CN110755319A 大麻花叶发酵方法、大麻花叶发酵提取物和化妆品 （云南百叶集生物科技有限公司）

(10)申请公布号CN110755319A(21)申请号201911010552.X(71)申请人云南百叶集生物科技有限公司地址650000云南省昆明市经济开发区经开路3号昆明科技创新园C102-040号(72)发明人刘秀英(74)专利代理机构北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙)11463代理人罗硕A61K8/9789(2017.01)A61Q17/00(2006.01)(54)发明名称大麻花叶发酵方法、大麻花叶发酵提取物和化妆品(57)摘要本发明涉及发酵技术领域，具体而言，涉及大麻花叶发酵方法、大麻花叶发酵提取物和化妆品。本发明的大麻花叶发酵方法包括在大麻花叶浆液中添加发酵菌液进行发酵。本发明的大麻花叶发酵方法制备的大麻花叶发酵提取物可以用于制备化妆品。本发明的大麻花叶发酵方法通过发酵获取更多、更小的活性分子成分，以使制得21.一种大麻花叶发酵方法，其特征在于，包括：在大麻花叶浆液中添加发酵菌液进行发2.根据权利要求1所述的大麻花叶发酵方法，其特征在于，所述发酵菌液包括处于对数期的液体发酵菌液。3.根据权利要求1所述的大麻花叶发酵方法，其特征在于，所述发酵菌液的制备方法包括：将菌种接种于酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，在温度为25-32℃条件下培养。4.根据权利要求3所述的大麻花叶发酵方法，其特征在于，所述酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，按照重量份计，包括：酵母浸粉1.0-1.5%,蛋白胨2.2-2.5%,葡萄糖2.5-2.6%。5.根据权利要求1所述的大麻花叶发酵方法，其特征在于，所述发酵菌液包括：黄酒酵母发酵菌液、清酒酵母发酵菌液、果酒酵母发酵菌液、食醋酿造酵母发酵菌液、乳杆菌发酵菌液、双歧杆菌发酵菌液和乳球菌发酵菌液中的至少一种。6.根据权利要求1所述的大麻花叶发酵方法，其特征在于，所述大麻花叶浆液的制备方法包括：将重量比为1:6-10的未干燥的大麻花叶和水混合，打浆。7.根据权利要求1所述的大麻花叶发酵方法，其特征在于，所述大麻花叶浆液的pH为6-8.根据权利要求1所述的大麻花叶发酵方法，其特征在于，还包括：发酵后，在离心半径为8-10cm,转速为11000-13000r/min条件下，离心。9.一种大麻花叶发酵提取物，其特征在于，其是由权利要求1-8任一项所述的大麻花叶发酵方法制备的。10.一种化妆品，其特征在于，包括权利要求9所述的大麻花叶发酵提取物。3大麻花叶发酵方法、大麻花叶发酵提取物和化妆品技术领域[0001]本发明涉及发酵技术领域，具体而言，涉及大麻花叶发酵方法、大麻花叶发酵提取物和化妆品。背景技术[0002]工业大麻又称汉麻(hemp),是大麻科(Cannabinaceae)大麻属(Cannabis)1年生草[0003]相关技术提供的制备大麻花叶提取物的方法，难以充分发挥活性物质的抗菌效发明内容[0004]本发明的目的在于提供大麻花叶发酵方法、大麻花叶发酵提取物和化妆品，其能够通过发酵获取更多、更小的活性分子成分，以使制得的发酵提取物抗菌效果更佳，含有该发酵提取物的化妆品抗菌效果更佳。[0006]第一方面，本发明实施例提供一种大麻花叶发酵方法，包括：在大麻花叶浆液中添加发酵菌液进行发酵。[0007]在可选的实施方式中，发酵菌液包括处于对数期的液体发酵菌液。[0008]在可选的实施方式中，发酵菌液的制备方法包括：将菌种接种于酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，在温度为25-32℃条件下培养。[0009]在可选的实施方式中，酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，按照重量份计，包括：酵母浸粉1.0-1.5%,蛋白胨2.2-2.5%,葡萄糖2.5-2.6%。[0010]在可选的实施方式中，发酵菌液包括：黄酒酵母发酵菌液、清酒酵母发酵菌液、果酒酵母发酵菌液、食醋酿造酵母发酵菌液、乳杆菌发酵菌液、双歧杆菌发酵菌液和乳球菌发酵菌液中的至少一种。