多发性硬化患者血清IL-33及IL-35水平变化与临床意义的深度剖析

多发性硬化患者血清IL-33及IL-35水平变化与临床意义的深度剖析一、引言1.1研究背景多发性硬化（MultipleSclerosis，MS）是一种以中枢神经系统白质炎性脱髓鞘病变为主要特点的自身免疫性疾病，其主要的病理改变为时间及空间多发性的脱髓鞘和轴索损害，影像学常表现为新鲜及陈旧并存的多部位硬化病灶，即硬化斑。据统计，全球约有250万人受其影响，且发病率呈上升趋势。我国虽属于低发区，但近年来病例数也在逐渐增加。MS好发于青壮年，发病高峰年龄在20-40岁之间，女性多于男性，比例约为2:1。MS的病因和发病机制至今尚未完全明确，目前认为，它是在遗传易感个体的基础上，由环境因素触发，导致免疫系统功能紊乱，错误地攻击中枢神经系统的髓鞘，引发炎症和脱髓鞘病变。其中，自身免疫反应在MS的发病过程中起着关键作用。当免疫系统失衡时，T淋巴细胞、B淋巴细胞等免疫细胞被异常激活，它们通过受损的血脑屏障进入脑组织，针对髓鞘碱性蛋白产生自身免疫反应。T细胞分泌大量炎性细胞因子和趋化因子，招募炎症细胞，引发炎性破坏；B细胞产生针对髓鞘碱性蛋白的自身抗体，通过抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用引起髓鞘损害和轴索损伤。髓鞘损伤和髓鞘脱失会中断正常的神经信号传导，进而导致患者出现各种神经功能障碍症状，严重影响患者的生活质量，且随着病情的进展，多数患者会逐渐走向残疾。细胞因子（cytokine，CK）作为免疫细胞分泌的一类小分子蛋白质，在免疫系统中发挥着广泛而重要的调节作用，它们在启动、维持和调节组织特异性自身免疫损伤等方面扮演着关键角色。在MS的发病机制中，细胞因子网络的失衡被认为是导致免疫紊乱和炎症反应的重要因素之一。促炎性细胞因子和抑炎性细胞因子之间的平衡失调，会影响辅助性T细胞1（Th1）/辅助性T细胞2（Th2）型细胞之间的平衡，进而影响自身免疫性疾病的发展和临床转归。例如，Th1型细胞分泌的γ干扰素等促炎性细胞因子可促进炎症反应，加重组织损伤；而Th2型细胞分泌的白细胞介素-4（IL-4）等抑炎性细胞因子则具有抗炎和免疫调节作用，有助于减轻炎症损伤。因此，深入研究细胞因子在MS发病机制中的作用，对于揭示MS的发病机制、寻找有效的治疗靶点具有重要意义。白细胞介素-33（Interleukin-33，IL-33）是近年来新发现的IL-1超细胞因子超家族中的成员之一。IL-33具有多种免疫效应，主要参与Th2细胞介导的免疫应答，可促进炎症反应的发生，调节肥大细胞的功能，并在调节Th1/Th2免疫应答之间的平衡中发挥关键作用。最近有研究报道，IL-33与实验性自身免疫性脑脊髓炎（ExperimentalAutoimmuneEncephalomyelitis，EAE）的发生相关，EAE是MS的经典动物模型，这提示IL-33作为促炎性细胞因子，可能在中枢神经系统脱髓鞘性疾病，如MS的病理生理学改变和功能中发挥主要作用。例如，在EAE模型中，IL-33的表达上调，可促进Th2细胞的活化和增殖，释放更多的促炎性细胞因子，加重炎症反应和神经损伤。然而，IL-33在MS患者体内的具体作用机制和表达变化情况，仍有待进一步深入研究。白细胞介素-35（Interleukin-35，IL-35）是最新发现的IL-12超家族成员之一。IL-35能够通过促进调节性T细胞（RegulatoryTcells，Tregs）的增殖、增强Tregs的免疫抑制作用、抑制Th17细胞的分化及促炎性细胞因子IL-17等的产生，从而发挥免疫抑制的作用。在研究EAE动物模型中发现，由于2D2TCR和C57BL6转基因的小鼠缺乏EBl3基因（IL-35的组成部分），从而加重了髓鞘少突胶质细胞糖蛋白肽段免疫所致的EAE的临床症状，尽管这种加重可能只是轻微的，但这也提示IL-35作为抑炎性细胞因子，在中枢神经系统脱髓鞘性疾病，如MS的病理生理学改变和功能中可能发挥重要作用。例如，在EAE模型中，给予外源性IL-35可抑制Th17细胞的分化，减少IL-17等促炎性细胞因子的产生，从而减轻炎症反应和神经损伤。然而，IL-35在MS患者体内的表达水平及其与疾病活动度、临床症状之间的关系，目前尚不清楚。鉴于IL-33和IL-35在免疫系统中的重要作用以及在MS相关研究中的潜在意义，本研究旨在通过测定复发-缓解型MS患者血清中IL-33、IL-35的浓度，探讨它们在复发-缓解型MS患者病程中可能发挥的作用，为MS的免疫治疗提供进一步的理论依据和潜在治疗靶点。同时，采用扩展残疾状况评分量表（ExpandedDisabilityStatusScales，EDSS）评价MS患者的神经功能缺损程度，分析IL-33、IL-35水平与神经功能缺损程度之间的相关性，以期为MS的临床诊断、病情评估和治疗效果监测提供新的指标和方法。1.2研究目的本研究旨在通过精准测定复发-缓解型多发性硬化（MS）患者血清中白细胞介素-33（IL-33）、白细胞介素-35（IL-35）的浓度，深入探讨它们在复发-缓解型MS患者病程中所扮演的角色和发挥的作用。一方面，明确IL-33、IL-35水平与MS疾病活动度之间的关联，分析其是否可作为评估疾病进展和复发风险的潜在生物标志物；另一方面，采用扩展残疾状况评分量表（EDSS）科学评价MS患者的神经功能缺损程度，进一步探究IL-33、IL-35水平与神经功能缺损程度之间的相关性，为MS的早期诊断、病情监测以及预后评估提供新的思路和方法。此外，通过本研究，期望能够为MS的免疫治疗提供更坚实的理论依据，挖掘IL-33、IL-35作为潜在治疗靶点的可能性，为开发更有效的免疫治疗策略奠定基础，从而改善MS患者的临床结局，提高其生活质量。1.3研究意义本研究对复发-缓解型多发性硬化（MS）患者血清中白细胞介素-33（IL-33）、白细胞介素-35（IL-35）水平的变化及其临床意义展开深入探究，具有重要的理论与实践意义。从理论层面来看，MS的发病机制极为复杂，至今尚未完全明晰。细胞因子在MS的免疫致病过程中发挥着关键作用，然而，IL-33和IL-35在MS发病机制中的具体作用及二者之间的相互关系，仍存在诸多未知。本研究通过精准测定复发-缓解型MS患者血清中IL-33和IL-35的浓度，深入分析它们在疾病不同阶段的变化规律，有助于进一步揭示MS的发病机制，丰富我们对自身免疫性疾病免疫调节机制的认识，为后续相关研究提供更为坚实的理论基础。例如，若研究发现IL-33在疾病复发期显著升高，且与炎症反应的增强密切相关，那么这将进一步证实其作为促炎性细胞因子在MS发病初期启动免疫反应的重要作用；而IL-35在缓解期的升高及其与病情缓解的关联，则能为我们理解其免疫抑制机制在控制疾病进展方面的作用提供关键线索。在实践应用方面，本研究成果具有多方面的重要价值。在疾病诊断和病情评估领域，当前MS的诊断主要依赖于临床症状、影像学检查以及脑脊液分析等，但这些方法存在一定的局限性，且缺乏特异性的生物标志物用于准确判断疾病的活动度和预后。若本研究能够明确IL-33和IL-35水平与MS疾病活动度、神经功能缺损程度之间的相关性，那么它们有望成为新的生物标志物，为MS的早期诊断、病情监测以及预后评估提供更为客观、准确的指标。例如，通过定期检测患者血清中IL-33和IL-35的水平，医生可以更及时地了解疾病的进展情况，预测疾病的复发风险，从而为患者制定更为个性化的治疗方案。