2025年核酸员理论考试题及答案

2025年核酸员理论考试题及答案一、单项选择题（共20题，每题2分，共40分）1.关于新型冠状病毒核酸检测咽拭子采样操作，以下正确的是（）A.采样时棉签头轻触双侧扁桃体及咽后壁B.采样前受检者需用生理盐水漱口3次C.采样深度需达到舌根部1cm以内D.采样后棉签需在试管内旋转挤压5次以上答案：A解析：咽拭子采样应轻柔擦拭双侧腭弓、扁桃体及咽后壁（《新型冠状病毒肺炎核酸检测技术指南》2023版）；采样前30分钟避免漱口、进食；采样深度需超过咽腭弓；采样后需将棉签头在保存液中旋转挤压至少3次，无需5次以上。2.核酸检测实验室使用的病毒保存液（灭活型）最佳保存温度为（）A.-20℃B.2-8℃C.15-25℃D.37℃答案：B解析：灭活型病毒保存液主要成分为胍盐，需在2-8℃条件下避光保存，避免高温导致成分分解（《新型冠状病毒实验室生物安全指南》2024版）。3.以下哪种情况不属于核酸检测样本拒收范围（）A.采样管标签与申请单信息不一致B.样本保存液渗漏但总量未减少C.样本采集时间超过8小时未冷藏D.采样管内无保存液答案：B解析：样本保存液轻微渗漏但未污染其他样本且总量足够时，可登记后接收；标签信息不符、超时未冷藏（超过6小时未2-8℃保存）、无保存液均需拒收（《医疗机构新冠病毒核酸检测工作手册》2025年修订版）。4.实时荧光定量PCR仪的关键性能指标不包括（）A.温度均匀性B.光学系统灵敏度C.样本通量D.打印机分辨率答案：D解析：PCR仪核心指标为温度控制精度（均匀性）、光学检测灵敏度（影响Ct值准确性）、样本通量（单次检测数量）；打印机分辨率不影响检测结果准确性。5.核酸提取过程中，离心步骤的主要目的是（）A.促进磁珠与核酸结合B.分离上清与沉淀C.提高试剂混合效率D.灭活残留病毒答案：B解析：离心可通过重力作用将磁珠-核酸复合物沉淀，与上清（含杂质）分离，是纯化核酸的关键步骤（《核酸提取技术操作规范》2024版）。6.核酸检测实验室污染防控中，以下操作错误的是（）A.扩增区使用专用移液器，禁止交叉使用B.各区域工作服颜色区分，不得跨区穿着C.每日实验结束后用75%乙醇擦拭台面D.样本处理区紫外线消毒时间≥30分钟答案：C解析：扩增区（PCR产物区）需使用0.5%过氧乙酸或10%次氯酸钠消毒，75%乙醇对核酸污染无清除作用；其他选项符合《病原微生物实验室生物安全管理条例》要求。7.混采检测（10:1）时，若某管结果为阳性，后续处理正确的是（）A.直接上报该管10人阳性B.对该管10人重新采样，单采单检C.仅对该管中1人进行复核D.无需复核，直接通知隔离答案：B解析：混采阳性需对原混采管内所有受检者重新单采单检，排除假阳性（《新冠病毒核酸混采检测技术规范》2025版）。8.核酸检测结果判读时，“Ct值38”的正确处理是（）A.判定为阳性B.判定为阴性C.需重新采样检测D.报告“检测结果不确定”答案：C解析：根据《新型冠状病毒核酸检测结果判读专家共识》，Ct值＞35时需结合流行病学史重新采样检测，避免假阳性或样本降解导致的误判。9.生物安全柜使用时，正确的操作是（）A.手臂快速进出安全柜开口B.柜内物品摆放不超过背板高度C.操作结束后立即关闭风机D.紫外线消毒时保持安全柜开启答案：B解析：生物安全柜内物品应避免遮挡背板气孔（影响气流）；手臂需缓慢进出以维持气流稳定；操作结束后需运行风机10分钟以上清除残留气溶胶；紫外线消毒时需关闭安全柜玻璃门。