[0011]在可选的实施方式中，大麻花叶浆液的制备方法包括：将重量比为1:6-10的未干[0012]在可选的实施方式中，大麻花叶浆液的pH为6-8。[0013]在可选的实施方式中，还包括：发酵后，在离心半径为8-10cm,转速为11000-[0014]第二方面，本发明实施例提供一种大麻花叶发酵提取物，其是由前述实施方式任一项的大麻花叶发酵方法制备的。[0015]第三方面，本发明实施例提供一种化妆品，包括前述实施方式的大麻花叶发酵提[0016]本发明实施例的大麻花叶发酵方法的有益效果包括：本发明实施例提供的大麻花叶发酵方法，通过在大麻花叶浆液中添加发酵菌液进行发酵，能够充分的将大麻花叶中的4活性物质提取出来，特别是一些小分子成分；这样一来，通过发酵大麻花叶浆液能够得到抗菌效果更佳的发酵提取物。[0017]本发明实施例的大麻花叶发酵提取物的有益效果包括：本发明实施例提供的大麻花叶发酵提取物通过上述的发酵方法制备，其具有更佳的抗菌效果。[0018]本发明实施例的化妆品的有益效果包括：本发明实施例提供的化妆品包括上述的大麻花叶发酵提取物，其具有更佳的抗菌效果。具体实施方式[0019]为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产[0020]以下对本发明的大麻花叶发酵方法、大麻花叶发酵提取物和化妆品作进一步的详细描述。[0021]本发明提供的大麻花叶发酵方法包括：在大麻花叶浆液中添加发酵菌液进行发[0022]通过在大麻花叶浆液中添加发酵菌液进行发酵，可以促使大麻花叶中的活性物质充分的释放出来，特别是一些小分子成分；这样一来，通过发酵大麻花叶浆液能够得到抗菌效果更佳的发酵提取物。[0023]上述大麻花叶浆液的制备方法包括：将重量比为1:6-10的未干燥的大麻花叶和水混合，打浆。在打浆后，在110-125℃温度条件下高压灭菌15-20min;然后再将浆液的pH调节至6-8,即可完成大麻花叶浆液的制备。[0024]上述未干燥的大麻花叶可以是指：新鲜的大麻花叶；这样一来，叶制备浆液，能减少大麻花叶中萜烯类和大麻二酚等活性物质的损耗。[0025]本发明中灭菌大麻花叶浆液时，在高温下短时快速灭菌，能够进一步减少萜烯类和大麻二酚等活性物质的损耗。[0026]将大麻花叶浆液的pH调节至6-8,有助于后续添加于大麻花叶浆液中的菌类的生长和发酵过程顺利开展。[0027]本发明的发酵菌液的制备方法包括：将菌种接种于液态的酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，在温度为25-32℃条件下培养。[0029]当按照上述发酵方法进行的液态发酵达到对数期时，可以将该处于对数期的液体发酵菌液加入大麻花叶浆液中作为发酵菌液。采用处于对数期的液态发酵菌液进行大麻花叶浆液的发酵，一方面能够使菌体能够快速的在大麻花叶浆液中增殖，另一方面能够快速的开展发酵过程。[0030]需要说明的是，只要液态发酵中的菌种处于对数期均可以用于接种于大麻花叶浆液中作为发酵菌液，菌液中菌体的具体浓度不做限定，即各种浓度皆可。[0031]上述酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，按照重量份计，包括：酵母浸粉1.0-1.5%,蛋白胨2.2-2.5%,葡萄糖2.5-2.6%。5[0032]需要说明的是，上述酵母浸出粉胨葡萄糖培养基在配制后，可以采用常规手段进行灭菌处理。[0033]本发明中使用的发酵菌液包括：黄酒酵母发酵菌液、清酒酵母发酵菌液、果酒酵母发酵菌液、食醋酿造酵母发酵菌液、乳杆菌发酵菌液、双歧杆菌发酵菌液和乳球菌发酵菌液中的至少一种；即本发明中使用的菌种包括：黄酒酵母、清酒酵母、果酒酵母、食醋酿造酵[0034]需要说明的是，将菌种接种于液态酵母浸出粉胨葡萄糖培养基的方法和相关技术[0035]本发明的大麻花叶发酵方法中，大麻花叶浆液可以加入重量比为3倍量配置好的发酵菌液。[0036]发酵时，可以在摇床上控制温度为25-36℃,发酵的时间大致可以是20-65h。[0037]发酵完成后，可以在离心半径为8-10cm,转速为11000-13000r/min条件下，离心，收集到的上清液即为大麻花叶发酵提取物。