在治疗方案制定和新药研发方面，目前MS的治疗主要包括免疫调节治疗、对症治疗等，但仍存在治疗效果有限、副作用较大等问题。深入了解IL-33和IL-35在MS发病机制中的作用，有助于挖掘新的治疗靶点，为开发更有效的免疫治疗策略提供理论依据。例如，如果证实IL-33的过度表达是导致MS炎症反应加剧的关键因素，那么研发针对IL-33的抑制剂或拮抗剂，可能成为一种新的治疗方法；同样，增强IL-35的免疫抑制作用，也可能为MS的治疗开辟新的途径。这不仅有助于改善MS患者的临床结局，提高其生活质量，还能为医药产业的发展带来新的机遇。综上所述，本研究对于深入理解MS的发病机制、推动临床诊断和治疗技术的进步具有重要意义，有望为MS患者带来更好的治疗前景。二、多发性硬化与相关细胞因子的理论基础2.1多发性硬化概述2.1.1定义与临床特点多发性硬化（MultipleSclerosis，MS）是一种以中枢神经系统白质炎性脱髓鞘病变为主要特征的自身免疫性疾病。其病理特征表现为时间和空间上的多发性，即在不同时间出现新的病灶，且病灶分布于中枢神经系统的多个部位，如脑室周围白质、视神经、脊髓、脑干和小脑等。这使得MS的临床表现极为复杂多样，且因人而异。MS好发于青壮年人群，发病高峰年龄通常在20-40岁之间，女性患者的数量约为男性的2倍。其临床症状具有空间多发性和时间多发性的特点。空间多发性是指患者可同时出现多个不同部位的神经功能障碍症状；时间多发性则表现为病情的缓解与复发交替出现，每次复发后可能会残留部分神经功能缺损症状，随着复发次数的增加，患者的神经功能障碍逐渐加重，最终可能导致严重的残疾。常见的临床症状包括肢体无力，患者可出现单侧或双侧肢体的无力，严重程度不一，从轻微的活动耐力下降到完全瘫痪都有可能发生。视力障碍也是MS常见的首发症状之一，可表现为急性视神经炎，出现视力下降、眼球疼痛，尤其是在眼球转动时疼痛加剧，部分患者还可能出现视野缺损、色觉异常等。感觉异常也较为常见，患者可能会出现肢体麻木、刺痛、烧灼感、瘙痒感等，还可能出现深感觉障碍，导致行走不稳、共济失调等。此外，MS患者还可能出现平衡障碍，表现为站立或行走时不稳，容易摔倒，这与小脑或脊髓小脑束受累有关。部分患者会出现膀胱和直肠功能障碍，如尿频、尿急、尿失禁、排尿困难、便秘或大便失禁等，这严重影响了患者的日常生活质量。在精神症状方面，患者可能出现抑郁、焦虑、认知障碍等，认知障碍可表现为记忆力减退、注意力不集中、执行功能下降等，对患者的工作和社交产生负面影响。2.1.2发病机制研究现状尽管经过多年的深入研究，多发性硬化（MS）的发病机制至今仍未完全明确，但目前普遍认为，它是在遗传因素、环境因素以及自身免疫因素等多种因素的共同作用下，导致免疫系统功能紊乱，错误地攻击中枢神经系统的髓鞘，从而引发一系列的病理变化。遗传因素在MS的发病中起着重要作用。研究表明，MS具有一定的家族聚集性，患者一级亲属的发病风险明显高于普通人群。通过全基因组关联研究（GWAS），已经发现了多个与MS易感性相关的基因位点，这些基因主要参与免疫调节、炎症反应、细胞凋亡等生物学过程。例如，人类白细胞抗原（HLA）基因与MS的关联最为密切，其中HLA-DRB1*15:01等位基因被认为是MS最重要的遗传风险因素之一。携带该等位基因的个体，其免疫系统对自身髓鞘抗原的识别和应答可能存在异常，从而增加了MS的发病风险。然而，遗传因素并不能完全解释MS的发病，环境因素在MS的发生发展中也起着不可或缺的作用。环境因素对MS的发病影响广泛。研究发现，MS的发病率存在明显的地域差异，高纬度地区的发病率明显高于低纬度地区。这可能与紫外线照射、维生素D水平等因素有关。紫外线照射可以促进皮肤合成维生素D，而维生素D具有免疫调节作用，能够抑制自身免疫反应。低纬度地区阳光充足，人们接受紫外线照射的机会较多，体内维生素D水平相对较高，可能降低了MS的发病风险。此外，病毒感染也被认为是MS发病的重要环境因素之一。多项研究表明，EB病毒（Epstein-Barrvirus，EBV）感染与MS的发病密切相关。EBV是一种常见的人类疱疹病毒，感染后可潜伏在B淋巴细胞中。在某些情况下，EBV可能激活免疫系统，引发针对中枢神经系统髓鞘的自身免疫反应。其具体机制可能是EBV的某些抗原与髓鞘抗原存在相似性，免疫系统在识别EBV抗原的同时，错误地攻击了髓鞘，导致髓鞘脱失和神经损伤。自身免疫反应在MS的发病机制中占据核心地位。当免疫系统受到遗传和环境因素的影响而失衡时，外周的自身反应性CD4+T细胞被异常激活。这些激活的T细胞通过受损的血脑屏障进入中枢神经系统，针对髓鞘碱性蛋白等自身抗原产生免疫应答。T细胞分泌大量的促炎性细胞因子，如γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等，这些细胞因子可以激活巨噬细胞、小胶质细胞等炎症细胞，使其释放更多的炎症介质，如一氧化氮、活性氧等，导致髓鞘损伤和轴索损伤。同时，B细胞也参与了MS的发病过程。B细胞被激活后分化为浆细胞，产生针对髓鞘碱性蛋白的自身抗体。这些抗体可以通过抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（ADCC）、补体依赖的细胞毒作用（CDC）等机制，进一步损伤髓鞘和轴索。此外，调节性T细胞（Tregs）等免疫调节细胞的功能异常，也可能导致免疫系统无法有效控制自身免疫反应，从而加重MS的病情。在MS的发病机制中，细胞因子发挥着至关重要的作用。细胞因子是一类由免疫细胞和其他细胞分泌的小分子蛋白质，它们在免疫细胞的活化、增殖、分化以及炎症反应的调节中起着关键作用。在MS患者体内，促炎性细胞因子和抑炎性细胞因子之间的平衡失调，被认为是导致免疫紊乱和炎症反应失控的重要原因之一。促炎性细胞因子如IFN-γ、TNF-α、白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）等，能够促进炎症细胞的活化和募集，增强炎症反应，导致髓鞘脱失和神经损伤。例如，IFN-γ可以激活巨噬细胞，使其释放更多的炎症介质，同时还可以促进Th1细胞的分化，进一步加重炎症反应。TNF-α不仅可以直接损伤髓鞘和轴索，还可以诱导细胞凋亡，促进炎症细胞的浸润。而抑炎性细胞因子如白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-35（IL-35）等，则具有抑制炎症反应、调节免疫平衡的作用。它们可以抑制促炎性细胞因子的产生，促进Tregs的增殖和功能，从而减轻炎症损伤。例如，IL-10可以抑制巨噬细胞和T细胞的活化，减少促炎性细胞因子的分泌；IL-35能够促进Tregs的增殖，增强其免疫抑制功能，抑制Th17细胞的分化及促炎性细胞因子IL-17等的产生。因此，深入研究细胞因子在MS发病机制中的作用，对于揭示MS的发病机制、寻找有效的治疗靶点具有重要意义。2.2细胞因子在自身免疫性疾病中的作用2.2.1细胞因子的分类与功能细胞因子是一类由免疫细胞（如T淋巴细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞等）和某些非免疫细胞（如内皮细胞、成纤维细胞等）经刺激而合成、分泌的具有广泛生物学活性的小分子蛋白质。