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文档简介

高铁-硫酸显色法测定血清总胆固醇

血清胆固醇(CHOL)测定方法种类繁多，化学方法大都用有机溶剂提取血清中的CHOL，用特殊试剂显色，然后比色测定。主要显色反应有Liebermann—Burchard(L-B)反应及高铁—硫酸反应等两类。这些方法须用腐蚀性的浓酸试剂，特异性差，干扰因素多，准确测定有赖于从血清中提取胆固醇，并对抽提液进行纯化。因此操作步骤多，不适于常规应用。

美国疾病控制中心(CDC)脂类测定标准化实验室所审定的ALBK(Abell-Levy-Brodie-Kendall)法，由于抽提液中基本上不存在L-B反应的干扰物，结果准确，为目前国际上通用的参考方法。此法虽然不很复杂，但也不易准确掌握。现在还有少数实验室应用L—B试剂直接显色法、邻苯二甲醛法等，准确性差，已在淘汰之列。

化学测定法通常需抽提纯化。显色剂主要有两类：①醋酸-醋酐-硫酸②高铁硫酸。

这些显色反应须用强酸试剂，干扰因素多，准确测定有赖于从标本中抽提、皂化、纯化过程，因而操作较繁，不适于分析大批量标本，且不适于自动分析。

特点：

1．Liberman-Burchard反应

1885年Liberman发现胆固醇在硫酸、醋酐溶液中显色，1890年Burchard用此反应测定胆固醇称为L-B反应。

1953年Zak提出用硫酸、醋酸和Fe3+等与胆固醇作用生成紫红色化合物来测定胆固醇，称为Zak反应。2．Zak反应【目的要求】1.掌握血浆胆固醇总量的测定方法，包括脂溶性物质的定量提取，使用易燃有机溶剂的注意事项及胆固醇的显色。2.熟悉测定原理及影响因素。3.了解血浆胆固醇总量的正常范围及临床意义。【实验原理】

用异丙醇沉淀血清蛋白质，提取上清液中的胆固醇，再用氧化铝吸附胆红素、磷脂、甘油等干扰物，离心后于上清液中加入高铁-硫酸试剂，反应产物显紫红色，其显色程度与TC成都成正比。【操作】1.提取纯化分别吸取血清和标准液200ul，加至带塞的离心管中，在向离心管底部加入异丙醇5ml，是蛋白质沉淀，然后加入氧化铝1g，与振荡器上混合10min，2000r/min离心10min.2.显色分别取上清液1ml,分别加入到测定管和标准管，空白管加异丙醇1ml,56度水浴5min，再沿管壁加入显色剂3ml，充分混匀，水浴保温25min,冷却至室温比色。3.比色在540nm处，以空白管调零，读取各管吸光度。【计算】血清TC=A测/A标*5.17mmol/L血清参考值3.0-5.2mmol/L【注意事项】1.抽提液与显色液混合时产生大量的热，影响显色反应。（1）在测定同一批标本是选用型号一致的试管，口径大的试管便于快速混合。（2）加入显色剂时，应使之与异丙醇分两层，然后迅速混合，是完全显色。（3）显色剂要逐管加入快速混合，不可成批加入。2.反应中所用试管和比色杯应清洁干燥。3.防止浓硫酸吸水影响

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