XX公司培养基模拟生产验证方案

培育基模拟生产验证

1概述:

对无菌灌装过程进行胰酪脓大豆肉汤培育基模拟灌装试脸，通过对其污染率的测试，来确认

预充式无菌灌装过程和各种规程防止微生物污染的水平能达到可接受的合格标准。

2目的与范围：

2.1无菌生产环境、人员消毒卫生状况与产品无菌保证的验证。

2.2用棉球擦拭的方法脸证设备设施清洁消毒效果。

2.3验证的试验过程中监测底塞、卡式瓶的无菌性，使之始终符合卡式瓶生产工艺要求。

2.4验证除菌过滤的牢靠性，保证生产出合格的中间体半成品。

2.5验证物料转移过程中物料的无菌性，使之满足卡式瓶生产工艺须要。

2.6模拟无菌灌装试验来考察灌装操作过程微生物的污染率不大于0.1%,进而证明灌装工艺

条件符合无菌灌装的工艺要求。

2.7通过轧盖密封后瓶内抽真空进行气密性测试，证明与轧盖相关的工艺条件符合卡式瓶生产

工艺要求。

3职责：

3.1相关生产人员必需依照本规程进行生产操作。

3.2生产部门负责人及QA负责指导与监查本文件的执行。

3.3文件的修定和定期审核应由生产部门负责人员和QA负责。

3.4全部参加本验证过程的生产人员都必需依照本方案进行生产操作。

3.5验证过程应严格依据规定的内容进行，若因特别缘由的确须要变更时，应填写验证方案变

更申请及批准书（附表1）,报脸证委员会批准。

4参考文献：

4.1Validationofasepticfillingforsolutiondrugproduct

4.2药品生产验证指南（2023版）

5设备及仪器：

序号设备或仪器名称运用数量用途

164kg磅杆1杆量体积

26kg、3kg天平1秤量培育基

3卡式瓶分装机、西林瓶分装机1分装培育基

4蒸汽灭菌柜1灭菌

5卡式瓶洗瓶机、西林瓶洗瓶机1洗瓶

6卡式瓶和西林瓶隧道灭菌机1消毒

7胶塞清洗机1烘干、消毒

850L搅拌桶2盛装培育基

9搅拌棒1搅拌

10配制罐11配制

11配制罐21配制

12套筒过滤器1过滤

13端动泵1泵液体

1420L不锈钢桶2容器

1530L不锈钢桶3容器

162L烧杯2容器

1710L不锈钢桶2容器

6物料

序号物料名称

1注射用水

2蒸馆水

3管制瓶、卡式瓶

4胶塞

5铝盖

6胰酪陈大豆肉汤

775%乙醇

7验证内容

7.1推断标准

产品无菌性的可信限：95%

产品允许污染的概率：警戒限为V0.05%,可信限为＞0.1%

7.2培育基配制、灭菌和过滤：

7.2,1按30g胰酪豚大豆培育基溶于1L蒸倍水的比例配制适量的培育基溶液，搅拌并加热溶

解或干脆量取70℃以上的蒸缁水，搅拌溶解后，，将盛放培育基的桶在蒸汽灭菌柜内121℃

灭菌15分钟，待灭菌后自然冷却

7.2.2配制用于验证分装生产线的无菌性的培育基溶液体积应满足灌装3000支以上的量（一

般灌装5000支左右）。

723冷却后用已灭菌的0.22um的套筒过滤器过滤于已灭菌的相应容量的不锈钢桶中。注：过

滤过程应遵守无菌操作。

7.3培育基无菌性试验：

将用于模拟灌装的胰酪大豆培育基另外用50ml试管配制4管（20ml/管），在1210c灭菌15分

