2024年动物疫病防治员三级复习题及答案

2024年动物疫病防治员三级复习题及答案一、病原学基础与实验室诊断技术1.【单选】下列哪种染色方法最适合在显微镜下快速鉴别布鲁氏菌与马耳他布鲁氏菌？A.革兰氏染色 B.抗酸染色 C.柯氏染色 D.姬姆萨染色答案：C 解析：柯氏染色可将布鲁氏菌染成红色，背景呈蓝色，马耳他布鲁氏菌因菌体较小且着色浅，易与光滑型布鲁氏菌区分。2.【单选】在口蹄疫病毒RTPCR检测中，若5′UTR引物对扩增失败，而3D聚合酶基因引物对扩增成功，最可能的解释是：A.样本RNA降解 B.引物二聚体干扰 C.病毒为新型O/MESA拓扑型 D.抑制物残留答案：C 解析：5′UTR区高度变异，新型拓扑型可出现引物错配；3D区保守，仍能扩增。3.【单选】对非洲猪瘟病毒（ASFV）实时荧光PCR，下列哪种内参基因可有效监控猪源DNA提取质量？A.βactin B.18SrRNA C.RPL32 D.GAPDH答案：A 解析：βactin单拷贝且稳定，可排除猪血细胞裂解不全造成的假阴性。4.【单选】采用鸡胚尿囊腔接种分离新城疫病毒时，死亡鸡胚的尿囊液能凝集1%鸡红细胞，但56℃30min处理后失去凝集活性，说明：A.含NDV B.含AIV C.含腺病毒 D.含呼肠孤病毒答案：A 解析：NDV血凝素对热敏感，AIV血凝素耐热，可据此初筛。5.【单选】在奶牛结核菌素试验中，若注射后72h皮褶增厚差值为3.8mm，无热痛，但IFNγ释放试验阳性，应判定为：A.阴性 B.可疑 C.阳性 D.需重做皮试答案：C 解析：OIE标准：皮试≥4mm为阳性；<4mm但IFNγ阳性仍判阳性。6.【单选】对猪圆环病毒3型（PCV3）进行原位杂交时，最佳固定液为：A.4%多聚甲醛 B.10%中性福尔马林 C.Bouin液 D.95%乙醇答案：B 解析：中性福尔马林对组织形态与RNA保存兼顾最佳，可减少非特异背景。7.【单选】用ELISA检测小反刍兽疫（PPR）抗体，若样本OD值为阴性对照均值2.1倍，但阻断ELISA抑制率仅35%，应：A.判阳性 B.判阴性 C.重做阻断ELISA D.用中和试验确认答案：D 解析：OD法易出现非特异，抑制率<40%视为阴性，需中和试验仲裁。8.【单选】对鸭瘟病毒（DPV）进行噬斑纯化时，维持液中加入1%低熔点琼脂糖的主要目的是：A.提供营养 B.限制病毒扩散形成独立噬斑 C.中和抗体 D.稳定pH答案：B 解析：琼脂糖凝固后形成微环境，使子代病毒局部感染，形成可见噬斑。9.【单选】在牛病毒性腹泻病毒（BVDV）分离中，用MDBK细胞出现明显CPE，但免疫荧光检测NS3蛋白阴性，最可能污染了：A.牛副流感病毒3型 B.牛肠道病毒 C.牛腺病毒 D.牛疱疹病毒1型答案：A 解析：BPIV3在MDBK上CPE类似BVDV，但NS3蛋白为黄病毒科特有。10.【单选】对羊痘病毒（SPPV）进行透射电镜负染，病毒颗粒表面可见：A.囊膜刺突呈“纽扣”样 B.二十面体壳粒 C.螺旋对称核衣壳 D.管状脂蛋白突起答案：A 解析：羊痘病毒为痘病毒科，表面有随机排列的管索样结构，形似纽扣。11.【多选】下列哪些方法可用于区分猪瘟病毒（CSFV）野毒与兔化弱毒疫苗株？A.E2糖蛋白单抗阻断ELISA B.5′UTR荧光探针熔解曲线 C.Erns基因高分辨率熔解 D.病毒分离后动物回归试验答案：A、B、C、D 解析：疫苗株E2表位缺失、5′UTR及Erns存在特征性碱基突变；动物回归可观察热型差异。12.【多选】关于禽白血病病毒（ALV）实时荧光定量PCR，下列描述正确的是：A.引物位于3′UTR可覆盖所有亚群 B.可用SYBRGreen法 C.需建立标准质粒梯度 D.需使用FAM标记的LNA探针提高特异性答案：A、B、C、D 解析：3′UTR保守；SYBR法成本低；标准曲线定量；LNA探针可减少引物二聚体干扰。13.【多选】在猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）RTPCR中，出现非特异条带的原因包括：A.Mg2+浓度过高 B.退火温度过低 C.引物3′端互补 D.模板量过高答案：A、B、C、D 解析：均会导致非特异扩增，需优化体系。14.【多选】对牛结节性皮肤病病毒（LSDV）进行全基因组测序，下列哪些平台可获得完整末端反向重复序列？A.IlluminaNovaSeq B.OxfordNanopore C.PacBioSequelII D.MGIDNBSEQ答案：B、C 解析：长读长可覆盖末端重复，短读长需拼接易缺失。15.【多选】在兽医实验室生物安全中，关于ASFV操作，正确的是：A.生物安全三级实验室 B.离心使用密封杯 C.废弃物需121℃30min高压 D.