10.核酸检测试剂的批间差异验证应至少选择（）A.2个不同批号试剂B.3个不同批号试剂C.4个不同批号试剂D.5个不同批号试剂答案：B解析：《体外诊断试剂性能评估指导原则》要求，批间差异验证需至少3个批号试剂，每个批号检测20份阳性样本和20份阴性样本，以确认一致性。11.采样人员防护装备穿戴顺序正确的是（）A.口罩→帽子→防护服→手套→靴套B.帽子→口罩→防护服→靴套→手套C.防护服→帽子→口罩→手套→靴套D.口罩→防护服→帽子→靴套→手套答案：B解析：正确顺序为：戴工作帽→医用防护口罩（做密合性测试）→穿防护服→戴靴套→戴手套（《新冠病毒采样人员防护技术指南》）。12.样本运输箱的温度监控要求是（）A.每2小时记录一次温度B.运输全程实时监控并记录C.到达实验室后记录起始和终点温度D.无需记录，仅需确保冰袋未完全融化答案：B解析：根据《病原微生物样本运输管理规定》，样本运输需使用具备实时温度监控功能的设备，全程记录温度（2-8℃），偏差超过±2℃需备注原因。13.核酸提取仪日常维护不包括（）A.清洁磁棒套B.校准加样针液面感应C.更换PCR反应管D.检查废液桶密封性答案：C解析：PCR反应管为一次性耗材，不属于仪器维护内容；磁棒套残留核酸需定期清洁，加样针校准确保加样量准确，废液桶密封防止泄漏均为维护重点。14.以下哪种情况会导致核酸检测假阴性（）A.采样时棉签触碰受检者口唇B.提取时磁珠用量过多C.扩增程序中退火温度过低D.样本保存液过量稀释答案：A解析：采样时棉签触碰口唇（污染唾液）可能导致病毒载量不足，出现假阴性；磁珠过量会增加核酸结合效率（减少假阴性），退火温度过低可能导致非特异性扩增（假阳性），保存液过量稀释会降低病毒浓度（假阴性，但题干问“哪种情况”，A更直接）。15.实验室废弃物分类中，使用后的病毒保存液属于（）A.感染性废物B.化学性废物C.病理性废物D.药物性废物答案：A解析：病毒保存液可能含有病原体，属于感染性废物（《医疗废物分类目录》2021版）。16.实时荧光PCR反应体系中，Taq酶的主要作用是（）A.解开DNA双链B.标记荧光基团C.催化dNTP聚合D.结合引物答案：C解析：Taq酶是热稳定DNA聚合酶，可在引物引导下催化dNTP聚合形成新的DNA链（《分子克隆实验指南》第4版）。17.核酸检测室内质控样本的选择要求是（）A.使用弱阳性样本B.使用强阳性样本C.使用阴性样本D.同时包含阴、阳性样本答案：D解析：室内质控需同时设置阴性（排除污染）和阳性（验证检测能力）对照，缺一不可（《临床基因扩增检验实验室质量控制要求》）。18.采样管标签信息必须包含（）A.受检者联系电话B.采样人员工号C.受检者姓名+采样时间D.实验室接收编号答案：C解析：标签需至少包含受检者姓名（或唯一标识）、采样时间、样本类型，确保可追溯（《核酸检测样本管理规范》2025版）。19.核酸检测实验室分区中，“产物分析区”的主要功能是（）A.样本接收与处理B.核酸提取C.PCR扩增D.结果判读与报告答案：C解析：PCR实验室四区为：样本处理区（采样、灭活）、提取区（核酸纯化）、扩增区（PCR反应体系配制）、产物分析区（扩增反应进行及结果读取）。20.关于核酸检测结果报告，以下正确的是（）A.