2025年华中农业大学生物医学与健康学院噬菌体或蛋白质药方向专任教师／博士后公开招聘笔试历年典型考题（历年真题考点）解题思路附带答案详解

2025年华中农业大学生物医学与健康学院噬菌体或蛋白质药方向专任教师／博士后公开招聘笔试历年典型考题（历年真题考点）解题思路附带答案详解一、选择题从给出的选项中选择正确答案（共50题）1、在噬菌体展示技术中，外源蛋白或多肽通常与噬菌体的哪个结构蛋白融合表达，以便在噬菌体表面呈现？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白2、在蛋白质药物开发中，下列哪项技术最常用于检测蛋白质的空间构象与折叠状态？A.SDSB.WesternblotC.圆二色光谱（CD）D.RT-PCR3、在噬菌体展示技术中，外源蛋白通常与噬菌体的哪种结构蛋白融合表达，从而实现在病毒颗粒表面的展示？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白4、蛋白质类药物开发中，提高其在体内半衰期的常用策略是与其融合或偶联下列哪种分子？A.聚乙二醇（PEG）B.脂多糖（LPS）C.磷脂酰胆碱D.透明质酸5、在噬菌体展示技术中，外源蛋白或多肽通常与噬菌体的哪个结构蛋白融合表达，以实现其在噬菌体表面的展示？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白6、在蛋白质药物开发中，聚乙二醇（PEG）修饰的主要目的是？A.增强蛋白质的免疫原性B.提高蛋白质的组织靶向性C.延长蛋白质的血清半衰期D.促进蛋白质的胞内转运7、在噬菌体展示技术中，外源蛋白或多肽通常与噬菌体的哪种结构蛋白融合表达，以实现在噬菌体表面的展示？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白8、在蛋白质药物开发中，为提高其在体内的半衰期，常采用聚乙二醇（PEG）修饰技术，该技术主要通过何种方式发挥作用？A.增强蛋白质的抗原性B.促进蛋白质的快速降解C.增大分子体积，减少肾清除D.提高蛋白质与受体的结合亲和力9、在噬菌体生命周期中，能够整合到宿主细菌染色体中并随其复制而复制的阶段称为？A.裂解周期B.溶原周期C.吸附阶段D.组装阶段10、在蛋白质药物研发中，以下哪种修饰最有助于提高其在体内的半衰期？A.磷酸化B.泛素化C.PEG化D.乙酰化11、在噬菌体展示技术中，外源蛋白或多肽通常与噬菌体的哪个结构蛋白融合表达，从而实现在噬菌体表面的展示？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白12、在蛋白质药物研发中，提高重组蛋白热稳定性的常用策略不包括以下哪项？A.引入二硫键B.增加表面疏水残基C.定点突变以优化电荷互补D.添加聚乙二醇（PEG）修饰13、在噬菌体展示技术中，外源蛋白通常与噬菌体的哪种结构蛋白融合表达，以便在噬菌体表面呈现？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白14、在蛋白质药物研发中，提高重组蛋白血清半衰期的常用策略是？A.增加蛋白等电点B.融合Fc片段或聚乙二醇修饰C.减少二硫键数量D.切除信号肽序列15、在噬菌体展示技术中，外源肽或蛋白质通常与噬菌体的哪个结构蛋白融合表达，以便在噬菌体表面呈现？