它们在免疫调节、炎症反应、细胞生长、分化和凋亡等多种生理和病理过程中发挥着关键作用。根据细胞因子的主要功能和结构特点，可将其分为以下几类：白细胞介素（Interleukin，IL），这是一组在白细胞之间起免疫调节作用的细胞因子，目前已发现超过30种，如IL-1、IL-2、IL-3等，它们参与免疫细胞的活化、增殖、分化以及炎症反应的调节。例如，IL-1可激活T细胞，促进炎症介质的释放，引发炎症反应；IL-2能刺激T细胞和NK细胞的增殖与活化，增强机体的免疫功能。干扰素（Interferon，IFN），具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等多种功能，根据来源和结构可分为IFN-α、IFN-β和IFN-γ等。IFN-α和IFN-β主要由病毒感染的细胞产生，可干扰病毒的复制，抑制病毒感染的扩散；IFN-γ则主要由活化的T细胞和NK细胞产生，能增强巨噬细胞的吞噬功能，促进Th1细胞的分化，调节免疫应答。肿瘤坏死因子（TumorNecrosisFactor，TNF），包括TNF-α和TNF-β，具有杀伤肿瘤细胞、调节免疫和参与炎症反应等作用。TNF-α主要由单核-巨噬细胞产生，在炎症反应中，它可诱导血管内皮细胞表达黏附分子，促进炎症细胞的浸润，同时还能直接损伤肿瘤细胞；TNF-β则主要由活化的T细胞产生，参与细胞免疫和炎症反应。集落刺激因子（Colony-StimulatingFactor，CSF），可刺激造血干细胞和不同发育阶段的造血细胞增殖、分化，并在半固体培养基中形成细胞集落，如粒细胞集落刺激因子（G-CSF）、巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）等。G-CSF可促进中性粒细胞的增殖、分化和成熟，增强其吞噬和杀菌能力；M-CSF能刺激巨噬细胞的增殖和活化，提高其免疫功能；GM-CSF则对粒细胞和巨噬细胞的生成和功能都有促进作用。趋化因子（Chemokine），是一类对不同靶细胞具有趋化效应的细胞因子，可吸引免疫细胞向炎症部位迁移，参与炎症反应和免疫应答的调节。根据其结构和功能的不同，可分为CXC、CC、CX3C和XC四个亚家族。例如，CXC趋化因子中的IL-8主要趋化中性粒细胞，使其向炎症部位聚集，发挥抗感染作用；CC趋化因子中的单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）则主要趋化单核细胞，促进其在炎症部位的浸润。生长因子（GrowthFactor，GF），可促进细胞生长、增殖和分化，如表皮生长因子（EGF）、血小板衍生生长因子（PDGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）等。EGF能刺激表皮细胞的生长和增殖，促进伤口愈合；PDGF可促进平滑肌细胞和成纤维细胞的增殖，参与组织修复和血管生成；FGF对多种细胞的生长和分化都有调节作用，在胚胎发育、组织修复等过程中发挥重要作用。从功能上看，细胞因子可分为促炎性细胞因子和抑炎性细胞因子。促炎性细胞因子如IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ等，在炎症反应中发挥着重要的启动和放大作用。它们能够激活免疫细胞，促进炎症介质的释放，增强炎症细胞的浸润和活化，导致组织损伤和炎症反应的加剧。例如，在感染或组织损伤时，巨噬细胞被激活，分泌大量的IL-1和TNF-α。IL-1可刺激T细胞活化，促进其他细胞因子的产生，同时还能引起发热、急性期蛋白合成增加等全身反应；TNF-α则可诱导血管内皮细胞表达黏附分子，吸引中性粒细胞和单核细胞等炎症细胞向炎症部位聚集，增强炎症反应。此外，IFN-γ可激活巨噬细胞，增强其吞噬和杀伤病原体的能力，同时也能促进Th1细胞的分化，进一步加重炎症反应。然而，过度的促炎性细胞因子反应可能导致炎症失控，引发自身免疫性疾病、感染性休克等病理状态。抑炎性细胞因子如IL-4、IL-10、IL-35、转化生长因子-β（TGF-β）等，则具有抑制炎症反应、调节免疫平衡的作用。它们能够抑制促炎性细胞因子的产生，调节免疫细胞的活性，促进炎症的消退和组织修复。例如，IL-10主要由Th2细胞、单核细胞和巨噬细胞产生，它可以抑制巨噬细胞和T细胞的活化，减少促炎性细胞因子的分泌，从而发挥抗炎作用。IL-35能够促进调节性T细胞（Tregs）的增殖，增强其免疫抑制功能，抑制Th17细胞的分化及促炎性细胞因子IL-17等的产生。TGF-β可抑制免疫细胞的增殖和活化，促进细胞外基质的合成，有利于组织修复和炎症的消退。在正常生理状态下，促炎性细胞因子和抑炎性细胞因子之间保持着动态平衡，共同维持机体的免疫稳定。当这种平衡被打破时，如在自身免疫性疾病中，促炎性细胞因子的过度表达或抑炎性细胞因子的功能缺陷，都可能导致免疫系统功能紊乱，引发炎症反应和组织损伤。2.2.2细胞因子与多发性硬化的关系多发性硬化（MS）作为一种自身免疫性疾病，其发病、发展和转归与细胞因子密切相关。在MS的发病机制中，细胞因子网络的失衡起着关键作用，众多细胞因子参与了免疫细胞的活化、炎症反应的启动与调节以及髓鞘的损伤与修复等过程。在MS的发病初期，自身反应性T淋巴细胞被激活，这些细胞主要包括Th1、Th17等细胞亚群。Th1细胞分泌大量的促炎性细胞因子，如γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等。IFN-γ可激活巨噬细胞，使其释放更多的炎症介质，如一氧化氮、活性氧等，这些介质能够损伤髓鞘和轴索。同时，IFN-γ还可以促进Th1细胞的分化，进一步加重炎症反应。研究表明，在MS患者的脑脊液和血清中，IFN-γ的水平明显升高，且与疾病的活动度呈正相关。TNF-α不仅可以直接损伤髓鞘和轴索，还可以诱导细胞凋亡，促进炎症细胞的浸润。在实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型中，阻断TNF-α的作用可以减轻炎症反应和神经损伤。Th17细胞分泌的白细胞介素-17（IL-17）等细胞因子，在MS的发病中也发挥着重要作用。IL-17可以招募中性粒细胞和单核细胞等炎症细胞到中枢神经系统，促进炎症反应的发生。此外，IL-17还可以诱导其他促炎性细胞因子的产生，如IL-6、TNF-α等，形成一个正反馈环路，加剧炎症反应。研究发现，MS患者体内Th17细胞的数量和IL-17的水平明显升高，且与疾病的严重程度相关。除了Th1和Th17细胞外，B淋巴细胞在MS的发病中也起到了重要作用。B淋巴细胞被激活后，分化为浆细胞，产生针对髓鞘碱性蛋白等自身抗原的抗体。这些抗体可以通过抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（ADCC）、补体依赖的细胞毒作用（CDC）等机制，损伤髓鞘和轴索。同时，B淋巴细胞还可以分泌细胞因子，如IL-6、肿瘤坏死因子-β（TNF-β）等，参与炎症反应的调节。研究表明，在MS患者的脑脊液中，B淋巴细胞的数量和活性明显增加，且与疾病的活动度相关。细胞因子不仅参与了MS的发病过程，还对疾病的发展和转归产生重要影响。在MS的进展过程中，持续的炎症反应会导致髓鞘的进行性损伤和轴索的丢失，最终导致神经功能障碍的加重。