2025年核酸考试的试题及答案

2025年核酸考试的试题及答案一、单项选择题（每题2分，共40分）1.新型冠状病毒核酸检测中，以下哪种样本的病毒载量通常最高？A.鼻咽拭子B.口咽拭子C.痰液D.粪便答案：A（鼻咽拭子因采集部位更接近病毒复制的上呼吸道黏膜，通常病毒载量高于口咽拭子；痰液和粪便虽可能检出，但载量较低。）2.荧光定量PCR检测中，Ct值（循环阈值）的定义是：A.荧光信号达到仪器本底噪音时的扩增循环数B.荧光信号达到设定阈值时的扩增循环数C.扩增结束时的总循环数D.荧光信号开始指数增长时的循环数答案：B（Ct值是荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数，是定量分析的关键指标。）3.核酸提取过程中，若使用磁珠法，以下哪一步骤的主要目的是去除蛋白质杂质？A.裂解B.结合C.洗涤D.洗脱答案：C（裂解步骤破坏细胞结构释放核酸；结合步骤使核酸与磁珠结合；洗涤步骤通过缓冲液去除蛋白质、盐类等杂质；洗脱步骤将核酸从磁珠上分离。）4.实验室进行核酸检测时，生物安全柜的使用需遵循“前窗操作口气流流速不低于”的要求，其标准值为：A.0.25m/sB.0.5m/sC.0.75m/sD.1.0m/s答案：B（根据《病原微生物实验室生物安全管理条例》，Ⅱ级生物安全柜前窗操作口气流流速应不低于0.5m/s，以确保有效防护。）5.以下哪种情况不会导致核酸检测出现假阴性？A.采样时未到达规定深度（如鼻咽拭子未触及咽后壁）B.样本保存时间过长（超过72小时未-70℃保存）C.扩增反应体系中Taq酶浓度过高D.引物与病毒变异区域不匹配答案：C（Taq酶浓度过高可能导致非特异性扩增（假阳性），而非假阴性；其他选项均可能因样本质量差、引物失效等导致假阴性。）6.核酸检测实验室分区中，“扩增产物分析区”的主要功能是：A.样本接收与处理B.核酸提取C.PCR反应体系配制D.PCR扩增后产物的检测答案：D（实验室分区遵循“单向流程”原则，依次为：样本处理区（样本接收、灭活、分装）→核酸提取区→扩增体系配制区→扩增区→扩增产物分析区（如荧光检测或电泳）。）7.新型冠状病毒核酸检测试剂的性能验证中，“临床灵敏度”主要评估的是：A.检测试剂对阴性样本的正确识别能力B.检测试剂对阳性样本的正确识别能力C.试剂在不同温度下的稳定性D.试剂对其他冠状病毒的交叉反应答案：B（临床灵敏度=真阳性数/(真阳性数+假阴性数)×100%，反映试剂检出阳性样本的能力；临床特异度反映检出阴性样本的能力。）8.采样人员穿戴防护装备时，最后佩戴的是：A.医用防护口罩（N95）B.护目镜/防护面屏C.一次性工作帽D.乳胶手套答案：B（正确穿戴顺序：工作帽→医用防护口罩→防护服→手套→护目镜/防护面屏；脱卸时则相反，先摘护目镜。）9.对于新冠病毒核酸检测的混采样本（10:1混采），若检测结果为阳性，应采取的处理措施是：A.直接报告混采管阳性，无需进一步检测B.对混采管中10份样本分别单独检测，确认阳性个体C.将混采管样本稀释后重新检测D.更换检测试剂品牌后重新检测答案：B（混采阳性需对原混采管中的所有单份样本进行单检，以确定具体阳性个体，避免漏诊或误判。）10.核酸提取仪日常维护中，以下哪项操作不符合要求？A.每日使用75%乙醇擦拭仪器表面B.每月检查磁珠吸附模块的机械灵敏度C.连续运行100次后未更换一次性吸头D.发现试剂残留时立即用去离子水清洁管路答案：C（一次性吸头需每批次更换，避免交叉污染；其他选项均为常规维护措施。）11.以下关于反转录PCR（RT-PCR）的描述，错误的是：A.需先将RNA反转录为cDNAB.反转录酶的最适温度通常为42℃左右C.可同时检测DNA和RNA病毒D.