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白16、在重组蛋白质药物纯化过程中，常用镍柱亲和层析法进行初步纯化，该方法主要依赖于目标蛋白的哪一特性？A.等电点差异B.分子量大小C.带有组氨酸标签D.疏水性强弱17、在噬菌体展示技术中，外源蛋白或多肽通常与噬菌体的哪种结构蛋白融合表达，从而实现表型与基因型的关联？A.pIII蛋白B.pV蛋白C.pX蛋白D.pIX蛋白18、在重组蛋白质药物制备过程中，常采用包涵体表达策略，但需后续复性处理。以下哪种方法最常用于变性蛋白的梯度复性？A.透析法去除变性剂B.高温孵育促进折叠C.直接稀释硫酸铵沉淀物D.加入高浓度盐离子19、在噬菌体展示技术中，外源蛋白或多肽通常与噬菌体的哪种结构蛋白融合表达，以便在噬菌体表面呈现？A.pIII蛋白B.pV蛋白C.pVI蛋白D.pVIII蛋白20、在蛋白质药物开发中，提高其体内半衰期的常用策略不包括以下哪项？A.与聚乙二醇（PEG）偶联B.与白蛋白融合表达C.增加蛋白的等电点D.利用Fc融合技术21、在噬菌体展示技术中，外源蛋白通常与噬菌体的哪种结构蛋白融合表达，以便在噬菌体表面呈现？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白22、在蛋白质药物开发中，以下哪种方法最常用于评估蛋白质的三级结构完整性？A.SDSB.紫外吸收光谱C.圆二色性光谱（CD）D.WesternBlot23、在噬菌体展示技术中，外源蛋白或多肽通常与噬菌体的哪种结构蛋白融合表达，以便在噬菌体表面呈现？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白24、在重组蛋白质药物纯化过程中，常利用His标签与哪种金属离子的亲和作用进行固定化金属离子亲和层析（IMAC）？A.Fe²⁺B.Mg²⁺C.Ni²⁺D.Zn²⁺25、在研究噬菌体裂解周期时，下列哪一结构直接参与宿主细胞壁的降解，从而促进子代噬菌体的释放？A.尾丝B.衣壳C.溶菌酶D.基板26、在蛋白质类药物开发中，提高其体内半衰期的常用策略是？A.增加分子疏水性B.减少二硫键数量C.聚乙二醇（PEG）修饰D.切除信号肽序列27、在噬菌体展示技术中，外源蛋白或多肽通常与噬菌体的哪种结构蛋白融合表达，以便在病毒表面展示？A.pIII蛋白B.pV蛋白C.pX蛋白D.pIX蛋白28、在蛋白质药物开发中，为提高其体内半衰期，常采用聚乙二醇（PEG）修饰技术，该修饰主要通过何种方式发挥作用？A.增强蛋白质的酶解活性B.减少肾脏清除和免疫识别C.提高蛋白质的等电点D.促进受体特异性结合29、在噬菌体展示技术中，外源蛋白或多肽通常与噬菌体的哪种结构蛋白融合表达，从而实现在噬菌体表面的展示？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白30、在蛋白质药物开发中，提高其体内半衰期的常用策略是与下列哪种大分子进行共价连接？A.聚乙二醇（PEG）B.脂多糖C.纤维素D.透明质酸31、在噬菌体展示技术中，用于筛选特异性结合靶标蛋白的噬菌体库，其原理主要依赖于以下哪一过程？A.噬菌体DNA在大肠杆菌中的自主复制B.外源蛋白与噬菌体衣壳蛋白的融合表达C.噬菌体对宿主细胞的裂解作用D.RNA聚合酶识别噬菌体启动子32、在蛋白质药物研发中，提高其体内半衰期的常用策略是？A.增加蛋白质的等电点B.通过聚乙二醇（PEG）修饰减少肾清除C.提高蛋白质的疏水性以增强细胞穿透D.去除N-糖基化位点以降低分子量33、在噬菌体展示技术中，外源蛋白或多肽通常与噬菌体的哪种结构蛋白融合表达，以实现在噬菌体表面的展示？