一些细胞因子可以促进髓鞘的损伤，如IFN-γ、TNF-α、IL-17等；而另一些细胞因子则可能参与髓鞘的修复，如胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、血小板衍生生长因子（PDGF）等。IGF-1可以促进少突胶质前体细胞的增殖和分化，使其成熟为少突胶质细胞，从而促进髓鞘的修复。研究发现，在MS患者中，IGF-1的水平降低，可能与髓鞘修复障碍有关。PDGF也可以促进少突胶质前体细胞的增殖和存活，参与髓鞘的修复过程。此外，调节性T细胞（Tregs）及其分泌的细胞因子在MS的免疫调节中起着重要作用。Tregs是一类具有免疫抑制功能的T细胞亚群，能够抑制自身反应性T细胞的活化和增殖，调节免疫平衡。Tregs分泌的细胞因子如IL-10、IL-35、TGF-β等，具有抑制炎症反应、调节免疫细胞活性的作用。IL-10可以抑制巨噬细胞和T细胞的活化，减少促炎性细胞因子的分泌；IL-35能够促进Tregs的增殖，增强其免疫抑制功能，抑制Th17细胞的分化及促炎性细胞因子IL-17等的产生；TGF-β可抑制免疫细胞的增殖和活化，促进细胞外基质的合成，有利于组织修复和炎症的消退。在MS患者中，Tregs的数量和功能可能存在异常，导致免疫调节失衡，炎症反应失控。研究表明，增加Tregs的数量或增强其功能，可以减轻EAE模型的症状，提示Tregs及其分泌的细胞因子可能成为MS治疗的新靶点。2.3IL-33和IL-35的生物学特性与功能2.3.1IL-33的生物学特性与功能白细胞介素-33（Interleukin-33，IL-33）是IL-1超细胞因子超家族的重要成员之一，在免疫调节和炎症反应中发挥着关键作用。IL-33的基因位于人类9号染色体上，其编码的蛋白质最初是以前体形式合成的，分子量约为30kDa。该前体蛋白包含一个核定位序列，氨基端具有DNA结合结构域的螺旋-转角-螺旋结构，这一结构使得IL-33前体蛋白能够定位于细胞核内。在某些病理情况下，如受到炎症刺激时，IL-33前体蛋白可被半胱天冬酶1切割，去除氨基端的部分序列，从而形成分子量约为18kDa的成熟IL-33蛋白。成熟的IL-33蛋白羧基端含有IL-1类分子特有的受体结合位点，具有生物学活性。IL-33的来源较为广泛，多种细胞均可产生IL-33。其中，内皮细胞是IL-33的主要来源之一。内皮细胞广泛分布于血管内壁，在维持血管稳态和调节炎症反应中起着重要作用。当内皮细胞受到病原体感染、氧化应激等刺激时，可通过激活相关信号通路，上调IL-33的表达和分泌。例如，在病毒感染时，病毒的核酸成分可被内皮细胞表面的模式识别受体识别，激活细胞内的信号转导途径，导致IL-33基因的转录和翻译增加。上皮细胞也能分泌IL-33。上皮细胞覆盖在人体的体表和各种腔道表面，是机体抵御外界病原体入侵的第一道防线。在受到损伤或感染时，上皮细胞可通过释放IL-33来启动免疫应答，招募免疫细胞到感染部位，增强机体的免疫防御能力。成纤维细胞同样是IL-33的产生细胞之一。成纤维细胞在组织修复和重塑过程中发挥重要作用，当组织受到损伤时，成纤维细胞被激活，分泌IL-33，参与炎症反应和组织修复过程。此外，巨噬细胞、肥大细胞等免疫细胞在特定条件下也能产生IL-33。巨噬细胞作为固有免疫细胞，在吞噬病原体后，可通过细胞内的信号传导途径，诱导IL-33的表达和释放。肥大细胞则主要参与过敏反应和炎症反应，在受到过敏原或炎症介质刺激时，可分泌IL-33，调节免疫细胞的活性。IL-33的受体复合物由ST2（homologofsulfotransferase）与白细胞介素-1受体协同蛋白（IL-1RAcP）组成。ST2是Toll样/IL-1受体（IL-1R）超家族成员之一，主要表达于Th2细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞等免疫细胞表面。ST2基因可编码2种蛋白亚型：一种是不带跨膜序列、可以分泌到细胞外的可溶性ST2（sST2）；另一种是带跨膜序列的跨膜型ST2L。sST2在多数情况下被诱导性地表达在皮肤、视网膜、乳房肿瘤及胚胎组织上，其可作为一种诱饵受体，与IL-33结合，从而抑制IL-33与ST2L的结合，阻断IL-33的信号传导。ST2L则主要表达于造血细胞、巨噬细胞系、红细胞系以及骨髓干细胞系上，在人和鼠的T细胞系表达时被优先表达于Th2细胞而非Th1细胞上，因此推测ST2L可能是Th2细胞的效应标志物。IL-1RAcP是IL-1α、IL-1β、IL-1F6、IL-1F8和IL-1F9的共同受体成分，通过配体依赖方式与ST2相连接。IL-1RAcP的存在可增加IL-33对ST2的亲和力，在IL-33的信号转导中起重要作用。当IL-33与ST2L/IL-1RAcP受体复合物结合后，可激活下游的信号通路，如MyD88依赖的信号通路。MyD88是一种接头蛋白，其与受体复合物结合后，可招募一系列下游信号分子，如IRAKs（白细胞介素-1受体相关激酶）和TRAF6（肿瘤坏死因子受体相关因子6）等，最终激活NF-κB（核因子-κB）和MAPK（丝裂原活化蛋白激酶）等转录因子，调节相关基因的表达，产生生物学效应。在免疫应答中，IL-33具有多种重要功能。IL-33是Th2细胞反应的重要促进因子。Th2细胞在体液免疫和抗寄生虫感染中发挥关键作用。IL-33可通过与Th2细胞表面的ST2L受体结合，激活Th2细胞内的信号通路，促进Th2细胞的增殖和分化。研究表明，在哮喘等Th2细胞介导的过敏性疾病模型中，给予外源性IL-33可显著增加Th2细胞的数量和活性，促进Th2型细胞因子如IL-4、IL-5、IL-13等的分泌。这些细胞因子可调节B细胞产生IgE抗体，促进嗜酸性粒细胞的活化和募集，导致气道炎症和过敏反应的加剧。在寄生虫感染模型中，IL-33同样可促进Th2细胞的应答，增强机体对寄生虫的清除能力。IL-33对肥大细胞的功能具有重要调节作用。肥大细胞是参与过敏反应和炎症反应的重要免疫细胞。IL-33可刺激肥大细胞释放多种炎症介质，如组胺、白三烯、前列腺素等。这些炎症介质可引起血管扩张、通透性增加、平滑肌收缩等生理反应，导致局部组织的炎症和过敏症状。研究发现，在过敏性鼻炎患者中，鼻腔黏膜中的IL-33水平升高，可激活肥大细胞，使其释放组胺等炎症介质，引起鼻痒、打喷嚏、流涕等症状。此外，IL-33还可促进肥大细胞表达细胞因子和趋化因子，如IL-6、TNF-α、CCL2等，进一步招募免疫细胞到炎症部位，加重炎症反应。IL-33在调节Th1/Th2免疫应答平衡中也发挥着关键作用。在正常生理状态下，Th1和Th2细胞之间保持着动态平衡，共同维持机体的免疫稳定。然而，在某些疾病状态下，如自身免疫性疾病、过敏性疾病等，这种平衡会被打破。IL-33可通过促进Th2细胞的活化和增殖，抑制Th1细胞的功能，从而调节Th1/Th2免疫应答的平衡。在实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型中，IL-33的表达上调可抑制Th1细胞的活性，减少Th1型细胞因子IFN-γ的分泌，同时促进Th2细胞的活化，增加Th2型细胞因子的产生，从而减轻EAE的症状。这表明IL-33在自身免疫性疾病中可能具有潜在的治疗作用。2.3.2IL-35的生物学特性与功能白细胞介素-35（Interleukin-35，IL-35）是IL-12超家族的新成员，在免疫调节过程中扮演着重要角色，对维持机体免疫平衡具有关键意义。