工作人员需接种痘苗免疫答案：A、B、C 解析：ASFV为二类动物病原，需BSL3；无疫苗，故不接种。16.【判断】猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）欧洲型与北美型在Nsp2区均有高变区，但欧洲型缺失111+1个氨基酸。答案：正确 解析：欧洲型Lelystad株Nsp2缺失111+1，北美型VR2332无此缺失。17.【判断】用鸡胚致死量（ELD50）测定H5N1高致病性禽流感病毒时，若ReedMuench法计算值为10–7.5/0.1mL，则每毫升病毒含量为10–8.5ELD50。答案：错误 解析：0.1mL含10–7.5，1mL含10–8.5ELD50，表述正确，但题干将“每毫升”写为“每0.1毫升”导致逻辑颠倒，故判错误。18.【判断】牛乳中若检出金黄色葡萄球菌enterotoxinA，可用Vero细胞进行细胞毒性试验确认。答案：错误 解析：肠毒素为超抗原，需用猫肾细胞或ELISA检测，Vero细胞不敏感。19.【判断】对犬瘟热病毒（CDV）进行血凝试验时，需用1%狗红细胞且4℃环境。答案：错误 解析：CDV无血凝活性，需用猴红细胞做血吸附试验。20.【判断】在布鲁氏菌AMOSPCR中，若扩增出731bp条带，可判定为羊种布鲁氏菌3型。答案：正确 解析：AMOS引物对B.melitensis3型特异片段为731bp。21.【填空】在禽网状内皮组织增生症病毒（REV）前病毒整合检测中，常用__________基因作为整合位点筛查靶标。答案：env 解析：REVenv基因保守，整合后稳定存在。22.【填空】对猪传染性胸膜肺炎放线杆菌（APP）进行ApxIVELISA抗体检测，若血清稀释__________倍仍呈阳性，可提示野毒感染。答案：1:800 解析：疫苗株不表达ApxIV，高稀释度阳性提示野毒。23.【填空】用RTqPCR检测新城疫病毒，若Ct值>35且熔解曲线主峰Tm=(80.2±0.5)℃，需进行__________试验确认。答案：测序 解析：Tm偏移可能为引物二聚体或突变，需测序验证。24.【填空】对兔出血症病毒（RHDV）进行VP60基因系统进化分析，常用__________软件构建ML树。答案：MEGAX 解析：MEGAX支持最大似然法，适合VP60高变区。25.【填空】在牛支原体（Mycoplasmabovis）分离培养时，培养基需添加__________以抑制杂菌。答案：林可霉素（50μg/mL） 解析：林可霉素抑制革兰氏阳性菌，不影响支原体。26.【简答】简述鉴别诊断牛病毒性腹泻病毒（BVDV）持续感染（PI）牛与一过性感染牛的实验室策略。答案：采集耳组织或全血，用免疫组化或抗原ELISA检测病毒抗原；PI牛全生命周期抗原阳性；一过性感染牛在抗体阳转后抗原转阴；辅以病毒分离与RTPCR，PI牛病毒载量高且序列一致；对6月龄以下犊牛需间隔3周重复检测，避免母源抗体干扰。27.【简答】说明禽腺病毒4型（FAdV4）引起禽心包积液综合征的致病机制及实验室确诊流程。答案：FAdV4通过粪口途径感染，hexon蛋白与肝细胞受体结合，诱导凋亡及炎症因子风暴，导致右心衰竭与心包积液；确诊：无菌采集肝脏，PCR检测hexon基因；病毒分离用LMH细胞，观察CPE；免疫荧光检测Fiber2蛋白；病理切片HE染色可见嗜碱性包涵体；测序鉴定血清型。28.【案例分析】某猪场2周龄仔猪突发呕吐、水样腹泻，死亡率30%。RTPCR检测PED/MEV/TGEV均阴性，但测序发现与猪急性腹泻综合征冠状病毒（SADSCoV）同源性99%。请给出防控方案。答案：立即封锁产房，全群口服初乳+电解质；环境升温至30℃，降低湿度；对母猪返饲发病仔猪肠道内容物，诱导局部IgA；对7日龄以上仔猪紧急接种自研灭活疫苗；对运输车辆用2%戊二醛消毒；全场实行McREBEL管理，断奶后严格全进全出；对下周待产母猪肌注干扰素λ，降低垂直传播；建立哨兵猪，连续3周肛拭子RTPCR阴性方可解除封锁。29.【案例分析】某蛋鸡场产蛋率骤降20%，蛋壳变薄，肝脾肿大。PCR检出禽白血病病毒J亚群（ALVJ），env基因出现A143V突变。请设计净化程序。答案：对全群采血，用ALVJgp85ELISA筛查，阳性鸡淘汰；对留种鸡苗出壳第1天采胎粪，用ALV群特异p27抗原ELISA，阳性者淘汰；对阴性鸡隔离饲养，每周肛拭子检测，连续3次阴性进入核心群；对公鸡采精液，用ALVJRTPCR检测，阳性淘汰；对孵化厅彻底消毒，种蛋45℃14h热处理；建立无ALVJ祖代场，配套使用ALVJ亚单位疫苗，但仅用于阴性场生物安全屏障维护，不作免疫替代。30.【案例分析】某奶牛场出现关节肿胀、发热，关节液PCR检出牛支原体（M.bovis），gyrA基因检出S83F突变。请给出用药与生物安全方案。答