钟，盖塞、封口后将其中2管在20〜25℃培育7天，另外2管在30〜35℃培育7天。7天内

若各试管中应无任何微生物生长，则推断合格。结果填于附表2

7.4培育基微生物生长性能试验：

将配制好的灭菌培育基分装于10支50ml试管中（20ml，管），在其中4支管内接种V100

CFU的枯草杆菌，和1支不接种枯草杆菌的TSB试管（空白比照）同时在30〜35℃下培育

1天,在另4支试管内接种V1OOCFU的白色念珠菌，和1支不接种白色念珠菌的TS

B试管（空白比照）同时在20〜25℃培育7天，培育过程中每天视察微生物生长状况，七天

内若50%以上接种的各试管的培育基应出现明显的所接种的微生物的生长，空白试脸无菌生

长，则推断合格。结果填于附表3。

7.5无菌灌装试验：

751无菌灌装所用的瓶和塞塞经灭菌处理后，进行模拟灌装、轧盖。每瓶和托盘都需标号，

每册上记录起始时间和结束时间O

整个过程应严格遵守相应的无菌灌装生产的标准操作规程。模拟灌装生产的全部样品先在

20〜25℃培育7天，再在30〜35℃下培育7天，一半倒置培育，一半正立培育。培育过程中

应每天视察微生物生长状况，若发觉污染应明确记录瓶号、瓶数。

7.5.2阴性比照：

灌装过程中随机抽取2瓶不进行设备灌装干脆手动加底塞、灌装培育基、封口，与试验样品

同条件培育作为阴性比照。0

753随意地取出8支灌有培育基的灌装瓶，向选择出来的4支瓶内逐个注入0.1ml的枯草杆菌

混悬液（每0.1ml中CFU少亍100个），在30〜35℃下培育7天，向选择出来的另4支瓶内

注入白色念珠菌混悬液（每0.1ml中CFU少于100个），在20〜25℃培育7天。假如在7天

内，50%以上接种卡式瓶的培育基里都出现繁殖现象，则判为合格。对瓶内的繁殖状况要进

行目检，对污染的卡式瓶要点清数量（如有污染菌的话）。污染了的卡式瓶必需细致检查是

否有瓶、寒、盖的损坏状况。

7.5.4试验结果评价

评价无菌模拟灌装试验结果的主要指标之一是微生物污染率，其计算方法如下：

污染率水平=［微生物生长的瓶数/（总分装瓶数-破损瓶数）］X100%

假如在14天的培育期内，其污染率大于0.1%,则应立刻停止生产，调查污染产生的缘由应

检查铝盖、底寒的密封状况，若有破损应记录并检查其破损缘由。缘由找到后立刻重复进行

无菌灌装模拟试验。垂梵模拟灌装试验连续进行3次，2次均符合要求才可以认为此灌装工

艺过程符合无菌灌装要求。

7.5.5灌装原始纪录作为附件，试验结果如附表4填写

7.6内包材的无菌试验

a）卡式瓶无菌试验：试验前取灭菌后灌装前2支作无菌检查，试验过程中每灌大约1000瓶时

在振料器上取2支作无菌检查，试脸结束后在振料器上取2支作无菌检查。

b）底塞无菌试脸：底塞灭菌卸料时取2支作无菌检查，试脸过程中每灌大约1000瓶时理塞盘

上取2支作无菌检查，试验结束后在理塞盘上取2支作无菌检查。

c）复合铝盖无菌试验：灭菌卸料时取2支作无菌检查，试验过程中每灌大约1000瓶时

在埋复合盖盘上取2支作无菌检查，试验结束后在理复合盖盘上取2支作无菌检查。

①推断标准：阴性

e）按附表5填写结果。

7.7人员：

7.7.1参加人员:

7.7.2人员培训：查阅操作人员个人培训档案，确认上岗操作人员已按培训支配进行基本生产

技术培训,并进行人员净化消毒效果的检查。

c）推断标准：①上岗操作人员已经接受了生产技术培训，②能按规程进行人员物料净化对设

备设施正确清洗消毒③能规范操作，削减人员对环境造成污染。

d）人员培讪确认结果按下表填写:__________________________________________________________

操作人员培训能否按规程进行人员物料能规范操作，削减人结论确认人/日期

状况净化对设备设施正确清洗员对环境造成污染

消毒

7.7.3人员无菌监测：人员更衣完毕用棉球擦拭法在手、前的处取样作无菌性试验°取样时间

分别在试验前、试验过程中、试验结束用棉球擦拭法各取样1次检查操作人员上述部位细菌

7.9物料转移

7.9.1检查方法：①工器具、洁服处理后的转移：衣服、不锈钢桶、玻璃容器用棉球擦拭法在

卸料、转移后取样作无菌检查。用灭菌的生理盐水润湿棉球，充分擦拭，棉球取样面积为25cm2/

个。然后棉球放入带有灭菌的生理盐水的三角瓶中，充分振摇，然后进行微生物培育。②灌

装前药液的无菌转移：将注射用水从配料桶周转到配制罐，此时从配制罐内取水样，无菌培

育。然后由无菌区周转到十万级再由十万级周转到卡式瓶的无菌区，此时从配制罐内取水样，

无菌培育。具体详见《培育基模拟生产验证报告》。③内包材的无菌转移：将灭菌后的底塞、

卡式瓶在卸料、转移后取样作无菌检验，底塞外包装作擦拭试脸。④灌装用物料的无菌转移：

输送药液所用硅胶管和灌装针头在卸料转移后取样作无菌检查。用0.9%无菌氯化钠溶液

100mL冲洗内壁，收集冲洗液，（注：用0.9%无菌氯化钠溶液100mL冲洗后的硅攻管和灌装

针头，试验结束后再用注射用水冲洗。）按无菌检查法中的薄膜过滤法检查。

792推断标准：各种物料在卸料后及转移后均应无菌。按附表8填写测试结果

8玻瓶的处理：已灌装培育基的玻瓶在验证结束后全部销毁。

9缺欠项及订正措施

9.1目的

建立缺欠项及实行的订正措施，使验证规范化、标准化和程序化。

9.2内容

9.2.1按附表9格式总结缺欠项及订正措施

922按附表10格式填写缺欠项订正报告

10验证结果评定与结论

验证小组依据验证状况对验证结果进行综合评审，做出验证结论，按附表11填写险证总结报

告，由验证委员会做出是否枇准的确定及负责发放验证证书（见附表12）o

a）验证试险是否有遗漏？

b）脸证明施过程中对脸证方案有无修改？修改缘由，依据以及是否经过批准？

c）验证记录是否完整？

d）验证试验结果是否符合标准要求？偏差及对偏差的说明是否合理？是否须要进一步补充

试验？

验证方案变更申请及批准书

附表1

验证方案名称：

方案编号：

验证方案预变更的项目：

变更的理由及依据:

修改后方案:

评估变更后对验证的影响：

□不会影响验证过程

□影响验证过程

□影响验证进度

起草人/日期：

部门经理/日期：

变更的审批：

□同意变更

□不同意变更

批准人/日期：

培育基无菌性试验结果

附表2

培育基瓶号培育日期培育温度（°C）视察结果视察日期视察人

1

2

3

4

推断标准应无任何微生物生长

结论

结论人/日期

培育基生物生长性能试验结果

附表3

试管培育温视察结果

类别

度（七）1234567

空白

枯草1

杆菌2

3

4

空白

白色1

念珠2

菌3

4

视察日期

视察人

空白试管应无菌生长，其它全部样品试管中均应有明显的

推断标准

微生物生长

结论

结论人/日期

灌装培育结果

附表4

培育基名称灌装日期灌装瓶数

视察日期/时培育温度视察结果

视察人

间(℃)阴性比照阳性比照灌装样品

推断标准：可信限在95%的要求下，合格限：污染率应V0.1%;警戒限：＞0.05%

计算公式：污染率=95%可信限的限制上限/模拟分装的瓶数X100%

结论:

绐论人/日期

试验过程监测记录表

附表5

第一其次结果

空白备注

取样位置j''J支判定

出瓶端的卡式瓶无菌试验（试验前）干脆培育法

出瓶端的卡式瓶无菌试验（试脸过程中）干脆培育法

出瓶端的卡式瓶无菌试验（试验后）干脆培育法

桶内底塞的无菌试验（卸料时）干脆培育法

理塞盘上底塞的无菌试验（试脸过程中）干脆培育法

理塞盘上底塞的无菌试验（试脸后）干脆培育法

桶内复合盖的无菌试脸（卸料时）干脆培育法

理盖盘上复合盖的无菌试验

干脆培育法

（试验过程中）

理盖盘上复合盖的无菌试验（试脸后）干脆培育法

检脸员/日期复核员/日期：

设备设施表面的微生物数量

附表6

序擦拭

擦拭位置测试时间推断标准备注

号结果

试验前CFUW5个

1灌装机灌装工位台面试脸过程中CFUW5个薄膜过滤法

试验后CFUW5个

2灌装机上的理塞盘试验后阴性干脆培育法

3灌装机底塞料斗试验后阴性干脆培育法

4灌装机复合盖料斗试脸后阴性干脆培育法

5灌装机加塞定位图试验后阴性干脆培育法

1出料托盘试脸后CFUW2个薄膜过滤法

8灌装机传送转盘试脸后CFUW2个薄膜过滤法

9灌装机加塞推杆试验•后阴性干脆培育法

10灌装机复合盖轨道试验后阴性干脆培育法

11灌装机复合盖钳紧试验后阴性干脆培育法

12出版振荡盘试验后阴性干脆培育法

14电子天平内表面试验前CFUW2个薄膜过滤法

试脸前阴性干脆培育法

15转移桶

试验后阴性干脆培育法

试验前CFUW5个

16灌装间墙面薄膜过滤法

试脸后CFUW5个

试验前CFUW7个

灌装间地面薄膜过滤法

17试验后CFUW7个

检险员/日期复核员/日期:

HVAC监测记录

附表7-1

试脸测试结果

房间名称测试时间结果判定

项目温度(℃)相对湿度

灌装间

温度

与相

对湿配制间

度

存料称量间

气闸与十万级

走廊的相对压差

空气

中灌装间与气间

相对之间的相对压差

压力

配制间与走廊

之间的相对压差

检验员/日期复核员/日期：

尘埃粒子检测

测试点测试结果判定

试验项目测试区域测试位置

数^0.5pmN5pm结果

层流罩下粒子灌装间百级层流罩内

计数配制间百级层流罩内

无菌生产区室灌装间层流罩外万级区

内粒子计数配制间层流罩外万级区

测试人/日期复核人/日期

HVAC监测记录

（空气沉降菌）

附表7-2

点判定测试人/复核人/

测试区域干净级别结果

数日期日期

万级2

灌装间（试脸前）

局部百级12

万级2

灌装间（试脸过程中）

局部百级12

万级2

配制间（试验前）

局部百级12

万级2

配制间（试验过程中）

局部百级12

存料间（试验前）万级2

存料间（试验过程中）万级2

更无菌外衣间（试验前）万级2

更无菌外衣间（试验过程中）万级2

物料转移无菌监测记录一

附表8・1

序号擦拭位置测试时间推断标准擦拭结果备注

装衣服外袋①卸料后阴性

转移后阴性

1

装衣服外袋②卸料后阴性

转移后阴性

汤桶①卸料后阴性

转移后阴性

2

汤桶②卸料后阴性

转移后阴性

玻璃容器①卸料后阴性

转移后阴性

3

玻璃容器②卸料后阴性

转移后阴性

底塞外包装①卸料后阴性

转移后阴性

4

底塞外包装②卸料后阴性

转移后阴性

复合盖外包装①卸料后阴性

转移后阴性

6

复合盖外包装②卸料后阴性

转移后阴性

将周转罐转到无菌

阴性

配制间后取水样

由结晶罐周转到周转罐

阴性

7内无菌水水样

推到无菌区灌装后取样阴性

取结晶帽内水样阴性

测试人/日期复核人/日期

物料转移无菌监测记录表二

附表8-2

序号样品名称取样时间细菌霉菌空白结果测试人/日期复核人/日期

判定

卸料后

1硅胶管

转移后

卸料后

2灌装针头

转移后

卸料后

3底塞

转移后

卸料后

4复合盖

转移后

缺欠项及订正措施报告

附表9

工艺名称

欠缺项目订正措施

总结人：日期：

批准人：日期：

欠缺项订正报告

附表10

欠缺项目订正结果

总结：

结论

总结人：日期

批准人：日期：

验证总结

附表11

工艺名称

评定项目评定结果

验证试验是否有遗漏？□是/□否

验证明施过程中对验证方案有无修□是/□否

改？

修改缘由，依据以及是否经过批缘由及依据：

准？

是否经批准：□是/□否

验证记录是否完整？□是/□否

验证试验结果是否符合标准要求？□是/□否

偏差及对偏差的说明是否合理？□是/□否

是否须要进一步补充试验？□是/□否

确定验证周期：验证周期为：

验证小组成员：

验证总结：

总结人：日期：

验证证书

附表12

工艺名称

验证报告审核结果

依据方案要求，该验证已经完成，经审核：

结果符合方案的要求，合格口

结果不符合方案的要求，不合格□

执行负责人：日期：

审核人：日期：

批准人：日期：

分装系统培育基分装验证记录:

1.0物料单:

序号物料名称规格厂家领料量领料人/时间

2.0设备:

序号品名状态检查人/时间

磅秤

天平

洗瓶机

分装机

灭菌隧道

蒸汽灭菌柜

配制罐

平板过滤器

套筒过滤器

3.0器具:

序号品名状态检查人/时间

1不锈钢桶

2搅拌棒

3烧杯

4。配料、灌装间的熏蒸消毒与监测：

熏蒸用的溶液：体积：

熏蒸前的室内温度：相对湿度：

起先时间：结束时间：

开万级空调时间：开百级时间：

操作人:时间：

复核人：时间：

注：熏蒸消毒结束后、在分装前至少要监测2天的静态环境，

在分装过程中要监测动态的环境。结果记录在制剂车间的环境监测表。

5.0水质监测：

确认纯化水检测是否合格□是口否

确认注射水检测是否合格□是□否

确认人：时间：

6。培育基的配制和准备：

6.1蒸储水的称量：

秤（天平）编号：_____________________________

水温℃（70℃以上）

注入蒸馆水的50L不锈钢桶总重为kg

-50L不锈钢桶皮重kg

=所加蒸窗本重kq

称量入：时间：

复核人：时间：

6.2培育基的称量：

秤（天平）编号：_______________________________

倒入培育基后2L烧杯总重为g,

-2L烧杯皮重g,

=—培—一净亚为Q。

称量入：时间：

复核人：时间：

6.3将所称量的培育基缓慢倒入搅拌桶中，同时搅拌，待完全溶解后，停止搅拌。

起先时间：结束时间：搅拌总时间：

操作人：时间：

6.4培育基溶液的灭菌：

将装有培育基溶液的搅拌桶放入蒸汽灭菌柜内，121"C蒸汽灭菌15分钟。待灭菌柜压

力下降至“零”时，取出该桶，使其在室温冷却。

操作人：时间：

复核人：时间：

6.5培育基的过滤：

6.5.10.22um滤器的起泡点测试（,50psi）：

高压灭菌前过滤后

压力通过测试人复核人压力通过测试人复核人

652培育基的过滤：

起先时间：,结束时间：

分装的桶编号分别为,O

注：整个过程应遵从无菌操作。

操作人：时间：

7.0玻瓶的处理：

7.1玻瓶描述:o

7.2检查操作起从前的场地、设备清洁及清场，确保上一批的全部玻璃瓶和记录都清走。

操作人：时间：

复核人：时间：

7.2.3：先瓶：

记录人/时间

上瓶总数

碎瓶总数

含水过高

其它

7.3取样：取5只洗净的瓶子并用已灭菌的容器感装行送QC化验°

项目结果检测人复核人

澄明度

内毒素

细菌限量

7.4洗瓶机/隧道:

7.4.1加工前设定隧道温度

设定的温度：_______________启动时间：___________________

达到设定的温度时间：一传送带速度：_______________

操作人：_________—时间：____________

复核人：—____时__间__：_____________

7.4.2记录加工的药瓶数：___________________（大约）

操作人：__________时间：____________

复核人：____时__间__：_____________

743取样：取5只洗净的瓶子并用已灭菌的容器盛装。送QC化验。

项目结果检测人复核人

澄明度

内毒素

细菌限量

备注：___________________________________________________________________________

在运行期间洗瓶机和隧道的任何异样现象均应记录在备注中。

8.0胶塞的处理：

8.1胶塞描述：o

8.2检查操作起从前的场地清洁及清场，确保上一批的全部瓶塞和记录都清走。

操作人：时间：

复核人：时间：

8.2.1特别留意事项：无

8.2.2胶塞：证明产品号和瓶塞符合原转料标准。

注：先加工最前的原辅料批号。

数量原辅料号记录人;日期复核人/日期

8.2.3胶塞的处理:

处理过程条件操作人/时间

蒸气灭菌

烘干

运输

9.0铝塑复合盖的处理：

9.1铝塑盖的描述：___________________________

9.2检查操作前的清场状况。

操作人：时间：

复核人：时间：

10.0培育基溶液的分装：

10.1灌装线安装前，以及产品原辅料或过滤器不论在任何时候进入灌装车间前，

灌装人员都应确保原捕料和过滤器与下列标准相符。

10.1.1药瓶：______________________________

证明人/时间：复核人/时间：

10.1.2瓶盖：_______________________________

证明人/时间：复核人/时间：

10.1.3确保灌装机上的胶塞、铝盖和传送带与药瓶尺寸相符。

操作人：______时间:

复核人：___________时间:

10.1.4灌装线清洁和清场的复检：

0合格0不合格

操作人：______时间:

复核人：___________时间:

10.1.5灌装体积复核:

(1)设备ID：_______________

(2)称ID：_______________

(3)硅码ID：______________

(4)起先灌装前设置灌装泵的灌装体积。