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白34、在重组蛋白质药物纯化过程中，利用组氨酸标签（His-tag）进行亲和层析时，通常依靠哪种金属离子与组氨酸残基的特异性结合？A.Fe²⁺B.Mg²⁺C.Ni²⁺D.Zn²⁺35、在噬菌体展示技术中，常用于筛选特异性结合靶标蛋白的多肽或抗体片段的原理是基于以下哪项生物学机制？A.噬菌体基因组的随机突变B.外源蛋白在噬菌体表面的表达与基因型-表型关联C.噬菌体对真核细胞的感染能力D.噬菌体DNA的自我复制效率36、在重组蛋白质药物制备过程中，采用大肠杆菌表达系统时，常遇到目标蛋白以包涵体形式存在。以下哪种策略最有助于获得具有正确空间构象的活性蛋白？A.提高培养温度至42℃以促进蛋白溶解B.使用低强度诱导剂（如低浓度IPTG）并降低诱导温度C.增加溶菌酶的添加量D.直接进行镍柱亲和纯化后使用37、在噬菌体展示技术中，外源多肽或蛋白质通常与噬菌体的哪种结构蛋白融合表达，以便在噬菌体表面呈现？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白38、在蛋白质药物开发中，以下哪种修饰方式最常用于延长重组蛋白在体内的半衰期？A.磷酸化B.泛素化C.PEG化D.乙酰化39、在噬菌体展示技术中，外源蛋白或多肽通常与噬菌体的哪种结构蛋白融合表达，以便在噬菌体表面呈现？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白40、在蛋白质药物开发中，下列哪种修饰方式最常用于延长其体内半衰期？A.磷酸化B.泛素化C.PEG化D.乙酰化41、在噬菌体展示技术中，外源蛋白或多肽通常与噬菌体的哪种结构蛋白融合表达，以便在噬菌体表面呈现？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白42、在蛋白质药物开发中，提高其在体内的半衰期常采用聚乙二醇（PEG）修饰技术，该技术的主要作用机制是？A.增强蛋白质的免疫原性B.降低蛋白质的溶解度C.增大分子体积，减少肾清除D.促进蛋白质的降解43、在噬菌体展示技术中，外源多肽或蛋白质通常与噬菌体的哪种结构蛋白融合表达，以实现表型与基因型的关联？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白44、在重组蛋白质药物纯化过程中，常用镍柱亲和层析法进行初步纯化，其主要原理依赖于目标蛋白的哪种修饰？A.磷酸化修饰B.泛素化标记C.GST标签融合D.组氨酸标签（His-tag）45、在噬菌体展示技术中，外源蛋白或多肽通常与噬菌体的哪种结构蛋白融合表达，以便在病毒表面展示？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pIX蛋白D.pVIII蛋白46、在蛋白质药物开发中，为提高重组蛋白的稳定性与半衰期，常采用聚乙二醇（PEG）修饰技术，该修饰主要影响蛋白质的哪项性质？A.抗原结合特异性B.分子电荷分布C.肾脏清除速率D.二级结构形成能力47、在噬菌体展示技术中，外源蛋白或多肽通常与噬菌体的哪种结构蛋白融合表达，以便在噬菌体表面呈现？A.pIII蛋白B.pVI蛋白C.pVIII蛋白D.pIX蛋白48、在重组蛋白质药物的纯化过程中，His-tag标签最常通过哪种层析方法进行特异性富集？A.