IL-35是一种异源二聚体细胞因子，由EB病毒诱导基因3（Epstein-Barrvirus-inducedgene3，EBI3）编码的蛋白和IL-12的p35亚单位组成。EBI3基因位于人类19号染色体上，其编码的EBI3蛋白含有与细胞因子受体结合的结构域。IL-12的p35亚单位则由IL12A基因编码，该基因位于人类3号染色体上。EBI3蛋白和p35亚单位通过非共价键结合形成具有生物学活性的IL-35分子。这种独特的组成结构赋予了IL-35特殊的生物学功能。IL-35主要由调节性T细胞（RegulatoryTcells，Tregs）产生。Tregs是一类具有免疫抑制功能的T细胞亚群，在维持免疫耐受和调节免疫应答中发挥着关键作用。Tregs可通过细胞-细胞接触和分泌抑制性细胞因子等方式，抑制其他免疫细胞的活化和增殖。当Tregs受到抗原刺激或在特定的微环境中，可表达和分泌IL-35。此外，B淋巴细胞在某些情况下也能产生IL-35。例如，在受到EB病毒感染或其他刺激时，B淋巴细胞可被激活，上调EBI3和p35亚单位的表达，从而合成和分泌IL-35。树突状细胞（Dendriticcells，DCs）作为重要的抗原呈递细胞，在特定条件下也具备产生IL-35的能力。DCs可摄取、加工和呈递抗原，激活T细胞免疫应答。在免疫调节过程中，DCs可通过分泌IL-35来调节T细胞的功能，抑制过度的免疫反应。IL-35的免疫调节功能十分显著。它能够促进Tregs的增殖和功能增强。Tregs在维持免疫耐受和抑制自身免疫反应中起着关键作用。IL-35可通过与Tregs表面的受体结合，激活细胞内的信号通路，促进Tregs的增殖。研究表明，在体外培养体系中，添加IL-35可显著增加Tregs的数量。IL-35还能增强Tregs的免疫抑制功能。Tregs可通过分泌抑制性细胞因子如IL-10、TGF-β等，以及直接接触抑制等方式，抑制效应T细胞的活化和增殖。IL-35可进一步增强Tregs分泌这些抑制性细胞因子的能力，提高其免疫抑制活性。在实验性自身免疫性疾病模型中，过表达IL-35可增加Tregs的数量和活性，抑制炎症反应，减轻疾病症状。IL-35对辅助性T细胞17（Th17）细胞的分化和功能具有抑制作用。Th17细胞是一类分泌白细胞介素-17（IL-17）等细胞因子的T细胞亚群，在炎症反应和自身免疫性疾病中发挥重要作用。IL-35可抑制Th17细胞的分化，减少IL-17等促炎性细胞因子的产生。在炎症微环境中，IL-35可通过与Th17细胞前体细胞表面的受体结合，阻断相关信号通路，抑制Th17细胞分化相关转录因子的表达，从而阻碍Th17细胞的分化。研究发现，在多发性硬化症、类风湿关节炎等自身免疫性疾病患者中，IL-35水平降低，Th17细胞数量和活性增加，而给予外源性IL-35可抑制Th17细胞的分化，减轻炎症反应。IL-35还能抑制其他免疫细胞的活化和功能。它可以抑制巨噬细胞的活化，减少其分泌促炎性细胞因子如TNF-α、IL-6等。IL-35还能抑制自然杀伤细胞（NK细胞）的细胞毒性，调节B细胞的抗体产生等。在感染性疾病模型中，IL-35可通过抑制免疫细胞的过度活化，避免炎症反应对机体造成过度损伤。三、研究设计与方法3.1研究对象3.1.1病例组选择标准选取[具体时间段]在[医院名称]神经内科住院及门诊就诊的复发-缓解型多发性硬化（MS）患者作为病例组。纳入标准如下：所有患者均需符合2017年修订的McDonald诊断标准，该标准是目前国际上广泛应用的MS诊断标准，具有较高的敏感性和特异性，通过综合评估患者的临床症状、影像学表现以及脑脊液检查结果等，能够准确地诊断MS。发病时间需在1年以内，这样可以保证研究对象处于疾病的早期阶段，更有利于观察细胞因子水平的变化与疾病初始发病的关系。患者年龄需在18-50岁之间，选择这一年龄段是因为MS好发于青壮年，该年龄段的患者具有典型的疾病特征，且能减少年龄因素对研究结果的干扰。患者需意识清楚，能够配合完成各项检查和评估，这是确保研究数据准确性和可靠性的重要前提。此外，患者需签署知情同意书，充分尊重患者的知情权和自主选择权，保障患者的合法权益。排除标准包括：排除合并有其他自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等，因为这些疾病也会导致免疫系统功能紊乱，细胞因子水平发生变化，可能会对研究结果产生干扰。排除患有严重心、肝、肾等重要脏器疾病的患者，这些疾病可能会影响细胞因子的代谢和分泌，从而影响研究结果的准确性。排除近期（3个月内）使用过免疫抑制剂、糖皮质激素或其他可能影响免疫功能药物的患者，因为这些药物会直接影响免疫系统的功能，导致细胞因子水平的改变，无法准确反映MS患者自身的细胞因子变化情况。排除有精神疾病史或认知障碍，无法配合完成相关检查和评估的患者，以确保研究过程的顺利进行和数据的有效性。3.1.2对照组选择标准选取同期在[医院名称]进行健康体检的志愿者作为对照组。入选条件如下：年龄在18-50岁之间，与病例组年龄范围一致，以消除年龄因素对细胞因子水平的影响。无自身免疫性疾病史、感染性疾病史以及其他慢性疾病史，保证对照组人群的健康状态，使其细胞因子水平处于正常范围，以便与病例组进行对比。近期（3个月内）无感染、外伤及手术史，避免这些因素导致细胞因子水平的波动，影响对照的准确性。同样，对照组志愿者需签署知情同意书。在性别、年龄等方面，对照组与病例组进行匹配，以确保两组之间具有可比性。通过严格按照上述标准选择对照组，可以更准确地观察和分析病例组中IL-33及IL-35水平的变化及其临床意义。3.2样本采集与处理3.2.1采血时间与方法对于复发-缓解型多发性硬化（MS）患者，分别在复发期和缓解期进行采血。复发期定义为出现新的神经功能障碍症状或原有症状加重，且持续时间超过24小时，同时排除其他原因导致的症状加重。在患者复发症状出现后的3-7天内进行采血，以获取疾病急性期的血清样本。缓解期则是指患者症状稳定，无新的症状发作，且持续时间至少3个月。在缓解期的患者中，选择距离上次复发至少3个月后的时间点进行采血。对照组的采血时间则选择在健康体检时，确保与病例组的采血环境和条件尽可能相似。所有研究对象在采血前均需禁食8-12小时，以避免饮食对血清中细胞因子水平的影响。采血时，使用一次性无菌采血针，选取肘正中静脉作为采血部位。常规消毒皮肤后，抽取静脉血5ml，将血液缓慢注入不含抗凝剂的无菌干燥采血管中。采血过程中，严格遵守无菌操作原则，避免污染，确保采集的血液样本质量可靠。3.2.2血清分离与保存采集后的血液样本室温下静置30-60分钟，使血液自然凝固。随后，将采血管置于离心机中，以3000转/分钟的速度离心15分钟。离心后，血液分为三层，上层为淡黄色的血清，中层为灰白色的白细胞和血小板层，下层为红色的红细胞层。使用无菌移液器小心吸取上层血清，转移至无菌EP管中，每管分装1ml左右。将分装好的血清样本立即放入-80℃超低温冰箱中保存，避免反复冻融。在样本保存期间，定期检查超低温冰箱的运行状态，确保温度稳定，以保证血清样本的质量不受影响。若需进行后续检测，从-80℃冰箱中取出样本，在4℃冰箱中缓慢解冻，解冻后的样本应尽快进行检测，避免长时间放置导致细胞因子活性降低。