首医大临床生物化学实验课件02邻甲苯胺法测血糖

实验一

邻甲苯胺法测定血糖

及回收试验

葡萄糖决定性方法参考方法常规方法

ID-MS己糖激酶法G氧化酶法【目的要求】

1.掌握邻甲苯胺血糖测定法的基本原理、操作方法及回收实验的基本原理与做法。

2.熟悉邻甲苯胺血糖测定法的影响因素及控制方法。

3.了解邻甲苯胺血糖测定法的临床意义及应用。【实验原理】

血清样品中的葡萄糖在酸性环境中与邻甲苯胺共热时，葡萄糖脱水转化为5-羟甲基α-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺结合为蓝绿色的醛亚胺（Schiff硷）。血清中的蛋白质则溶解在冰醋酸和硼酸中不发生混浊。将标准葡萄糖溶液与样品按相同方法处理，在630nm波长处比色，即可测得样品中葡萄糖含量。邻甲苯胺法测得正常空腹血糖值为3.9～5.6mmol。回收试验试验的目的:

试验的方法:

将被测物标准液加入病人标本中，成为分析标本；原病人标本中加人等量的无被测物的溶剂作基础标本；然后用候选方法测定并得到各自浓度。检测候选方法的比例系统误差。回收:

指候选方法准确测定加入常规分析标本的纯分析物的能力。回收浓度=分析标本测得浓度-基础标本测得浓度（实际测得值）计算:加入浓度=标准液量病人样品量（ml）＋标准液量（ml）

×标准液浓度（理论真实值）回收率（%）=回收浓度加入浓度

×100（理想值为１００％）注意事项：吸量准确；总浓度必须在方法分析范围内；需加入高中低不同浓度回收试验，计算平均回收率；加入标准液的体积一般在10%内；重复2-3次。1.取干燥试管5支，分别标出号码，按下表添加试剂。加入物空白管标准管测定管基础管回收管蒸馏水0.1\\0.01\葡萄糖标准液\0.1\\0.01(高标）血清\\0.10.090.09邻甲苯胺试剂5.05.05.05.05.0基础样品：0.01ml蒸馏水+0.09ml血清回收样品：0.01ml高标液+0.09ml血清2.混匀各管内容物置沸水浴中加热15分钟后取出用流水冷却3分钟。3.以空白管校正零点，读取各管630nm处吸光度值。4.计算血糖（mmol/L)=（测定管吸光度/标准管吸光度）*5

回收浓度、加入浓度、回收率使用方法（以722为例）

该机的光谱范围在360nm-800nm。1、接通电源，打开机器开关，使仪器通电，打开箱盖，预热10分钟。2、调节测定所用波长，调节吸光度为∝或透光率为0。3、将空白液或对照液及测定液分别装入比色杯3/4体积并用软纸擦清外壁，放入样品室。4、盖上箱盖，光径开关自动打开。转动光量调节器使空白或对照管的吸光度为0，或透光率为100％，待读数指针稳定后，逐步拉出样品盒滑杆，通过读数指针，读取测定管上的吸光度。有时需调节灵敏度开关，才能正确读得吸光度。此时应重新转动零点调节器至吸光度为∝。

5、读数完毕，打开仪器盖板，关闭开关，将比色杯冲洗干净。

6、溶液定量测定时，应注意吸光度在0.1～1.0范围，浓度太大时应适当稀释。*注意事项：

1）用手拿比色杯的磨砂面。

2）液体的体积装满比色杯的3/4。

3）不要将比色杯放在分光光度计上。【注意事项】1.本法不需要除去蛋白质，邻甲苯胺试剂只与糖醛起反应，不与血中其他还原物质起反应。故测定值较Folin-吴宪法为低。2.显色反应与水的含量有关，故应使标准管和测定管的含水量一致。3.温度对显色反应有明显影响，煮沸时间和温度应准确控制。4.显色后颜色不稳定，室温每放置1分钟，颜色降低0.15％。5.邻甲苯胺试剂中冰醋酸