离子交换层析B.凝胶过滤层析C.亲和层析D.疏水相互作用层析49、在噬菌体展示技术中，用于筛选特异性结合靶标蛋白的噬菌体克隆，主要依赖于以下哪种分子展示在噬菌体表面？A.噬菌体基因组DNAB.宿主菌的核糖体蛋白C.外源多肽或蛋白质融合于噬菌体外壳蛋白D.游离的mRNA分子50、在重组蛋白质药物纯化过程中，常利用His标签与镍柱亲和层析进行初步分离，其主要原理是什么？A.蛋白质的疏水性差异B.组氨酸残基与镍离子的配位结合C.蛋白质分子大小的筛选D.抗原-抗体特异性识别

参考答案及解析1.【参考答案】A【解析】噬菌体展示技术利用丝状噬菌体（如M13）的外壳蛋白展示外源多肽或蛋白。其中，pIII蛋白位于噬菌体一端，通常与目标蛋白融合表达，每颗粒噬菌体展示1-5个拷贝，适合高亲和力筛选。pVIII为次要衣壳蛋白，用于短肽高频展示，但易影响噬菌体感染能力。本题考查对噬菌体展示系统核心组件的理解，pIII是常用融合位点，故选A。2.【参考答案】C【解析】圆二色光谱（CD）可检测蛋白质在溶液中的二级结构（如α-螺旋、β-折叠）含量，反映其折叠与构象状态。SDS用于分离蛋白质并测定分子量，但破坏高级结构；Westernblot用于特异性蛋白检测，不分析构象；RT-PCR检测基因表达水平，与蛋白质结构无关。CD是研究蛋白质折叠、稳定性及药物作用机制的重要手段，故选C。3.【参考答案】A【解析】噬菌体展示技术中，M13噬菌体最常用，其pIII蛋白位于噬菌体一端，为吸附宿主菌的关键蛋白。将外源基因插入pIII基因中，可实现外源多肽或蛋白在其表面展示，便于高通量筛选。pVIII为外壳主蛋白，适合短肽展示；而pIII更适合展示较大蛋白，且展示数量可控，是常用选择。4.【参考答案】A【解析】聚乙二醇化（PEGylation）是蛋白质药物修饰的常用手段，通过共价连接PEG分子，可显著增加蛋白质的分子量，减少肾清除，屏蔽免疫识别，从而延长其在血液循环中的半衰期。该技术已广泛应用于干扰素、粒细胞集落刺激因子等药物中，安全性和有效性明确。其余选项不用于常规半衰期延长策略。5.【参考答案】A【解析】噬菌体展示技术中，M13噬菌体的pIII蛋白位于噬菌体尾端，通常用于融合表达外源多肽或蛋白，因具有较低拷贝数（3~5个）且不影响噬菌体感染能力，适合高亲和力筛选。pVIII为外壳主蛋白，适用于短肽展示，但外源序列过长易影响组装。本题考查关键技术细节，pIII是最常用且经典的融合位点。6.【参考答案】C【解析】PEG修饰（PEGylation）通过在蛋白质表面共价连接PEG分子，增加其分子量，减少肾清除，屏蔽蛋白酶降解和免疫识别，从而显著延长药物在血液中的循环时间。虽然可能影响活性，但整体药代动力学改善明显。该技术广泛应用于干扰素、粒细胞集落刺激因子等蛋白药物，核心优势即延长半衰期，故C正确。7.【参考答案】A【解析】噬菌体展示技术常用M13丝状噬菌体，外源多肽或蛋白通常与噬菌体外壳蛋白pIII或pVIII融合表达。其中，pIII蛋白位于噬菌体尾端，每颗粒含3-5个拷贝，适合展示较大蛋白；pVIII为主要外壳蛋白，拷贝数高，适用于短肽展示。因pIII容载量大且不影响噬菌体感染能力，常用于抗体或受体筛选。故本题选A。8.【参考答案】C【解析】PEG修饰（PEGylation）是在蛋白质表面共价连接聚乙二醇链，从而增大其流体动力学半径，减少肾小球滤过清除，延长血浆半衰期。同时可降低免疫原性、提高溶解度和稳定性。虽可能略微降低结合亲和力，但整体药代动力学显著改善，广泛应用于如PEG-干扰素等药物。