结果仅需报告“阳性”或“阴性”B.Ct值需同时报告C.阴性结果需备注“未检测到病毒”D.阳性结果可直接通过短信发送答案：B解析：根据《医疗机构临床检验项目目录》，核酸检测需报告Ct值（反映病毒载量），阴性结果应注明“未检测到新型冠状病毒核酸”，阳性结果需电话通知并书面报告。二、多项选择题（共10题，每题3分，共30分）1.核酸采样前需对受检者进行的评估包括（）A.7天内是否接种新冠疫苗B.最近2小时是否进食C.有无鼻腔手术史（鼻拭子采样时）D.当日体温是否≥37.3℃答案：ABCD解析：接种疫苗后48小时内采样可能干扰结果；进食后2小时内采样可能引发呕吐；鼻腔手术史需调整鼻拭子采样深度；发热者需优先登记并报告。2.核酸检测实验室生物安全防护装备包括（）A.N95口罩B.护目镜/面屏C.双层乳胶手套D.防水围裙答案：ABCD解析：采样及样本处理时需佩戴N95口罩（或医用防护口罩）、护目镜/面屏（防喷溅）、双层手套（防渗透）、防水围裙（防液体污染）。3.导致核酸提取失败的常见原因有（）A.样本保存时间过长（＞48小时）B.磁珠与样本孵育时间不足C.洗涤液残留过多D.离心转速过高答案：ABC解析：样本保存超过48小时可能导致核酸降解；磁珠孵育不足（＜10分钟）影响结合效率；洗涤液残留（含抑制物）会干扰后续扩增；离心转速过高（＞12000rpm）可能破坏磁珠结构，但通常提取仪设定转速在合理范围。4.核酸检测质量控制的关键环节包括（）A.采样人员资质B.试剂批间一致性C.仪器定期校准D.样本运输温度答案：ABCD解析：质量控制涵盖全流程：人员资质（确保操作规范）、试剂性能（批间差异）、仪器状态（温度/光学准确性）、运输条件（保证样本质量）。5.医疗废物处理流程包括（）A.分类收集（感染性/损伤性）B.双层黄色垃圾袋封装C.标签注明“新冠医疗废物”D.24小时内由有资质单位转运答案：ABCD解析：需按《医疗废物管理条例》执行：分类收集（损伤性废物需利器盒）、双层包装（鹅颈结封口）、标签标注内容（名称、时间、数量）、转运时限不超过48小时（紧急情况下24小时）。6.核酸检测假阳性的可能原因有（）A.扩增产物污染实验室B.试剂中存在外源性核酸C.样本间交叉污染（采样时）D.Ct值判读阈值设置过低答案：ABCD解析：扩增区气溶胶污染（产物污染）、试剂生产过程中污染（如阳性对照残留）、采样时棉签触碰其他样本、阈值设置过低（如将38判为阳性）均可能导致假阳性。7.PCR实验室空气流向要求正确的是（）A.样本处理区→提取区→扩增区→产物分析区B.产物分析区→扩增区→提取区→样本处理区C.保持负压梯度（产物分析区最负压）D.各区域空气不循环，直接外排答案：ACD解析：PCR实验室需严格单向气流（清洁区→污染区），即样本处理区（相对正压）→提取区→扩增区→产物分析区（相对负压）；各区域空气独立排放，避免交叉污染。8.核酸检测结果审核的内容包括（）A.样本信息与检测记录一致B.质控品结果符合预期C.仪器运行状态正常D.报告格式符合规范答案：ABCD解析：审核需确认样本可追溯（信息一致）、质控有效（阴/阳性对照符合）、仪器无故障（如温度异常提示）、报告内容完整（姓名、时间、结果、Ct值）。9.采样人员出现防护装备破损时，正确的处理是（）A.立即停止采样B.原地更换破损装备C.撤离至缓冲区评估暴露风险D.