[0038]本发明提供的大麻花叶发酵方法制备出的大麻花叶发酵提取物可以直接作为面膜或精华液或爽肤水的成品；将上述制备的大麻花叶发酵提取物直接作为化妆品可以在一定程度上节约生产成本，提高产品的质量，最大化的简化了生产步骤，能够实现大量生产、工业化生产，并能够充分保证产品质量的稳定性，而且这种天然物质作为化妆品还不容易给用户的皮肤造成负担。[0039]当将上述大麻花叶发酵提取物直接作为化妆品是，可以在10万级净化车间进行灌装后再经过灭菌处理，灭菌条件为：110-125℃,20-25min高压高温灭菌。[0040]本发明提供的化妆品不仅仅限制于上述的面膜、精华液或爽肤水，还可以用大麻花叶发酵提取物制备凝胶、膏剂等，在此不作具体限定。含有本发明提供的大麻花叶发酵提[0041]以下结合实施例对本发明的大麻花叶发酵方法、大麻花叶发酵提取物和化妆品作进一步的详细描述。[0043]制备液态酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，按照重量比计，包括：酵母浸粉1.0%,蛋白胨2.2%,葡萄糖2.5%。[0044]将黄酒酵母接种于灭菌后的液态酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，在25℃摇床中振荡培养，以对数期的发酵液作为后续发酵的发酵菌液。[0045]将新鲜的大麻花叶和水按照重量比为1:8制备成大麻花叶浆液，在110℃条件下灭[0046]加入大麻花叶浆液重量比为3倍量的发酵菌液，在温度为25℃摇床中发酵65h;将发酵好的发酵液在11000r/min转速，离心半径为10cm条件下离心21min,收集上清液，即可制得大麻花叶发酵提取物。[0047]将大麻花叶发酵提取物在10万级净化车间进行灌装后再经过灭菌处理，灭菌条件[0049]制备液态酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，按照重量比计，包括：酵母浸粉1.5%,蛋白6胨2.5%,葡萄糖2.6%。[0050]将清酒酵母和果酒酵母共同接种于灭菌后的液态酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，在32℃摇床中振荡培养，以对数期的发酵液作为后续发酵的发酵菌液。[0051]将新鲜的大麻花叶和水按照重量比为1:6制备成大麻花叶浆液，在125℃条件下灭菌15min,再调节pH值为8。[0052]加入大麻花叶浆液重量比为3倍量的发酵菌液，在温度为36℃摇床中发酵20h;将发酵好的发酵液在13000r/min转速，离心半径为8cm条件下离心19min,收集上清液，即可制得大麻花叶发酵提取物。[0053]将大麻花叶发酵提取物在10万级净化车间进行灌装后再经过灭菌处理，灭菌条件[0055]制备液态酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，按照重量比计，包括：酵母浸粉1.5%,蛋白胨2.4%,葡萄糖2.5%。[0056]将食醋酿造酵母和乳酸杆菌共同接种于灭菌后的液态酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，在30℃摇床中振荡培养，以对数期的发酵液作为后续发酵的发酵菌液。[0057]将新鲜的大麻花叶和水按照重量比为1:10制备成大麻花叶浆液，在120℃条件下灭菌18min,再调节pH值为7。[0058]加入大麻花叶浆液重量比为3倍量的发酵菌液，在温度为32℃摇床中发酵40h;将发酵好的发酵液在12000r/min转速，离心半径为9cm条件下离心20min,收集上清液，即可制得大麻花叶发酵提取物。[0059]将大麻花叶发酵提取物在10万级净化车间进行灌装后再经过灭菌处理，灭菌条件[0061]制备液态酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，按照重量比计，包括：酵母浸粉1.2%,蛋白胨2.2%,葡萄糖2.6%。[0062]将双歧杆菌和乳球菌共同接种于灭菌后的液态酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，在27℃摇床中振荡培养，以对数期的发酵液作为后续发酵的发酵菌液。