故正确答案为C。9.【参考答案】B【解析】噬菌体的生命周期分为裂解周期和溶原周期。溶原周期中，噬菌体DNA整合入宿主细菌染色体，成为前噬菌体，随宿主DNA复制而同步复制，不立即引起细胞裂解。此状态可长期维持，直至受外界刺激转入裂解周期。选项B正确。裂解周期则直接完成复制、组装并裂解宿主细胞；吸附和组装仅为裂解过程中的步骤，不具备整合特性。10.【参考答案】C【解析】PEG化是指将聚乙二醇（PEG）共价连接到蛋白质分子上，可显著增加其分子体积，减少肾小球滤过，降低免疫原性，并提高稳定性，从而延长蛋白质药物在血液循环中的半衰期，广泛应用于临床蛋白药物改良。磷酸化与信号转导相关；泛素化标记蛋白质降解；乙酰化多参与基因表达调控，均不具延长半衰期的主要作用。故C正确。11.【参考答案】A【解析】噬菌体展示技术中，最常用的丝状噬菌体（如M13）通过将外源基因插入噬菌体基因组，使其表达产物与噬菌体外壳蛋白融合。其中，pIII蛋白位于噬菌体一端，通常与靶标分子结合，在展示文库构建中广泛用于展示抗体片段或肽段。因其拷贝数少（3-5个），适合高亲和力筛选。pVIII为衣壳主蛋白，多用于短肽展示，但易影响噬菌体感染能力。本题考查对噬菌体展示系统核心机制的理解。12.【参考答案】B【解析】提高蛋白质热稳定性常用手段包括：引入二硫键增强结构刚性（A正确），通过定点突变优化内部电荷或氢键网络（C正确），PEG修饰可增加分子尺寸、减少降解（D正确）。而增加表面疏水残基易导致蛋白聚集或误折叠，反而降低溶解度与稳定性，故不属于合理策略。本题考察蛋白质工程中稳定性调控的科学原则。13.【参考答案】A【解析】噬菌体展示技术中，外源多肽或蛋白质常与丝状噬菌体（如M13）的外壳蛋白融合表达。其中，pIII蛋白位于噬菌体一端，每个噬菌体仅含3-5个拷贝，适合展示较大蛋白而不影响噬菌体感染能力。pVIII为主衣壳蛋白，适用于短肽高拷贝展示，但大蛋白融合易影响组装。因此，外源蛋白展示多选用pIII蛋白作为融合载体，确保功能完整与筛选效率。14.【参考答案】B【解析】重组蛋白易被肾清除或蛋白酶降解，半衰期短。PEG化（聚乙二醇修饰）可增大分子量，减少肾滤过；Fc融合利用IgGFc与新生儿Fc受体（FcRn）循环机制，延长血清存留时间。此两类技术广泛应用于临床蛋白药物（如阿达木单抗、依那西普）。增加等电点或切除信号肽不直接延长半衰期，减少二硫键可能降低稳定性，故B为正确策略。15.【参考答案】A【解析】噬菌体展示技术中，外源肽或蛋白质常与丝状噬菌体（如M13）的pIII蛋白或pVIII蛋白融合表达。其中pIII蛋白位于噬菌体一端，拷贝数少（通常3-5个），适合展示较大蛋白或需要低密度展示的分子；pVIII蛋白位于噬菌体外壳主体，拷贝数高，适合小肽展示。对于蛋白质药物筛选，常使用pIII蛋白融合，因其对蛋白功能影响较小且便于后续亲和筛选。因此答案为A。16.【参考答案】C【解析】镍柱亲和层析（Ni-NTA）基于目标蛋白N端或C端融合的6×His标签（多组氨酸标签）与镍离子（Ni²⁺）的配位结合能力。在洗脱时通过增加咪唑浓度竞争性洗脱目标蛋白。该方法特异性强、操作简便，广泛用于原核或真核表达的重组蛋白纯化。等电点用于离子交换层析，分子量用于凝胶过滤，疏水性用于疏水相互作用层析。故正确答案为C。17.【参考答案】A【解析】噬菌体展示技术常用M13丝状噬菌体，其外源多肽或蛋白通常与外壳蛋白pIII融合表达。pIII位于噬菌体颗粒的一端，参与感染大肠杆菌的F菌毛结合，其结构允许外源序列插入而不破坏噬菌体感染能力。