2025年高职生物技术应用（基因扩增技术）试题及答案

2025年高职生物技术应用（基因扩增技术）试题及答案

（考试时间：90分钟满分100分）班级______姓名______第I卷（选择题，共40分）每题只有一个正确答案，请将正确答案填在括号内。(总共20题，每题2分，每题给出的选项中，只有一项是符合题目要求的)w1.基因扩增技术中常用的热稳定DNA聚合酶是（）A.Taq酶B.DNA连接酶C.限制性内切酶D.逆转录酶w2.基因扩增反应体系中，提供反应模板的是（）A.dNTPB.引物C.DNA模板D.Taq酶w3.基因扩增过程中，退火温度主要取决于（）A.引物长度B.模板浓度C.Taq酶活性D.dNTP浓度w4.以下哪种不是基因扩增技术常用的引物设计原则（）A.引物长度一般为15-30bpB.引物GC含量在40%-60%C.引物自身不能有互补序列D.引物与模板的同源性越高越好w5.在基因扩增实验中，dNTP的作用是（）A.提供能量B.作为反应的模板C.合成新的DNA链D.增强酶活性w6.基因扩增仪的核心部件是（）A.温度控制系统B.荧光检测系统C.反应体系D.显示屏幕w7.基因扩增技术可用于（）A.基因克隆B.蛋白质表达C.细胞培养D.酶活性测定w8.巢式PCR与普通PCR相比，其优点是（）A.特异性更高B.灵敏度更高C.操作更简单D.扩增片段更长w9.实时荧光定量PCR中，荧光信号的产生依赖于（）A.引物与模板的结合B.DNA链的延伸C.荧光染料或探针D.Taq酶的活性w10.基因扩增技术中，引物的作用是（）A.提供DNA合成的起始位点B.催化DNA合成反应C.降解模板DNAD.增强反应体系稳定性w11.以下关于基因扩增反应条件的说法，错误的是（）A.变性温度一般为94-98℃B.退火温度一般比引物Tm值低5-10℃C.延伸温度一般为72℃D.循环次数越多越好w12.基因扩增技术可用于检测（）A.基因突变B.蛋白质含量C.细胞凋亡D.代谢产物w13.多重PCR的特点是（）A.同时扩增多个靶基因B.扩增效率更高C.特异性更强D.对模板要求更低w14.在基因扩增实验中，污染的主要来源不包括（）A.实验环境B.实验试剂C.实验仪器D.实验人员的思想w15.逆转录PCR的模板是（）A.DNAB.RNAC.蛋白质D.多糖w16.基因扩增技术中，模板DNA的纯度要求是（）A.A260/A280在1.8-2.0之间B.A260/A280大于2.0C.A260/A280小于1.8D.无要求w17.实时荧光定量PCR的定量方法不包括（）A.绝对定量B.相对定量C.定性分析D.半定量分析w18.基因扩增技术在法医鉴定中的应用主要是（）A.个体识别B.疾病诊断C.药物研发D.环境监测w19.以下哪种基因扩增技术常用于病毒核酸检测（）A.普通PCRB.巢式PCRC.实时荧光定量PCRD.多重PCRw20.基因扩增技术中，反应体系的pH值一般维持在（）A.5.0-6.0B.6.0-7.0C.7.0-8.0D.8.0-9.0第II卷（非选择题，共60分）w21.（10分）简述基因扩增技术的基本原理。w22.（10分）请说明引物设计的要点。w23.（10分）分析实时荧光定量PCR的原理及应用。材料：在对某种疾病的基因检测中，研究人员采用基因扩增技术。首先提取患者细胞中的DNA作为模板，然后设计了一对特异性引物。在基因扩增仪中进行反应，反应过程包括变性、退火、延伸三个步骤循环多次。通过实时荧光定量PCR技术监测扩增过程中荧光信号的变化，以确定基因的表达水平。w24.（15分）根据上述材料，回答以下问题：（1）为什么要提取患者细胞中的DNA作为模板？（2）引物的特异性对实验结果有何影响？（3）实时荧光定量PCR如何确定基因的表达水平？w25.（15分）请阐述基因扩增技术在基因治疗中的潜在应用及面临的挑战。答案：w1.Aw2.Cw3.Aw4.Dw5.Cw6.Aw7.Aw8.Aw9.Cw10.Aw11.Dw12.Aw13.Aw14.Dw15.Bw16.Aw17.Cw18.Aw19.Cw20.Cw21.基因扩增技术基本原理是在模板DNA、引物、dNTP和热稳定DNA聚合酶等存在的条件下，经过变性、退火、延伸三个步骤的循环，使目的基因片段在体外大量扩增。变性是将模板DNA双链解开成为单链；退火是引物与单链模板互补结合；延伸是在DNA聚合酶作用下以dNTP为原料合成新链，如此反复循环，目的基因得以大量扩增。w22.引物设计要点：长度一般为15-30bp；GC含量在40%-60%；引物自身不能有互补序列以免形成发夹结构；引物之间不能有互补序列防止引物二聚体形成；引物与模板的同源性要适当，不能过高或过低，且3'端不能有多个连续相同碱基，5'端可进行修饰。w23.实时荧光定量PCR原理：在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光标记探针，随着PCR产物的增加，荧光信号强度与PCR产物量成正比，通过监测荧光信号变化实时测定PCR产物量。应用：可用于病原体核酸定量检测、基因表达定量分析、肿瘤微小残留病灶检测、药物疗效评估等。w24.（1）提取患者细胞中的DNA作为模板是因为疾病相关基因存在于细胞DNA中，通过扩增DNA才能获取足够量目的基因用于检测其是否异常、表达水平等情况。（2）引物特异性高可保证只扩增出目标基因片段，减少非特异性扩增干扰，使结果更准确可靠；若引物特异性差，会扩增出其他无关片段，影响对目标基因的分析判断。（3）实时荧光定量PCR通过监测扩增过程中荧光信号强度变化，根据标准曲线计算出模板DNA的初始量，从而确定基因的表达水平。w25.潜在应用：可扩增正常基