记录暴露情况并上报答案：ACD解析：防护装备破损（如手套破裂）需立即停止操作，撤离至缓冲区（非污染区）评估暴露风险（如是否接触样本），更换装备后记录事件并上报，禁止在污染区直接更换。10.核酸检测试剂性能验证的指标包括（）A.灵敏度（最低检测限）B.特异性（抗干扰能力）C.精密度（重复性）D.稳定性（保存期）答案：ABCD解析：试剂验证需涵盖：灵敏度（检测最低病毒载量）、特异性（不与其他病毒交叉反应）、精密度（同一样本多次检测Ct值波动）、稳定性（保存期内性能是否下降）。三、判断题（共10题，每题1分，共10分）1.鼻拭子采样时，棉签需沿下鼻道方向缓慢插入至鼻咽部（后鼻孔处），停留1-3秒后旋转取出。（）答案：√解析：鼻拭子需插入深度为受检者鼻翼至耳垂的距离（约4-5cm），到达鼻咽部后旋转采集（《采样技术规范》）。2.病毒保存液（非灭活型）可在室温下运输，无需冷藏。（）答案：×解析：非灭活型保存液需2-8℃运输，室温可能导致病毒活性下降或核酸降解。3.核酸提取过程中，洗涤步骤的目的是去除蛋白质、盐离子等杂质。（）答案：√解析：洗涤液（含乙醇）可溶解蛋白质，盐离子通过离心去除，保留磁珠结合的核酸。4.PCR扩增程序中，变性温度通常设置为72℃。（）答案：×解析：变性温度为94-95℃（破坏DNA双链），延伸温度为72℃（Taq酶最适温度）。5.实验室发生样本泄漏时，应立即用纸巾擦拭并丢弃。（）答案：×解析：泄漏需用10%次氯酸钠覆盖污染区域30分钟，再用吸水材料清除，避免气溶胶扩散。6.混采检测时，1管样本可同时加入10人的咽拭子和鼻拭子。（）答案：×解析：混采需同一类型样本（均为咽拭子或均为鼻拭子），不同类型样本可能影响病毒载量均一性。7.核酸检测结果报告中，“未检出”等同于“阴性”。（）答案：√解析：“未检出”是规范表述，与“阴性”含义一致，均表示未检测到病毒核酸。8.生物安全柜使用时，应在操作开始前提前10分钟开启风机。（）答案：√解析：提前开启风机可净化柜内空气，确保操作时气流稳定。9.核酸检测实验室可使用普通冰箱保存试剂，无需专用冰箱。（）答案：×解析：试剂需专用冰箱保存，避免与其他物品交叉污染（如食品、药品）。10.采样时，受检者可自行取下口罩，采样后立即佩戴。（）答案：√解析：受检者自行摘口罩（避免采样人员接触），采样后立即佩戴，减少暴露时间。四、简答题（共5题，每题6分，共30分）1.简述核酸采样前的准备工作（包括人员、物资、环境三方面）。答案：（1）人员准备：采样人员需经过培训并考核合格，穿戴防护装备（N95口罩、护目镜、防护服、手套、靴套），并进行手卫生；（2）物资准备：检查采样管（保存液量、有效期）、采样棉签（无菌包装）、消毒用品（75%乙醇、含氯消毒液）、信息登记设备（扫码枪、登记表）、医疗废物收集袋（黄色垃圾袋、利器盒）；（3）环境准备：选择通风良好、相对封闭的场所，划分等候区（间隔1米）、采样区（1个采样台对应10-20人/小时）、缓冲区（更换防护装备），地面铺设一次性防污染垫，设置“一米线”标识。2.简述PCR实验室四区的功能及压差要求。答案：PCR实验室分为四个独立区域：（1）样本处理区：完成样本接收、灭活（56℃30分钟）、分装，需保持相对正压（+10Pa）；（2）核酸提取区：进行核酸纯化（磁珠法/柱提法），压差为0Pa（与样本处理区过渡）；（3）扩增区：配制PCR反应体系（引物、探针、酶、模板），需相对负压（-10Pa）；（4）产物分析区：运行PCR扩增并读取结果，为最负压区域（-20Pa）；压差要求：样本处理区＞提取区＞扩增区＞产物分析区，形成单向气流，防止污染扩散。