展示在pIII上的多肽与编码该多肽的DNA共同包裹于同一噬菌体颗粒中，实现“表型-基因型”一对一关联，便于后续筛选。其他蛋白如pV为内部蛋白，不用于表面展示；pIX虽可用于展示，但容量较小，应用不如pIII广泛。18.【参考答案】A【解析】包涵体表达后，蛋白质处于变性状态，需去除变性剂（如尿素或盐酸胍）并恢复天然构象。透析法通过逐步降低透析液中变性剂浓度，实现蛋白缓慢复性，减少聚集。直接稀释虽快但易致蛋白沉淀；高温和高盐通常破坏结构，不利于复性。梯度透析可维持复性中间体稳定性，是实验室最常用且有效的复性手段。19.【参考答案】A【解析】噬菌体展示技术常利用M13丝状噬菌体，外源多肽或蛋白通常与噬菌体外壳蛋白pIII（次要外壳蛋白）或pVIII（主要外壳蛋白）融合表达。其中，pIII蛋白位于噬菌体一端，拷贝数少（3-5个），适合展示较大蛋白片段而不影响噬菌体感染能力；pVIII则拷贝数高，适合展示小肽。因此，展示抗体片段或较大蛋白时多选用pIII融合。故正确答案为A。20.【参考答案】C【解析】延长蛋白质药物半衰期的常用策略包括PEG化修饰、白蛋白融合、Fc融合等，这些方法可减少肾清除、增强血清稳定性。而增加等电点可能改变蛋白的溶解性或导致非特异性结合，反而影响药代动力学，且并非延长半衰期的有效手段。等电点影响电荷性质，与清除速率无直接正相关。故C项不属于有效策略，为正确答案。21.【参考答案】A【解析】噬菌体展示技术中，常用M13噬菌体作为载体，外源肽或蛋白基因与噬菌体外壳蛋白基因融合表达。pIII蛋白位于噬菌体一端，参与感染宿主菌的吸附过程，因其拷贝数少（3~5个）、对噬菌体感染性影响较小，常用于展示较大蛋白分子。pVIII蛋白为主壳蛋白，拷贝数高，适合展示小肽段。因此，外源蛋白多与pIII蛋白融合表达，便于高效筛选功能性结合蛋白。22.【参考答案】C【解析】圆二色性光谱（CD）可检测蛋白质中α-螺旋、β-折叠等二级结构比例，反映其空间构象是否正确折叠。SDS主要用于测定分子量及纯度，破坏高级结构；WesternBlot用于抗原检测；紫外吸收光谱可测浓度，但不提供结构信息。CD光谱在溶液状态下非破坏性检测，是评估蛋白质三级结构完整性的常用手段。23.【参考答案】A【解析】噬菌体展示技术常用M13丝状噬菌体，外源多肽或蛋白通常与噬菌体外壳的pIII蛋白或pVIII蛋白融合表达。其中pIII蛋白位于噬菌体一端，拷贝数少（3~5个），适合展示较大蛋白；pVIII蛋白位于噬菌体主衣壳，拷贝数高，适合短肽展示。实际应用中，pIII蛋白因展示效率高、不影响噬菌体感染能力而被广泛用于抗体或受体筛选。因此，正确答案为A。24.【参考答案】C【解析】His标签（6×His）由6个连续组氨酸残基组成，能特异性结合Ni²⁺、Co²⁺、Cu²⁺等过渡金属离子。其中Ni²⁺最常用，因其与组氨酸侧链咪唑基团结合能力强、特异性较高，且成本适中。IMAC柱通常以Ni-NTA（镍-氮川三乙酸）为配体，广泛应用于原核或真核表达系统中重组蛋白的纯化。Fe²⁺、Mg²⁺、Zn²⁺不常规用于此技术。故正确答案为C。25.【参考答案】C【解析】噬菌体在完成复制后，通过裂解周期释放子代病毒。此过程中，噬菌体基因编码的溶菌酶（lysozyme）被合成并释放到宿主细胞壁，特异性降解肽聚糖层，导致细胞壁破裂，细胞裂解。尾丝用于识别和吸附宿主细胞，衣壳是包裹核酸的蛋白质外壳，基板参与尾部结构组装并触发DNA注入，三者均不直接参与细胞壁的降解。因此，正确答案为C。