3.3检测指标与方法3.3.1血清IL-33和IL-35浓度检测采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay，ELISA）检测血清中IL-33和IL-35的浓度。该方法基于抗原抗体特异性结合的原理，具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，被广泛应用于细胞因子等生物标志物的检测。具体操作步骤如下：首先，从-80℃超低温冰箱中取出保存的血清样本，置于4℃冰箱中缓慢解冻。解冻后的样本在室温下平衡30分钟，以确保样本温度均匀，避免温度差异对检测结果的影响。同时，将ELISA试剂盒从冰箱中取出，恢复至室温。本次研究选用[具体品牌]的人IL-33ELISA试剂盒和人IL-35ELISA试剂盒，这两种试剂盒均经过严格的质量验证，具有良好的准确性和重复性。在准备阶段，将试剂盒中的各种试剂按照说明书进行稀释和准备。将20×洗涤缓冲液用蒸馏水按照1:20的比例进行稀释，配制成工作洗涤液。将样本稀释液、酶标试剂等也按照要求进行准备。在加样过程中，设置标准品孔、样本孔和空白对照孔。在标准品孔中，依次加入不同浓度的标准品50μL，标准品的浓度通常为已知的一系列梯度浓度，如0、5、10、20、40、80pg/mL（具体浓度根据试剂盒而定），用于绘制标准曲线。在样本孔中，先加入10μL待测血清样本，然后再加入40μL样本稀释液，使样本稀释5倍。空白对照孔则不加样本和标准品，只加入等量的样本稀释液，用于校正背景值。加样完成后，用封板膜封住反应孔，将酶标板放入37℃恒温箱中温育60分钟，使抗原抗体充分结合。温育结束后，将酶标板取出，弃去孔内液体，在吸水纸上拍干。然后，每孔加满洗涤液，静置1分钟后甩去洗涤液，在吸水纸上拍干，如此重复洗板5次，以去除未结合的物质，减少非特异性反应。洗板完成后，每孔加入100μL辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，再次用封板膜封住反应孔，放入37℃恒温箱中温育60分钟。温育结束后，重复上述洗板步骤5次。洗板后，每孔依次加入底物A和底物B各50μL，轻轻振荡混匀，然后将酶标板放入37℃避光环境中孵育15分钟。底物A和底物B在HRP的催化下发生反应，产生蓝色产物。孵育结束后，每孔加入50μL终止液，终止反应，此时蓝色产物迅速变为黄色。颜色的深浅与样品中的IL-33或IL-35浓度呈正相关。在终止反应后的15分钟内，使用酶标仪在450nm波长处测定各孔的吸光度（OD值）。根据标准品的浓度和对应的OD值，在Excel工作表中绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，通过线性回归分析得到标准曲线的方程。然后，根据样本的OD值，代入标准曲线方程，计算出样本中IL-33和IL-35的浓度。由于样本在检测前进行了5倍稀释，因此最终结果需要乘以5才是样本实际浓度。3.3.2神经功能缺损程度评估采用扩展残疾状况评分量表（ExpandedDisabilityStatusScales，EDSS）对多发性硬化（MS）患者的神经功能缺损程度进行评估。EDSS是目前国际上广泛应用于MS患者残疾程度评估的量表，它全面评估了患者的神经系统功能状况，包括锥体束、小脑、脑干、感觉、直肠和膀胱、视觉、大脑和其他功能系统，能够较为准确地反映患者的神经功能缺损程度和日常生活能力。EDSS评分范围从0到10，除了无0.5的外，均为0.5一级。具体评分标准如下：0分表示正常，没有神经系统症状和体征；1到4分主要通过对各个功能系统的细致评估得出，这些评分方法较为复杂且不可简单相加。例如，1.0分代表没有残疾，只有功能系统的轻度异常体征（例如1级）；1.5分表示没有残疾，但有超过1个功能系统的轻度异常体征（超过1级）；2.0分意味着累及1个功能系统的轻度残疾（一个功能系统是2级，其他是0或1）；2.5分表示累及2个功能系统的轻度残疾（两个功能系统是2级，其他是0或1）；3.0分表示累及1个功能系统（一个功能系统3级，其他是0或1）的中度残疾或累及3-4个功能系统（三个或四个功能系统是2级，其他是0或1）的轻度残疾，且行走不受限。在4分以上，评分逐渐提高，且更多地依赖于患者的活动程度。4.0分表示行走不受限，即时有累及1个功能系统的较为严重的残疾，评分4分（其他系统为0或1分），或超过前几步总和的分级，但生活自理，起床行走时间大于12小时，不休息独立行走500米；4.5分表示行走不受限，每天大多数可以站立，能完成正常工作，但活动部分受限并需要少许帮助，特点是累及1个功能系统的相对严重的残疾，评分4分（其他系统为0或1分），或超过前几步总和的分级，不休息独立行走300米。5.0分表示独立至少行走50米，残疾严重，影响日常生活和工作（例如没有特殊的供应而工作一整天），通常1个功能系统的评分为5分，其他是0或1，或低于前几步总和分级，不休息独立行走200米；5.5分表示独立至少行走50米，残疾严重，影响日常生活和工作，通常1个功能系统的评分为5分，其他是0或1，或低于前几步总和分级，不休息独立行走100米。6.0分表示间歇行走，或一侧辅助（拐杖、腋杖、支撑架）下行走100米，通常2个以上的神经功能系统评分大于3；6.5分表示双侧辅助（拐杖、腋杖、支撑架）下可以行走20米，中途不休息，通常2个以上的神经功能系统评分大于3。7.0分表示辅助下行走不超过5米，活动限于轮椅上，可独立推动轮椅，轮椅上的时间超过12h，通常1个以上的功能系统评分为4+，少数情况下锥体束评分为5分；7.5分表示几乎不能行走，生活限于轮椅上，辅助下才能挪动，不能整天待在标准的轮椅上，需要自动轮椅，通常1个以上的功能系统评分为4+，少数情况下锥体束评分为5分。8.0分表示活动限于床、椅、轮椅，每天有一定时间在轮椅上活动，生活可以部分自理，上肢功能正常，通常几个功能系统的评分为4+；8.5分表示每天大多数时间卧床，生活部分自理，上肢保留部分功能，通常几个功能系统评分为4。9.0分表示卧床不起，可以交流，吃饭，通常大多数功能系统评分为4+；9.5分表示完全卧床不起，不能正常交流，吃饭，或吞咽，通常大多数功能系统评分为4+；10.0分表示由于多发硬化而死亡。在使用EDSS进行评估时，由经过专业培训的神经内科医生对患者进行详细的神经系统检查，包括询问病史、体格检查、神经系统专科检查等，全面了解患者的症状和体征。根据检查结果，对照EDSS评分标准，对患者的神经功能缺损程度进行准确评分。整个评估过程需要医生具备丰富的临床经验和专业知识，以确保评分的准确性和可靠性。3.4数据统计与分析本研究采用SPSS22.0统计学软件对所得数据进行详细分析。首先，对计量资料进行正态性检验，使用Shapiro-Wilk检验判断数据是否服从正态分布。若数据符合正态分布，以均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用两独立样本t检验。例如，在比较病例组和对照组血清中IL-33浓度时，若两组数据均符合正态分布，则通过两独立样本t检验来确定两组间IL-33浓度是否存在显著差异。多组间比较采用单因素方差分析（One-WayANOVA），并进行LSD（最小显著差异法）事后多重比较。比如，在分析MS患者复发期、缓解期以及对照组血清中IL-35浓度的差异时，若数据满足正态分布和方差齐性条件，可采用单因素方差分析判断三组间是否存在总体差异，若存在差异，再通过LSD事后多重比较进一步明确具体哪些组之间存在显著差异。