扩增产物为DNA片段答案：C（RT-PCR专门用于检测RNA病毒，需先通过反转录将RNA转为cDNA；DNA病毒检测无需反转录步骤。）12.实验室质量控制中，“弱阳性对照”的主要作用是：A.验证检测系统的最低检出能力B.确认试剂未被污染C.评估仪器的稳定性D.检测扩增抑制物的存在答案：A（弱阳性对照通常为接近检测限的低浓度阳性样本，用于验证检测系统能否准确检出低病毒载量样本；阴性对照用于确认无污染，内标用于检测抑制物。）13.采样过程中，若受检者出现刺激性咳嗽，采样人员应：A.立即停止采样并后退B.快速完成采样后更换防护面屏C.继续采样并要求受检者屏息D.佩戴双层口罩后继续操作答案：B（刺激性咳嗽可能导致气溶胶扩散，采样人员需快速完成操作，避免长时间暴露；若防护面屏被污染，需及时更换。）14.核酸检测实验室的“三区两缓”中，“两缓”指的是：A.样本缓冲间和试剂缓冲间B.清洁缓冲间和污染缓冲间C.一更缓冲间和二更缓冲间D.扩增前缓冲间和扩增后缓冲间答案：B（“三区”为清洁区、半污染区、污染区；“两缓”为清洁区与半污染区之间的缓冲间（清洁缓冲间）、半污染区与污染区之间的缓冲间（污染缓冲间），用于人员更衣和物品传递。）15.以下哪种消毒方式不适用于核酸检测实验室的空气消毒？A.紫外线照射（30分钟以上）B.过氧乙酸气溶胶喷雾（0.2%浓度）C.75%乙醇喷洒D.循环风紫外线空气消毒机（持续运行）答案：C（75%乙醇主要用于物体表面消毒，对空气消毒效果有限；紫外线、过氧乙酸气溶胶和循环风消毒机是空气消毒的常用方法。）16.新型冠状病毒的基因组结构中，编码RNA依赖的RNA聚合酶（RdRp）的基因位于：A.5’端ORF1ab区B.S蛋白基因区C.E蛋白基因区D.N蛋白基因区答案：A（新冠病毒基因组为单股正链RNA，5’端ORF1ab区编码非结构蛋白，包括RdRp；S、E、M、N基因分别编码刺突蛋白、包膜蛋白、膜蛋白和核衣壳蛋白。）17.核酸检测结果报告中，“未检出”的表述适用于：A.检测结果Ct值≥40且无扩增曲线B.检测结果Ct值在35-40之间且扩增曲线不典型C.检测结果Ct值<35且扩增曲线典型D.样本因溶血导致无法提取核酸答案：A（“未检出”指样本中未检测到目标核酸，需满足Ct值≥40且无明显扩增曲线；Ct值35-40需结合临床综合判断，可能提示低病毒载量或污染；样本无法提取需报告“检测失败”。）18.实验室发生样本泄漏（如离心管破裂）时，应首先：A.用吸水纸覆盖泄漏物，喷洒10%次氯酸钠（含氯消毒剂）B.立即打开实验室门窗通风C.更换被污染的防护手套D.记录泄漏事件并上报主管答案：A（样本泄漏时，需立即用含氯消毒剂（有效氯≥5000mg/L）覆盖污染区域，作用30分钟后清理，防止气溶胶扩散；通风和上报为后续步骤。）19.以下关于核酸检测试剂储存的要求，错误的是：A.引物探针混合液需-20℃避光保存B.Taq酶可在4℃短期（1周）保存C.裂解液可在室温（25℃以下）长期保存D.磁珠保存液需避免冻融（-4℃保存）答案：D（磁珠保存液通常含缓冲液和稳定剂，需4℃保存，冻融会破坏磁珠结构；其他选项均符合试剂储存规范。）20.核酸检测的“室内质控”不包括：A.阳性对照B.阴性对照C.内标（扩增控制）D.室间质评样本答案：D（室内质控是实验室日常检测中使用的内部质量控制措施（如阴阳对照、内标）；室间质评（EQA）是外部机构组织的质量评估，不属于室内质控。）二、多项选择题（每题3分，共30分。每题至少2个正确选项，多选、少选、错选均不得分）1.核酸采样过程中，需严格遵循的感染控制措施包括：A.每采1人更换1次手套B.采样人员与受检者保持1米以上距离C.采样完成后立即对采样区域物体表面消毒D.受检者采样前30分钟避免吸烟、饮酒答案：ABCD（所有选项均为采样感染控制的关键措施，其中“每采1人更换手套”可防止交叉污染，“1米距离”减少气溶胶传播风险。）