26.【参考答案】C【解析】聚乙二醇（PEG）修饰是一种广泛应用的蛋白质药物理化性质优化技术。PEG分子共价连接至蛋白质表面，可增加其分子大小，减少肾小球滤过，屏蔽免疫识别位点，从而延长血浆半衰期。增加疏水性可能导致聚集或快速清除；减少二硫键会降低蛋白质稳定性；信号肽在翻译后即被切除，与半衰期调控无直接关系。因此，C为正确选项。27.【参考答案】A【解析】噬菌体展示技术中，常使用M13丝状噬菌体，其pIII蛋白位于噬菌体颗粒的一端，负责与宿主菌的Fpilus结合。将外源基因插入pIII基因中，可实现外源肽段与pIII蛋白的融合表达，并展示于噬菌体表面，便于后续筛选。pV蛋白主要参与单链DNA的结合，不用于展示；pIX为次要外壳蛋白，虽可用于展示，但应用不如pIII广泛。因此，最常用的是pIII蛋白。28.【参考答案】B【解析】PEG修饰（Pegylation）是在蛋白质药物表面共价连接聚乙二醇分子，形成水化层，从而增大分子体积、减少肾小球滤过，降低免疫原性，延缓体内清除速度，显著延长血浆半衰期。该技术不增强酶活性，也不直接提高受体结合能力或改变等电点。其核心优势在于屏蔽抗原表位和减缓降解与排泄，因此B项正确。29.【参考答案】A【解析】噬菌体展示技术中，外源多肽或蛋白常与丝状噬菌体（如M13）的外壳蛋白融合表达。其中，pIII蛋白位于噬菌体一端，通常用于展示较大蛋白片段，因其拷贝数少（3~5个），有利于高亲和力结合筛选；pVIII为次要衣壳蛋白，适合展示小肽。本题考查核心技术原理，pIII是最常用且关键的融合表达载体蛋白，故选A。30.【参考答案】A【解析】聚乙二醇化（PEGylation）是蛋白质药物修饰的重要手段，通过共价连接PEG分子，可增加蛋白质的分子量，减少肾清除率，屏蔽免疫识别，从而显著延长其在血液中的半衰期。该技术已广泛应用于干扰素、粒细胞集落刺激因子等药物改良。脂多糖具免疫毒性，纤维素与透明质酸非主流修饰载体，故正确答案为A。31.【参考答案】B【解析】噬菌体展示技术的核心是将外源多肽或蛋白与噬菌体外壳蛋白（如pIII或pVIII）融合表达，使目标蛋白展示在噬菌体表面，从而能与固定靶标特异性结合。通过多轮“结合-洗脱-扩增”筛选出高亲和力克隆。选项B正确描述了该技术的关键机制。其他选项虽涉及噬菌体生物学特性，但非筛选原理核心。32.【参考答案】B【解析】PEG化修饰可在蛋白质表面形成水化层，增大分子尺寸，减少肾脏滤过，同时屏蔽免疫识别，显著延长血浆半衰期，是临床常用策略。选项A、C、D可能影响稳定性或活性，但不一定延长半衰期，甚至可能加速清除。B项科学合理且广泛应用，为正确答案。33.【参考答案】A【解析】噬菌体展示技术中，M13噬菌体最常用于构建展示库，其外壳蛋白pIII位于噬菌体一端，负责识别宿主菌的Fpilus。由于pIII为次要衣壳蛋白，拷贝数少（通常1-5个），适合展示大分子蛋白而不影响噬菌体感染能力。外源多肽或蛋白常与pIII融合表达，实现功能性展示。pVIII为主要衣壳蛋白，适用于短肽高拷贝展示，但对大蛋白易造成结构不稳定。因此，正确答案为A。34.【参考答案】C【解析】组氨酸标签（His-tag）由6个连续组氨酸残基构成，能特异性结合过渡金属离子。在亲和层析中，Ni²⁺最常用于螯合到固定化NTA或IDA载体上，形成Ni-NTA树脂，选择性捕获His-tag融合蛋白。其他金属如Co²⁺或Cu²⁺也可用，但Ni²⁺结合能力强、成本低、应用最广。Fe²⁺、Mg²⁺、Zn²⁺与组氨酸亲和力弱，不用于常规纯化。