[0063]将新鲜的大麻花叶和水按照重量比为1:9制备成大麻花叶浆液，在110℃条件下灭菌18min,再调节pH值为6。[0064]加入大麻花叶浆液重量比为3倍量的发酵菌液，在温度为32℃摇床中发酵35h;将发酵好的发酵液在12000r/min转速，离心半径为10cm条件下离心20min,收集上清液，即可制得大麻花叶发酵提取物。[0065]将大麻花叶发酵提取物在10万级净化车间进行灌装后再经过灭菌处理，灭菌条件[0067]制备液态酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，按照重量比计，包括：酵母浸粉1.0%,蛋白胨2.2%,葡萄糖2.5%。[0068]将黄酒酵母接种于灭菌后的液态酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，在25℃摇床中振荡培养，以对数期的发酵液作为后续发酵的发酵菌液。7[0069]将干燥的大麻花叶和水按照重量比为1:20制备成大麻花叶浆液，在110℃条件下灭菌20min,再调节pH值为6。[0070]加入大麻花叶浆液重量比为3倍量的发酵菌液，在温度为25℃摇床中发酵65h;将发酵好的发酵液在11000r/min转速，离心半径为10cm条件下离心21min,收集上清液，即可制得大麻花叶发酵提取物。[0071]将大麻花叶发酵提取物在10万级净化车间进行灌装后再经过灭菌处理，灭菌条件[0073]制备液态酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，按照重量比计，包括：酵母浸粉1.0%,蛋白胨2.2%,葡萄糖2.5%。[0074]将黄酒酵母接种于灭菌后的液态酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，在25℃摇床中振荡培养，以还未到对数期的发酵液作为后续发酵的发酵菌液。[0075]将新鲜的大麻花叶和水按照重量比为1:8制备成大麻花叶浆液，在110℃条件下灭菌20min,再调节pH值为6。[0076]加入大麻花叶浆液重量比为3倍量的发酵菌液，在温度为25℃摇床中发酵65h;将发酵好的发酵液在11000r/min转速，离心半径为10cm条件下离心21min,收集上清液，即可制得大麻花叶发酵提取物。[0077]将大麻花叶发酵提取物在10万级净化车间进行灌装后再经过灭菌处理，灭菌条件[0079]1)对实施例1提供的大麻花叶发酵提取物进行抗菌实验，实验单位为：广东药科大[0080]病原学分析认为痤疮的严重程度与痤疮丙酸杆菌的增殖有关，因此，目前抗痤疮药物活性评价主要考察对痤疮丙酸杆菌的抑菌作用；本次测试所用菌株痤疮丙酸杆菌(Propionibacteriumacnes),广东省微生物研究所提供。该测试涉及的试剂还包括：三氯生DP300(麦克林)。灭菌锅(上海申安医疗器械厂);SQP万分之一电子秤(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)。[0083]取供试物(实施例1提供的大麻花叶发酵提取物),用灭菌生理盐水溶解至一定浓度(1倍),再取其稀释备用。取新鲜菌液1mL分别接种于营养肉汤培养基中，加入上述不同浓度供试物溶液，置普通培养箱37℃培养72h,观察结果。另设空白对照组(生理盐水)、阳性对[0084]参照2015版《中华人民共和国药典》中的抑制微生物生长的内容设定，将抑菌功效[0085]表1抑制痤疮丙酸杆菌功效评价标准8序号抑菌圈大小(mm)备注1无效23中效4高效[0087]最低抑菌浓度结果判定：培养基混浊者表示有菌生长，药液无抑菌作用；培养基透明者表示无菌生长，药液有抑菌作用。最低抑菌浓度(minimalinhibitoryconcentration,MIC)即为抑制细菌生长的药液最大稀释倍数时的浓度。[0088]实验检测结果见表2。[0089]表2大麻花叶发酵提取物对痤疮丙酸杆菌的MIC的测定实验浓度(%)菌落生长面积(%)大麻花叶发酵提取物生理盐水无效根据表2的结果可知，加入生理盐水的平皿的菌落生长面积为100%,而加入0.1%DP300的阳性对照组的菌落生长面积为0.0%,这说明溶剂生理盐水对大麻花叶发酵提取物的抑菌测试结果无干扰，且本实验结果有效。由表2中的数据可知，大麻花叶发酵提取物在6.