2.荧光定量PCR检测中，出现“扩增曲线平台期不明显”的可能原因有：A.模板浓度过高B.引物浓度过低C.dNTP浓度不足D.扩增循环数不足（如仅设置35个循环）答案：BCD（模板浓度过高会导致平台期提前且信号过强；引物或dNTP不足会影响扩增效率，导致平台期不明显；循环数不足时反应未达到平台期。）3.核酸提取质量的评估指标包括：A.核酸浓度（OD260值）B.纯度（OD260/OD280比值）C.完整性（电泳条带亮度）D.扩增效率（通过内标Ct值偏差评估）答案：ABCD（浓度和纯度反映核酸的量与杂质残留；完整性通过电泳观察条带是否清晰；扩增效率通过内标或阳性对照的Ct值变化评估提取过程是否存在抑制物。）4.实验室生物安全防护的“三级屏障”包括：A.实验人员的个人防护装备（PPE）B.生物安全柜、高压灭菌器等安全设备C.实验室建筑结构（如气流方向、压差控制）D.应急预案与培训答案：ABC（一级屏障为PPE和安全设备，二级屏障为实验室设计，三级屏障为外部环境防护（如实验室选址、排风过滤）；应急预案属于管理措施，非物理屏障。）5.新型冠状病毒核酸检测的“假阳性”可能由以下哪些原因导致？A.扩增产物污染（气溶胶）B.样本间交叉污染（如加样时吸头未更换）C.引物与其他冠状病毒发生交叉反应D.样本保存液中存在PCR抑制物答案：ABC（抑制物会导致假阴性；污染（气溶胶、交叉污染）和引物交叉反应是假阳性的主要原因。）6.核酸检测实验室的“单向工作流程”要求包括：A.人员从清洁区→半污染区→污染区单向流动B.物品通过传递窗从污染区→半污染区→清洁区传递C.各区域仪器设备专用，不得交叉使用D.空气流向为污染区→半污染区→清洁区（负压梯度）答案：AC（物品应从清洁区→半污染区→污染区传递；空气流向应为清洁区→半污染区→污染区（正压到负压），避免污染扩散。）7.采样拭子的选择需符合以下哪些要求？A.头部材质为聚酯（涤纶）、尼龙等非棉纤维B.杆部为塑料或铝制，不可断裂C.棉拭子因吸附性好可优先使用D.拭子长度需满足采样深度（如鼻咽拭子≥10cm）答案：ABD（棉拭子含有的棉纤维可能抑制PCR反应，需避免使用；其他选项均为采样拭子的标准要求。）8.核酸检测结果的“复核”应包括：A.核对样本信息（姓名、编号、采样时间）B.检查扩增曲线是否符合判读标准C.确认质控品结果是否在允许范围内D.对阳性样本使用不同试剂或方法重复检测答案：ABCD（复核需全面检查样本信息、检测过程（质控）、结果判读，对阳性样本需通过重复检测确保准确性。）9.实验室废弃的核酸检测样本（如咽拭子、保存液）应：A.放入双层黄色医疗废物袋B.袋口采用鹅颈结式封口C.标注“感染性废物”D.与其他生活垃圾混合转运答案：ABC（医疗废物需专用包装、规范封口并标注类别，禁止与生活垃圾混合；转运需由有资质的医疗废物处理机构执行。）10.以下关于“Ct值与病毒载量”的关系，正确的描述有：A.Ct值越小，病毒载量越高B.Ct值与病毒载量呈对数负相关C.Ct值30对应的病毒载量约为Ct值20的1024倍（假设扩增效率100%）D.Ct值超过40时，通常认为病毒载量低于检测限答案：ABD（Ct值每增加1，病毒载量约减少1倍（扩增效率100%时）；Ct值20比Ct值30的病毒载量高210=1024倍，因此C选项描述相反。）三、判断题（每题1分，共10分。正确填“√”，错误填“×”）1.核酸检测实验室可使用普通冰箱（非医用冰箱）储存试剂。（×）（需使用专用医用冰箱，确保温度稳定并避免交叉污染。）2.采样时，若受检者为儿童，可将鼻咽拭子改为口咽拭子以减少不适。（×）（儿童采样应严格按照规范选择采样部位，口咽拭子阳性率可能低于鼻咽拭子，不可随意更改。）