因此，正确答案为C。35.【参考答案】B【解析】噬菌体展示技术的核心是将外源多肽或蛋白质基因插入噬菌体外壳蛋白基因中，使表达的融合蛋白展示在噬菌体表面，同时其编码基因包含在噬菌体内，实现“表型（结合能力）”与“基因型（编码序列）”的物理关联。通过多轮亲和筛选（如淘选），可富集能特异性结合靶标的噬菌体克隆，进而获得目标序列。该技术不依赖突变或复制效率，也不涉及感染真核细胞。故正确答案为B。36.【参考答案】B【解析】包涵体主要因蛋白表达过快、折叠不充分所致。降低IPTG浓度可减缓表达速率，降低诱导温度（如25–30℃）有助于分子伴侣参与正确折叠，提高可溶性活性蛋白产量。高温（A）会加剧错误折叠；溶菌酶（C）仅用于裂解细胞，不影响折叠过程；直接纯化包涵体蛋白（D）需后续复杂复性步骤，且活性难保证。因此，B为最优策略。37.【参考答案】A【解析】噬菌体展示技术中，常用M13丝状噬菌体作为载体，外源基因片段插入至噬菌体基因组中编码外壳蛋白的基因序列内，使表达的融合蛋白展示于噬菌体表面。其中，pIII蛋白位于噬菌体一端，参与感染大肠杆菌的吸附过程，因其每个噬菌体仅含3-5个拷贝，适合展示较大外源蛋白且不影响感染能力，常用于构建噬菌体展示文库。pVIII蛋白虽也用于展示，但拷贝数极高，适用于短肽展示。因此，正确答案为A。38.【参考答案】C【解析】PEG化（聚乙二醇修饰）是在蛋白质药物表面共价连接聚乙二醇分子，可显著增加分子体积，减少肾小球滤过，降低免疫原性，并提高稳定性，从而有效延长药物在血液循环中的半衰期。磷酸化、乙酰化和泛素化均为细胞内天然发生的翻译后修饰，分别参与信号转导、基因调控和蛋白降解，不用于延长药用蛋白的体内存留时间。因此，PEG化是蛋白质药物工程中广泛应用的关键技术，正确答案为C。39.【参考答案】A【解析】噬菌体展示技术常用M13丝状噬菌体，其pIII蛋白位于噬菌体一端，参与感染宿主菌的吸附过程。外源多肽或蛋白与pIII蛋白融合后，可在噬菌体表面展示，且不影响其感染能力，便于后续筛选。pVIII为外壳主蛋白，适用于短肽展示；pIII更适用于较大蛋白片段展示，因此pIII是常用载体。40.【参考答案】C【解析】PEG化（聚乙二醇修饰）可通过在蛋白质表面共价连接聚乙二醇分子，增加其分子量，减少肾清除率，并屏蔽免疫识别，显著延长血浆半衰期。磷酸化、乙酰化和泛素化多为细胞内调控修饰，泛素化甚至促进蛋白酶体降解。因此，PEG化是蛋白质药物改良中最常用的半衰期延长技术。41.【参考答案】A【解析】噬菌体展示技术中，外源多肽或蛋白常与丝状噬菌体（如M13）的外壳蛋白pIII或pVIII融合表达。其中，pIII蛋白位于噬菌体一端，拷贝数少（3~5个），适合展示较大蛋白片段，且有利于后续富集与筛选。pVIII为主外壳蛋白，拷贝数高，适合展示小肽。本题考查核心技术原理，pIII是常用融合靶点，故选A。42.【参考答案】C【解析】PEG修饰（PEGylation）通过共价连接聚乙二醇链至蛋白质分子，显著增大其流体动力学体积，有效避免肾脏滤过（肾清除主要过滤小于60kDa的分子），同时屏蔽蛋白表面，减少酶解和免疫识别，从而延长血浆半衰期。该技术广泛应用于干扰素、尿酸氧化酶等蛋白药物，故正确答案为C。43.【参考答案】A【解析】噬菌体展示技术中，外源多肽或蛋白质常与丝状噬菌体（如M13）的外壳蛋白pIII融合表达。pIII蛋白位于噬菌体颗粒的一端，参与感染大肠杆菌的吸附过程。因其拷贝数低（通常1~5个），适合展示较大蛋白片段而不影响噬菌体感染能