认为在心肌梗塞的诊断中测定肌酸酶的活性比做心电图更为可靠。在本实验中，模型组的糖尿病大鼠的CK水平明显升高，且阴性对照组与模型组对比存在统计学差异（P<0.05），则说明大鼠由于糖尿病导致心肌产生了一定的损伤。与模型组对比，二甲双胍组CK水平上升但未见统计学差异（P>0.05），低剂量组和高剂量组的CK水平有所下降，但同样未见统计学差异（P>0.05）。即合用黄芪丹参注射液对心肌病变有着一定的保护作用，但不明显。其原因可能是肌酸酶（CK）有着四种亚型，分别为肌肉型（MM）、脑型（BB）、杂化型（MB）、和线粒体型（MiMi）。其中MB型主要存在于心肌细胞中，需要更加精确的测定方法和测定仪器来精确的测出四种亚型的数值，以做更进一步的分析。[24]谷草转氨酶（AST）主要分布在心肌，其次是肝脏、骨骼等，正常时AST的值一般较低，当心肌细胞受损或相关的细胞受损时，血清浓度会上升，临床上一般做为心肌梗死或者心肌炎的辅助检查。[25]本实验中，模型组大鼠的AST水平明显升高，且阴性对照组与模型组对比存在统计学差异（P<0.05）。与模型对比甲双胍组AST水平上升但未见统计学差异（P>0.05），低剂量组和高剂量组的AST水平有所下降，但同样未见统计学差异（P>0.05）。即合用黄芪丹参注射液对心肌病变有着一定的保护作用，但不明显。其原因可能为肝脏细胞受损，肝脏出现病变也会导致AST急剧上升，需要结合病理解剖进一步的探索结果。4.2注射液和丹参注射液的制作工艺和糖尿病血糖关系本次试验所用的黄芪注射液和丹参注射液采用的溶剂为葡糖糖注射液，根据文献记载，黄芪注射液在生理盐水为溶剂的条件下注射液不稳定，容易析出颗粒物，从而不能达到药典规定的要求，丹参注射液在非糖溶剂下也易析出颗粒物，同样不能达到药典的标准。[26-27]如果注射液不稳定而析出了颗粒物则会对人或者动物产生巨大的危害，因此，在实验过程中注射液未做任何稀释处理以避免颗粒物的析出。[28]本次的实验对象为糖尿病大鼠，而两种注射液的主要溶剂为葡糖糖注射液，如果不作处理直接注射，那么动物的血糖过高容易导致动物的死亡，查阅文献后，临床上使用黄芪注射液或者丹参注射液辅助治疗糖尿病是通过使用一定量的胰岛素来控制血糖的，[29-30]因此，本次的实验中改用了二甲双胍来控制动物的血糖。结论糖尿病病人在全球范围内正逐年增加，而且糖尿病的病发年龄逐渐低龄化。这就意味着全球范围内糖尿病的患病时间在逐渐增长，因此出现并发症的概率也会上升。所以研究防治糖尿病所导致的并发症是很有必要的，而在这些并发症中心血管的并发症是死亡率最高的。本试验合用黄芪注射液和丹参注射液探究对糖尿病大鼠的心肌保护作用，从心肌酶系血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸酶(CK)、谷草转氨酶（AST）的结果来看，合用黄芪丹参注射液可以有效的调节乳酸脱氢酶(LDH)的水平，且随着剂量的升高LDH的值越低，对心肌的保护越好，对急性心肌炎类的心肌病变有着有效的保护作用，具有重要的临床意义。合用黄芪丹参注射液可以降低肌酸酶(CK)和谷草转氨酶（AST）的水平，而且随着剂量的增加作用越明显，一定程度上改善了心肌病变程度，但仍然需要进一步的研究。综上所述，合用黄芪丹参注射液有着改善糖尿病大鼠的心肌病变的趋势，有一定的保护作用，为糖尿病所致的心脏病的非临床实验提供参考数据。但在对糖尿病患者使用黄芪丹参注射液这种中药注射液的过程中，精确的剂量、稀释所用的溶剂、安全性、联合用药以及控制血糖等方面的指标还需要进一步的实验进行详细研究，值得进一步探讨。参考文献：[l]王鑫,李志红,尹飞等.糖尿病患者C肽与动脉粥样硬化关系的研究进展.医学综述,2018(17):3452-3456[2]马饶,周显礼.糖尿病周围神经病变诊断方法的研究进展.医学综述,2018(17):3462-3466[3]张炜悦,马捷,张蔚等.糖尿病眼病的预防与中医药治疗研究进展[J].转化医学杂志,2018,7(04):247-249[4]于一江,周冬梅,李伟.桃红四物汤联合曲美他嗪治疗2型糖尿病心肌病变阴虚血瘀证30例临床研究[J].江苏中医药,2015,47(09):32-34.[5]王旭.清化瘀热方干预糖尿病心肌病变的临床疗效观察[A].中华中医药学会糖尿病分会.第十四次全国中医糖尿病大会论文集[C].中华中医药学会糖尿病分会:,2012:5.[6]陈艳芬.黄芪散对糖尿病心肌病变的干预作用及其机制研究[D].广州中医药大学,2009.[7]郭雪红.黄芪注射液的药理作用及临床应用研究进展[J].中国药房,2015,26(21):3018-3021.[8]杨志霞,林谦,马利.丹参对心血管疾病药理作用的文献研究[J].世界中西医结合杂志,2012,7(02):93-96+114.[9]王玉敏.黄芪总提物及黄芪有效成分治疗心衰的心肌力能学机制研究[D].中国中医科学院,2012.[10]永刚.丹参注射液对铁超载所致心脏、肝脏损伤的保护作用及钙通道抑制作用的研究[D].河北医科大学,2014.[11]成龙,申竹芳,孙桂波等.糖尿病动物模型研究进展及在中药研究中的应用[J].药学学报,2015,50(08):951-958.[12]王岸文.丹参注射液联合前列地尔治疗早期糖尿病肾病对患者血脂及肾功能水平的影响[J].中外医学研究,2018,16(21):111-112.[13]杨尚磊,叶章正.丹参注射液联合酒石酸美托洛尔治疗老年冠状动脉粥样硬化性心脏病的临床效果观察[J].临床合理用药杂志,2018,11(17):23-24.[14]GlickD，DefilippiCR，ChristensonR，etal．Long-termtrajec-toryoftwouniquecardiacbiomarkersandsubsequentleftventricularstructuralpathologyandriskofincidentheartfailureincommuniy-dwellingolderadultsatlowbaselinerisk[J]．JACC：HeartFai1，2013，1：353-360．[15]FedakPW，VermaS，WeiselRD，eta1．Cardiacremodelingandfailure：frommoleculestoman（partI）[J]．CardiovascPathol，2005，14(1)：1-11．[16]TakanoH，HasegawaH，NagaiT，eta1．Implicationofcardiacremodelinginheartfailure：mechanismsandtherapeuticstrategies[J]．IntemMed，2003，42(6)：465-469．[17]AydemirM，OzturkN，DoganS，etal．Sodiumtungstateadministrationameliorateddiabetes-inducedelectricalandcontractileremodelingofratheartwithoutnormalizationofhyperglycemia[J]．BiolTraceElemRes，2012，148(2):216-223．[18]魏伟.药理实验方法学[M]．4