3.简述医疗废物处理的具体流程（针对新冠核酸检测产生的废物）。答案：（1）分类收集：感染性废物（采样棉签、保存液、防护服）放入双层黄色垃圾袋；损伤性废物（移液器吸头、破碎玻璃）放入防刺穿利器盒；（2）封装标识：垃圾袋采用鹅颈结封口，标注“新冠医疗废物”“产生时间”“重量”；利器盒装满3/4时密封；（3）暂存转运：暂存于专用医疗废物暂存柜（2-8℃，防渗漏），24小时内由具有《危险废物经营许可证》的单位转运；（4）记录追溯：填写《医疗废物交接登记本》，记录数量、种类、转运时间、接收人签字，保存至少3年。4.列举5种可能导致核酸检测假阳性的原因，并说明对应的防控措施。答案：（1）扩增产物污染：实验室分区不严格（如扩增区物品带入提取区），防控措施为严格分区、各区域专用物品、每日紫外线消毒；（2）试剂污染：试剂生产过程中混入阳性对照核酸，防控措施为使用前做空白对照（无模板反应）；（3）样本交叉污染：采样时棉签触碰其他样本，防控措施为一人一棉签、采样时保持1米间距；（4）操作失误：加样时移液器吸头污染，防控措施为使用带滤芯吸头、每加一个样本更换吸头；（5）阈值设置过低：将Ct值＞35的样本判为阳性，防控措施为根据试剂说明书设定合理阈值（通常Ct≤35为阳性）。5.简述核酸检测过程中出现“扩增曲线异常（无指数增长期）”的可能原因及处理方法。答案：可能原因：（1）核酸提取失败（磁珠失效、孵育时间不足）；（2）PCR反应体系配制错误（漏加Taq酶、引物浓度过低）；（3）仪器故障（光学模块损坏、温度控制异常）；（4）样本中存在扩增抑制物（如血红蛋白、胍盐残留）。处理方法：（1）重新提取核酸（使用阳性对照验证提取效率）；（2）检查反应体系配制记录，重新配制并测试；（3）校准PCR仪（温度均匀性、光学灵敏度）；（4）对样本进行稀释（降低抑制物浓度）后重新检测。五、案例分析题（共5题，每题6分，共30分）1.某实验室接收一批混采样本（10:1），运输时间为8小时（环境温度30℃），到达时冰袋已完全融化。（1）该批样本是否可接收？说明理由。（2）若接收后检测结果为阳性，可能存在什么风险？答案：（1）不可接收。根据《样本运输规范》，混采样本需在6小时内2-8℃运输，超过6小时且未冷藏（冰袋融化后温度＞8℃）可能导致病毒核酸降解，影响检测结果准确性。（2）若接收后检测为阳性，可能因样本降解出现假阴性（病毒载量降低），或因温度过高导致核酸片段化，无法准确判断感染状态，增加漏诊风险。2.某检测员在提取区操作时，不慎将磁珠管打翻，液体溅到防护手套上。（1）请描述正确的应急处理流程。（2）如何预防此类事件再次发生？答案：（1）应急处理：①立即停止操作，撤离至缓冲区；②用0.5%过氧乙酸喷洒污染区域（提取区台面），覆盖30分钟；③摘除污染手套（外层），用75%乙醇消毒双手；④更换新手套，检查是否有皮肤暴露（如有，用碘伏消毒并上报）；⑤记录事件经过及处理措施。（2）预防措施：①使用防溅磁珠管（带锁扣）；②操作前固定试剂管（使用试管架）；③加强培训（液体处理规范）；④在生物安全柜内进行磁珠操作（减少溅出风险