临床检验操作规程详细汇编

临床检验操作规程详细汇编引言临床检验操作规程是保障检验结果准确性、实验操作安全性及临床诊疗可靠性的核心依据。本汇编整合临床检验各环节的标准化操作流程，涵盖标本采集、检验项目操作、质量控制、安全防护等内容，旨在为检验人员提供实用、严谨的操作指引，助力提升检验质量与效率。第一章标本采集与处理1.1血液标本采集1.1.1静脉血采集患者准备：空腹项目（如生化、血脂）需空腹8-12小时，采血前静坐15分钟，避免剧烈运动、吸烟、情绪激动。器材准备：一次性真空采血管（含对应抗凝剂或促凝剂）、采血针、消毒棉球、止血带。操作步骤：1.选择肘前静脉，扎止血带，消毒皮肤（直径≥5cm），待干。2.持采血针穿刺，见回血后固定，按采血管标注顺序采血（无添加剂管→凝血管→抗凝管）。3.采血完毕，松止血带，拔针，嘱患者按压穿刺点5-10分钟。4.抗凝管立即轻轻颠倒混匀（EDTA管颠倒8-10次，枸橼酸钠管颠倒3-5次）。抗凝剂选择：血常规：EDTA-K₂（1.5-2.2mg/ml血液）。生化/血气：肝素锂（10-30IU/ml血液）。凝血功能：枸橼酸钠（9:1比例，即9ml血液+1ml抗凝剂）。1.1.2动脉血采集适应症：血气分析、乳酸检测等。器材准备：动脉采血针（含肝素抗凝剂）、消毒棉球、橡皮塞。操作步骤：1.选择桡动脉（首选）或股动脉，消毒皮肤及操作者手指。2.穿刺针与皮肤呈45°（桡动脉）或90°（股动脉）进针，见回血后固定，采集1-2ml血液。3.拔针后立即用橡皮塞封闭针头，排出气泡，颠倒混匀，冰浴送检（30分钟内检测）。1.1.3末梢血采集适用情况：婴幼儿、少量血检测（如血糖、血常规筛查）。器材准备：一次性采血针、微量采血管、消毒棉球。操作步骤：1.选择无名指或中指指尖，75%酒精消毒，待干。2.采血针刺破皮肤（深度2-3mm），弃去第一滴血（含组织液），轻轻挤压指腹，采集足量血液。3.采血后用消毒棉球压迫止血，避免过度挤压（防止溶血、组织液混入）。1.2尿液标本采集1.2.1常规尿液标本采集容器：清洁、干燥、带盖的一次性尿杯。留取方法：晨起第一次尿（浓缩、成分稳定）或随机尿，女性清洁外阴、男性清洁尿道口后，留取中段尿（避免污染）。送检时限：采集后2小时内送检，若无法及时送检，4℃冷藏（≤6小时）。1.2.224小时尿液标本容器要求：带刻度的清洁容器（容量≥3000ml），加防腐剂（如甲醛用于有形成分，甲苯用于生化检测）。留取方法：晨7:00排空膀胱，弃去尿液；此后至次日晨7:00的所有尿液均收集于容器中，记录总尿量，取混匀后的20-30ml送检。1.3体液标本采集1.3.1脑脊液采集（腰椎穿刺法）器材准备：腰椎穿刺包、消毒用品、局麻药物。操作步骤：1.患者侧卧，背部与床面垂直，屈髋屈膝。2.选择L3-L4或L4-L5间隙，消毒、局麻后穿刺，见脑脊液流出后，依次留取3管标本（第1管查细菌，第2管查生化/免疫，第3管查常规/细胞学），每管1-2ml。3.拔针后局部按压，嘱患者去枕平卧4-6小时。1.3.2胸腹水采集穿刺点选择：胸水选腋中线第6-8肋间，腹水选脐与髂前上棘连线中外1/3处。操作步骤：消毒、局麻后穿刺，采集5-10ml标本，分装于抗凝管（查常规）、干燥管（查生化）、无菌管（查细菌/细胞学），立即送检。1.4标本处理与保存离心处理：血清分离：无抗凝管静置30分钟后，3000rpm离心10分钟。尿液沉渣：400rpm离心5分钟，留取沉渣镜检。保存条件：短期（≤24小时）：4℃冷藏，避免反复冻融。长期（≥1周）：-20℃或-80℃冻存，标注姓名、标本类型、日期。第二章常用检验项目操作规程2.1血常规检验（全自动血细胞分析仪）2.1.1仪器准备开机预热30分钟，检查溶血剂、稀释液、质控品有效期，装载试剂。每日开机后先做质控（使用配套质控品），确保结果在控（变异系数CV＜3%）。2.1.2标本检测充分混匀抗凝全血（避免凝集），上机加载标本，设置“全血”模式，启动检测。结果审核：异常结果（如白细胞＞20×10⁹/L、血小板＜50×10⁹/L）需推片镜检，结合血涂片形态学结果判断。2.2生化检验（全自动生化分析仪）2.2.1试剂与校准检查试剂批号、有效期，复溶冻干试剂（如需要），装载试剂盘。每月或更换试剂后，使用校准品进行仪器校准，记录校准因子。2.2.2标本检测血清/血浆分离后，避免溶血、脂血（可离心去除脂类）、黄疸（需注明，必要时稀释）。上机检测前，先做室内质控（Levey-Jennings图监控），质控在控后检测标本，条码扫描或手动输入标本信息，启动检测。