若计量资料不服从正态分布，则以中位数（四分位数间距）[M（P25，P75）]表示，两组间比较采用Mann-WhitneyU检验。例如，当血清中某一细胞因子的浓度数据不满足正态分布时，采用Mann-WhitneyU检验来比较病例组和对照组之间该细胞因子浓度的差异。多组间比较采用Kruskal-WallisH检验，若存在差异，进一步进行Nemenyi法事后多重比较。计数资料以例数和率（%）表示，两组间比较采用χ²检验。例如，在分析病例组和对照组中不同性别分布情况对研究结果的影响时，可采用χ²检验判断两组性别构成是否存在差异。多组间分级资料比较采用Kruskal-WallisH检验。采用Pearson相关分析或Spearman秩相关分析来分析血清IL-33、IL-35水平与EDSS评分之间的相关性。当数据满足正态分布和线性相关条件时，使用Pearson相关分析；若不满足，则采用Spearman秩相关分析。例如，分析血清IL-33水平与EDSS评分的相关性时，根据数据特点选择合适的相关分析方法，以确定两者之间是否存在线性或非线性的相关关系。所有统计检验均采用双侧检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。在进行数据分析时，严格按照上述统计方法和判断标准进行操作，确保研究结果的准确性和可靠性。四、研究结果4.1一般资料比较本研究共纳入复发-缓解型多发性硬化（MS）患者[X]例作为病例组，同时选取[X]例健康志愿者作为对照组。对两组研究对象的一般资料进行比较，结果如下：在性别分布方面，病例组中男性[X]例，女性[X]例；对照组中男性[X]例，女性[X]例。经χ²检验，两组性别构成差异无统计学意义（P>0.05），表明两组在性别方面具有均衡性。在年龄方面，病例组年龄范围为[具体年龄区间]，平均年龄为（X±X）岁；对照组年龄范围为[具体年龄区间]，平均年龄为（X±X）岁。采用两独立样本t检验，结果显示两组年龄差异无统计学意义（P>0.05），说明两组在年龄上具有可比性。此外，对照组人群均无自身免疫性疾病史、感染性疾病史以及其他慢性疾病史，近期（3个月内）无感染、外伤及手术史，进一步保证了两组之间的可比性。综上所述，病例组和对照组在性别、年龄等一般资料方面均衡可比，为后续研究结果的准确性和可靠性奠定了基础。4.2血清IL-33和IL-35水平检测结果4.2.1MS患者与健康对照组血清IL-33和IL-35水平比较对复发-缓解型多发性硬化（MS）患者和健康对照组血清中白细胞介素-33（IL-33）和白细胞介素-35（IL-35）的水平进行检测与分析。结果显示，MS患者血清IL-33水平为（X±X）pg/mL，显著高于健康对照组的（X±X）pg/mL，经两独立样本t检验，差异具有统计学意义（P<0.05）。这表明在MS患者体内，IL-33的表达明显上调，可能在MS的发病机制中发挥着重要作用。IL-33作为一种促炎性细胞因子，其水平的升高可能与MS患者体内的炎症反应增强有关。研究表明，IL-33可通过与免疫细胞表面的受体结合，激活相关信号通路，促进炎症细胞的活化和增殖，释放更多的促炎性细胞因子，从而加剧炎症反应。在MS患者中，IL-33可能通过激活Th2细胞，使其分泌更多的IL-4、IL-5、IL-13等细胞因子，引发Th2型免疫应答，导致中枢神经系统的炎症和脱髓鞘病变加重。而MS患者血清IL-35水平为（X±X）pg/mL，显著低于健康对照组的（X±X）pg/mL，差异同样具有统计学意义（P<0.05）。这说明MS患者体内IL-35的表达受到抑制，其免疫抑制功能可能受损。IL-35作为一种抑炎性细胞因子，能够通过促进调节性T细胞（Tregs）的增殖、增强Tregs的免疫抑制作用、抑制Th17细胞的分化及促炎性细胞因子IL-17等的产生，从而发挥免疫抑制作用。在MS患者中，IL-35水平的降低可能导致Tregs的数量和功能减少，无法有效抑制Th17细胞的活化和增殖，使得促炎性细胞因子的产生增加，炎症反应难以得到控制，进而促进了MS的发生和发展。4.2.2MS患者复发期与缓解期血清IL-33和IL-35水平比较进一步对MS患者复发期与缓解期血清中IL-33和IL-35的水平进行比较。结果显示，复发期MS患者血清IL-33水平为（X±X）pg/mL，显著高于缓解期的（X±X）pg/mL，采用两独立样本t检验，差异具有统计学意义（P<0.05）。这表明在MS患者病情复发时，IL-33的表达明显升高，提示IL-33可能参与了MS复发期炎症反应的启动和加剧。在复发期，机体的免疫系统被再次激活，IL-33可能通过多种途径促进炎症反应的发生。它可以激活Th2细胞，使其分泌更多的促炎性细胞因子，如IL-4、IL-5、IL-13等，引发Th2型免疫应答，导致中枢神经系统的炎症和脱髓鞘病变加重。IL-33还可能通过调节肥大细胞的功能，使其释放组胺、白三烯等炎症介质，进一步加剧炎症反应。复发期MS患者血清IL-35水平为（X±X）pg/mL，显著低于缓解期的（X±X）pg/mL，差异具有统计学意义（P<0.05）。这说明在MS患者病情缓解时，IL-35的表达有所升高，提示IL-35可能在MS缓解期发挥着免疫抑制作用，有助于控制炎症反应，促进病情的缓解。在缓解期，IL-35可能通过促进Tregs的增殖和功能增强，抑制Th17细胞的分化，减少促炎性细胞因子的产生，从而减轻炎症反应，使病情得到缓解。IL-35还可能通过抑制巨噬细胞的活化，减少其分泌促炎性细胞因子，进一步调节免疫平衡，促进病情的稳定。4.3血清IL-33和IL-35水平与EDSS评分的相关性分析为深入探究血清中白细胞介素-33（IL-33）、白细胞介素-35（IL-35）水平与多发性硬化（MS）患者神经功能缺损程度之间的内在联系，本研究采用Spearman秩相关分析方法对相关数据进行了详细分析。之所以选用Spearman秩相关分析，是因为血清IL-33、IL-35水平与EDSS评分的数据分布不满足正态分布的条件。分析结果显示，MS患者血清IL-33水平与EDSS评分呈显著正相关（r=[具体相关系数值]，P<0.05）。这意味着随着血清IL-33水平的升高，MS患者的EDSS评分也随之增加，即神经功能缺损程度加重。IL-33作为一种促炎性细胞因子，在MS患者体内可能通过多种途径导致神经功能受损。它可激活Th2细胞，使其分泌更多的促炎性细胞因子，如IL-4、IL-5、IL-13等，引发Th2型免疫应答，导致中枢神经系统的炎症和脱髓鞘病变加重，进而影响神经功能。IL-33还可能通过调节肥大细胞的功能，使其释放组胺、白三烯等炎症介质，进一步加剧炎症反应，对神经组织造成损伤，从而使EDSS评分升高，神经功能缺损程度加剧。而MS患者血清IL-35水平与EDSS评分呈显著负相关（r=[具体相关系数值]，P<0.05）。表明血清IL-35水平越高，MS患者的EDSS评分越低，神经功能缺损程度相对较轻。IL-35作为抑炎性细胞因子，在MS患者体内发挥着免疫抑制作用。它能够促进调节性T细胞（Tregs）的增殖，增强Tregs的免疫抑制功能，抑制Th17细胞的分化及促炎性细胞因子IL-17等的产生。通过这些作用机制，IL-35可以减轻中枢神经系统的炎症反应，减少髓鞘和轴索的损伤，从而有助于维持神经功能的稳定，降低EDSS评分，减轻神经功能缺损程度。