3.荧光定量PCR仪的光学系统需定期校准，以确保不同通道荧光信号的准确性。（√）4.核酸提取过程中，离心步骤的主要目的是沉淀磁珠，与核酸结合无关。（×）（磁珠法提取中，离心或磁力架吸附用于分离磁珠-核酸复合物与废液，是结合后的关键步骤。）5.实验室检测中，若阳性对照未出现扩增曲线，可继续报告其他样本结果。（×）（阳性对照无扩增提示检测系统失效，所有样本结果无效，需重新检测。）6.新冠病毒核酸检测的“窗口期”是指感染后至能够被检测到的时间间隔，通常为1-3天。（√）7.采样人员脱卸防护装备时，可直接用手接触防护口罩的外表面。（×）（脱卸时需避免接触防护装备外表面（污染面），应通过内表面（清洁面）操作。）8.核酸检测试剂的“批间差”是指同一批次试剂在不同时间检测结果的差异。（×）（批间差指不同批次试剂之间的检测结果差异；批内差指同一批次试剂重复检测的差异。）9.实验室发生火灾时，若火势较小，可使用二氧化碳灭火器扑灭核酸提取仪的电气火灾。（√）10.核酸检测报告中，“阳性”结果需注明检测方法（如荧光PCR）和检测试剂名称。（√）四、简答题（每题5分，共20分）1.简述核酸检测实验室“分区管理”的核心目的及各区域的主要功能。答案：核心目的是通过物理分隔避免交叉污染，确保检测结果准确性。各区域功能：（1）样本处理区：完成样本接收、灭活、分装，避免样本间交叉污染；（2）核酸提取区：进行核酸提取与纯化，需严格控制环境核酸污染；（3）扩增体系配制区：配制PCR反应体系（不含模板），使用专用试剂和耗材；（4）扩增区：进行PCR扩增反应；（5）扩增产物分析区：检测扩增产物（如读取荧光信号），该区域为污染风险最高区，严禁反向传递物品。2.列举5种核酸检测中常见的质量控制措施，并说明其作用。答案：（1）阳性对照：验证检测系统的有效性（确保能检出阳性样本）；（2）阴性对照：确认无环境或试剂污染（避免假阳性）；（3）内标（扩增控制）：检测样本中是否存在PCR抑制物（避免假阴性）；（4）弱阳性对照：评估检测系统的最低检出能力（验证灵敏度）；（5）重复检测：对阳性或临界值样本重复检测，确认结果可靠性。3.采样过程中，如何避免“样本采集不规范”导致的假阴性？答案：（1）严格遵循采样深度：鼻咽拭子需到达咽后壁（约鼻腔至耳屏的距离），口咽拭子需擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁；（2）控制采样时间：避免受检者采样前30分钟内饮水、进食、吸烟（减少分泌物稀释病毒）；（3）规范拭子旋转：拭子接触采样部位后需旋转3-5次，确保充分吸附样本；（4）样本保存：及时放入含病毒保存液的采样管，避免干燥；（5）采样后立即送检：2-8℃保存不超过48小时，-20℃以下可保存7天，长期保存需-70℃。4.实验室发现“样本扩增曲线呈S型但Ct值>40”时，应如何处理？答案：（1）首先确认质控品结果是否正常（如阳性对照Ct值在预期范围，阴性对照无扩增）；（2）检查样本信息是否与检测记录一致（排除样本混淆）；（3）若质控正常，考虑样本病毒载量极低（可能处于感染早期或恢复期），需结合临床症状、流行病学史综合判断；（4）建议重新采样检测（使用同一部位或更敏感的样本类型，如痰液）；（5）报告中注明“检测结果Ct值>40，建议结合临床综合评估”，避免直接判定为“阴性”或“阳性”。五、案例分析题（共20分）某实验室在进行新冠病毒核酸检测时，出现以下情况：（1）当天检测的50份样本中，有8份样本的扩增曲线呈现“拖尾现象”（曲线斜率低，平台期不明显）；（2）同时，阴性对照（无模板水）的扩增曲线出现Ct值38的微弱信号；（3）阳性对照的Ct值为25（预期范围22-28），结果正常。请分析可能的原因，并提出处理措施。答案：原因分