2.3凝血功能检验（凝血分析仪）2.3.1标本要求枸橼酸钠抗凝（9:1），采集后立即颠倒混匀，2小时内检测，避免剧烈震荡（防止血小板激活）。2.3.2仪器操作开机自检，装载凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）等试剂，做质控（靶值偏差＜10%）。标本离心（3000rpm10分钟）后上机，检测完毕审核结果（如INR异常需结合抗凝治疗史）。2.4免疫学检验（ELISA法，以乙肝表面抗原为例）2.4.1试剂准备抗体包被板、酶结合物、底物（TMB）、洗涤液（0.05%Tween-20的PBS）平衡至室温。2.4.2操作步骤1.加样：设空白孔、标准孔、质控孔、标本孔，分别加样50μl（标准品、质控品、标本）。2.温育：37℃孵育30分钟，弃液，拍干。3.洗涤：加洗涤液300μl/孔，静置30秒，弃液，拍干，重复5次。4.加酶结合物：每孔加50μl，37℃孵育30分钟，弃液，拍干，洗涤5次。5.显色：每孔加底物50μl，37℃避光孵育15分钟。6.终止：每孔加终止液50μl，酶标仪450nm（参考630nm）比色。2.4.3结果判定计算标准曲线（吸光度与浓度呈线性），质控品吸光度在靶值±20%范围内，标本结果＞临界值（CO）判为阳性，否则阴性。第三章质量控制与标准化操作3.1室内质量控制3.1.1质控品管理选择与检测系统匹配的质控品（如水平1、水平2），-20℃冻存，复融后充分混匀，避免反复冻融。3.1.2质控实施每日检测前做质控，批量检测中每20个标本插入1次质控，记录结果于Levey-Jennings图。失控处理：1次结果＞±3s或连续2次＞±2s，立即停止检测，查找原因（试剂失效、仪器故障、操作失误等）。纠正后重新检测质控品，直至在控，记录失控原因及处理措施。3.2室间质量评价参加国家/省级临检中心的质评计划，按要求检测质评标本（与常规标本同流程），上报结果。分析质评报告，对偏差项目（如生化项目偏差＞10%），从方法学、仪器、试剂等方面溯源改进。3.3仪器维护与校准3.3.1日常维护每日：清洁进样针、仪器表面，检查试剂余量，记录运行日志。每周：清洁光路、反应杯，校准加样器（用蒸馏水称重法）。每月：更换泵管、滤芯，检查电路连接，进行全面校准。3.3.2故障处理建立《仪器故障登记本》，记录故障现象（如报错代码、结果异常）、处理方法、维修时间。复杂故障及时联系厂家工程师，维修后验证性能（质控在控、校准通过）。第四章检验安全与生物防护4.1生物安全管理4.1.1实验室分区清洁区（试剂准备、办公）、半污染区（标本接收、处理）、污染区（检测、废弃物处理），分区操作，避免交叉污染。4.1.2标本防护标本转运使用防漏、防刺的生物安全袋，外贴“生物危害”标识，冷藏转运（如需要）。4.2职业暴露处理锐器伤：立即挤出伤口血液，流动水冲洗5分钟，碘伏消毒，报告科室，就医并追踪源标本（如HIV、HBV检测）。黏膜暴露：生理盐水冲洗眼部/口腔，报告并就医。气溶胶暴露：戴口罩，通风30分钟，必要时行呼吸道检查。4.3废弃物处理感染性废物：标本、耗材、一次性PPE，装入黄色医疗垃圾袋，高压灭菌（121℃30分钟）后交由医疗废物公司处理。化学废物：试剂废液（如强酸、有机溶剂），分类收集于耐酸碱容器，标注成分，交由专业机构处理。第五章特殊检验项目及应急操作5.1急诊检验项目操作开通急诊绿色通道，标本优先采集、检测（如血常规、生化电解质、心肌酶），30分钟内出结果。记录急诊标本信息（姓名、床号、采集时间、检测项目），结果审核后立即电话报告临床。5.2微生物应急检测（突发感染事件）5.2.1标本采集无菌操作采集感染部位标本（痰、脓液、血液），立即送检（2小时内），标注“急诊微生物”。5.2.2检测流程涂片镜检（革兰染色）：30分钟内报告初步结果（如“革兰阳性球菌，成对排列”）。快速培养（血培养仪）：24小时内报告阳性报警，48小时报告菌种及药敏结果（纸片扩散法或自动化药敏仪）。附录附录1常用试剂配制方法1.生理盐水（0.9%NaCl）称取9gNaCl，加蒸馏水至1000ml，搅拌溶解，121℃高压灭菌20分钟，4℃保存。2.EDTA-K₂抗凝液（10mg/ml）称取1gEDTA-K₂，加蒸馏水至100ml，过滤除菌（0.22μm滤膜），4℃保存。附录2常见检验项目参考区间（成人）项目参考区间-----------------------------------