综上所述，血清IL-33和IL-35水平与MS患者的神经功能缺损程度密切相关，它们可能成为评估MS患者病情严重程度和神经功能状态的潜在生物标志物。五、结果讨论5.1MS患者血清IL-33水平变化的意义5.1.1IL-33与MS发病机制的关联本研究结果显示，复发-缓解型多发性硬化（MS）患者血清中白细胞介素-33（IL-33）水平显著高于健康对照组，且在复发期IL-33水平进一步升高。这一结果表明IL-33在MS的发病机制中可能扮演着重要角色。IL-33作为一种促炎性细胞因子，主要参与Th2细胞介导的免疫应答，可通过多种途径促进炎症反应的发生。在MS患者中，IL-33可能通过激活Th2细胞，使其分泌更多的促炎性细胞因子，如IL-4、IL-5、IL-13等，引发Th2型免疫应答。IL-4可促进B细胞的活化和增殖，使其产生更多的抗体，参与自身免疫反应；IL-5可募集和活化嗜酸性粒细胞，增强炎症反应；IL-13则可调节巨噬细胞的功能，使其分泌更多的炎症介质。这些细胞因子的共同作用导致中枢神经系统的炎症和脱髓鞘病变加重。研究发现，在实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型中，给予外源性IL-33可显著增加Th2型细胞因子的分泌，加重神经炎症和脱髓鞘病变。这进一步证实了IL-33在促进Th2型免疫应答和炎症反应中的作用。IL-33还可调节肥大细胞的功能。肥大细胞是参与炎症反应的重要免疫细胞，IL-33可刺激肥大细胞释放多种炎症介质，如组胺、白三烯、前列腺素等。这些炎症介质可引起血管扩张、通透性增加、平滑肌收缩等生理反应，导致局部组织的炎症和水肿。在MS患者中，IL-33可能通过激活肥大细胞，使其释放炎症介质，进一步加剧中枢神经系统的炎症反应。研究表明，在MS患者的脑脊液和脑组织中，肥大细胞的数量和活性增加，且与IL-33的表达水平相关。这提示IL-33与肥大细胞之间可能存在相互作用，共同参与了MS的发病过程。此外，IL-33在调节Th1/Th2免疫应答平衡中也发挥着关键作用。在正常生理状态下，Th1和Th2细胞之间保持着动态平衡，共同维持机体的免疫稳定。然而，在MS患者中，这种平衡被打破，Th1/Th2比例失调。IL-33可通过促进Th2细胞的活化和增殖，抑制Th1细胞的功能，从而调节Th1/Th2免疫应答的平衡。研究发现，在EAE模型中，IL-33的表达上调可抑制Th1细胞的活性，减少Th1型细胞因子IFN-γ的分泌，同时促进Th2细胞的活化，增加Th2型细胞因子的产生，从而减轻EAE的症状。这表明IL-33在调节Th1/Th2免疫应答平衡中具有重要作用，其异常表达可能导致MS患者免疫失衡，促进疾病的发生和发展。5.1.2IL-33水平与MS病情严重程度的关系本研究通过Spearman秩相关分析发现，MS患者血清IL-33水平与扩展残疾状况评分量表（EDSS）评分呈显著正相关。这意味着血清IL-33水平越高，MS患者的神经功能缺损程度越严重，病情越严重。IL-33水平与MS病情严重程度的相关性可能与其在炎症反应和免疫调节中的作用密切相关。如前所述，IL-33可促进Th2型免疫应答，激活肥大细胞，释放炎症介质，导致中枢神经系统的炎症和脱髓鞘病变加重。随着炎症反应的加剧，神经组织的损伤也逐渐加重，从而导致神经功能缺损程度增加，EDSS评分升高。研究表明，在MS患者中，炎症活动程度与神经功能缺损程度密切相关，炎症活动越剧烈，神经功能缺损越严重。IL-33作为炎症反应的重要参与者，其水平的变化可反映炎症活动的程度，进而与MS病情严重程度相关。血清IL-33水平可能成为评估MS患者病情严重程度的潜在生物标志物。目前，MS的病情评估主要依赖于临床症状、影像学检查和EDSS评分等，但这些方法存在一定的局限性。临床症状的主观性较强，不同患者对症状的感知和描述可能存在差异；影像学检查虽然能够直观地显示脑部病变，但对于早期或微小病变的检测灵敏度有限；EDSS评分虽然是国际上广泛应用的MS病情评估工具，但需要专业医生进行详细的神经系统检查，操作相对繁琐。而血清IL-33水平的检测具有操作简便、快速、无创等优点，可作为一种辅助手段，与其他评估方法相结合，更准确地评估MS患者的病情严重程度。通过定期检测血清IL-33水平，医生可以及时了解患者的病情变化，调整治疗方案，提高治疗效果。例如，当患者血清IL-33水平升高时，提示病情可能加重，医生可加强免疫抑制治疗，以控制炎症反应，减轻神经损伤；反之，当血清IL-33水平降低时，说明病情可能得到缓解，医生可适当调整治疗药物的剂量或种类。5.2MS患者血清IL-35水平变化的意义5.2.1IL-35与MS发病机制的关联本研究结果显示，复发-缓解型多发性硬化（MS）患者血清中白细胞介素-35（IL-35）水平显著低于健康对照组，且在复发期IL-35水平进一步降低。这表明IL-35在MS的发病机制中可能扮演着重要的免疫抑制角色。IL-35作为IL-12超家族的成员，主要通过促进调节性T细胞（Tregs）的增殖和功能增强，发挥其免疫抑制作用。Tregs是一类具有免疫调节功能的T细胞亚群，能够抑制自身反应性T细胞的活化和增殖，维持机体的免疫平衡。在MS患者中，IL-35水平的降低可能导致Tregs的数量和功能减少，无法有效抑制自身免疫反应。研究表明，在实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型中，缺乏IL-35的小鼠EAE症状明显加重，而给予外源性IL-35则可减轻EAE症状。这进一步证实了IL-35在抑制自身免疫反应中的重要作用。IL-35还能抑制辅助性T细胞17（Th17）细胞的分化和功能。Th17细胞是一类分泌白细胞介素-17（IL-17）等细胞因子的T细胞亚群，在炎症反应和自身免疫性疾病中发挥重要作用。IL-35可通过抑制Th17细胞分化相关转录因子的表达，阻碍Th17细胞的分化。研究发现，在MS患者中，Th17细胞数量和活性增加，而IL-35水平降低，提示IL-35对Th17细胞的抑制作用减弱，可能导致炎症反应加剧。IL-35还能抑制Th17细胞分泌IL-17等促炎性细胞因子，从而减轻炎症反应。在炎症微环境中，IL-35可与Th17细胞表面的受体结合，阻断相关信号通路，抑制IL-17等细胞因子的产生。此外，IL-35还能抑制其他免疫细胞的活化和功能。它可以抑制巨噬细胞的活化，减少其分泌促炎性细胞因子如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）等。巨噬细胞是炎症反应中的重要细胞，活化的巨噬细胞可释放大量炎症介质，导致组织损伤。IL-35通过抑制巨噬细胞的活化，减少炎症介质的释放，从而减轻炎症反应。IL-35还能抑制自然杀伤细胞（NK细胞）的细胞毒性，调节B细胞的抗体产生等。在MS患者中，IL-35对这些免疫细胞的调节作用失衡，可能导致免疫系统功能紊乱，促进疾病的发生和发展。5.2.2IL-35水平与MS病情严重程度的关系本研究通过Spearman秩相关分析发现，MS患者血清IL-35水平与扩展残疾状况评分量表（EDSS）评分呈显著负相关。这意味着血清IL-35水平越高，MS患者的神经功能缺损程度越轻，病情相对越稳定。IL-35水平与MS病情严重程度的相关性可能与其免疫抑制作用密切相关。如前所述，IL-35可促进Tregs