（正式版）DB44∕T 2799-2025 《实验动物 合成材料运动场地面层吸入毒性安全技术规范》

ICS65.020.30CCSB44DB44广东省市场监督管理局发布IDB44/TXXXXX—XXXX前言 Ⅱ 12规范性引用文件 13术语和定义 14试验原理 15试验要求 1 15.2实验动物 25.3染毒环境条件 25.4试验步骤和观察指标 26数据处理和结果评价 46.1数据处理 46.2结果评价 47试验报告 48试验结果的解释 5附录A（资料性）一般临床观察 6附录B（资料性）眼科检查 7参考文献 8DB44/TXXXXX—XXXX本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由广东省科学技术厅提出并组织实施。本文件由广东省实验动物标准化技术委员会（GD/TC93）归口。本文件起草单位：广州质量检验研究院，广州市从化区教育局，广州市花都区教育局，广州市教育基建和装备中心，广东省奥林匹克中心，广东省体育场馆协会，广东省体育设施制造商协会，广州同欣体育股份有限公司，广东杰锐新材料有限公司，江门市长河化工实业集团有限公司，广州信源体育产业有限公司，广东川奥高新科技有限公司。本文件主要起草人：刘香梅、李培宁、黄宇梁、刘冬虹、郭燕华、庞增雄、吴剑辉、梁俊杰、邓以健、陈秀娟、李光先、黄晓辉、李睿、黄珏靖、赖浩亮、杨汉华、刘军、成冬来、蔡陈敏、詹金城、赵文海、刘威、赵克勤。DB44/TXXXXX—XXXX1实验动物合成材料运动场地面层吸入毒性安全技术规范本文件规定了合成材料运动场地面层大鼠急性（5d）和亚急性（28d）吸入毒性安全技术规范的试验要求、数据处理和结果评价、试验报告、试验结果的解释。本文件适用于合成材料运动场地面层及其原料的吸入毒性安全性评价。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB5749生活饮用水卫生标准GB14922实验动物微生物、寄生虫学等级及监测GB14924.1实验动物配合饲料通用质量标准GB14924.2实验动物配合饲料卫生标准GB14924.3实验动物配合饲料营养成分GB14925实验动物环境及设施GB36246中小学合成材料面层运动场地GB/T43564中小学合成材料面层田径场地3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1合成材料运动场地面层syntheticmaterialssportsfieldsurfaces铺装在沥青混凝土或水泥混凝土等基础层上，用于运动场地的高分子合成材料层。4试验原理实验动物经吸入途径暴露于合成材料运动场地面层释放的挥发性物质，通过观察实验动物的毒性反应及死亡情况，评价合成材料运动场地面层的吸入毒性。5试验要求5.1受试物DB44/TXXXXX—XXXX25.1.1合成材料运动场地面层成品应按照GB36246有关规定，确定取样位置及裁取规格（300mm×400mm×实际厚度取样后装入聚乙烯或聚四氟乙烯袋密封保存。成品样品应在合成材料运动场地面层铺装完毕后14d~60d内开始取样检测。5.1.2合成材料运动场地面层原料5.1.2.1固体原料，应按照GB/T43564有关规定，根据生产者提供的建议铺装量（kg/m2按照0.024m2的面积计算取样量，取样量应在报告中注明。当无法获得建议铺装量时，取样量为30g。5.1.2.2非固体原料，应按照GB/T43564有关规定，根据生产者提供的建议铺装量（kg/m2）和工艺，将非固体原料均匀地涂在无味且化学惰性的基材上（如玻璃板、不锈钢板、聚四氟乙烯板等）。5.1.2.3合成材料运动场地面层原料在送达实验室后14d内开始检测。注：固体原料，如丁苯橡胶颗粒、三元乙丙橡胶颗粒、聚氨酯橡胶颗粒、热塑性弹性体非固体原料，如各种胶粘剂、现浇型面层用预聚5.2实验动物5.2.1实验动物选择实验动物应符合GB14922有关规定。大鼠周龄不超过6周，体重差异不超过同批次同性别平均体重的±20%。每组实验动物数至少10只（雌雄各半），对照组实验动物性别和数量应与染毒组相同。必要时，增设追踪观察组，每组10只（雌雄各半）。5.2.2实验动物饲养试验前应进行3d～5d环境适应和检疫观察。实验动物饲养环境应符合GB14925，饮用水应符合GB5749，饲料质量、卫生和营养成分应符合GB14924.1、GB14924.2和GB14924.3的有关规定。试验期间，动物自由饮水和摄食。大鼠按性别分笼群饲，每笼实验动物数（一般不超过3只）应满足实验动物最低需要的空间，以不影响实验动物自由活动和观察动物的体征为宜。5.3染毒环境条件5.3.1实验动物应在吸入染毒装置中进行染毒。吸入染毒装置应配备动态气流系统，且密闭，以防止受试物挥发性物质泄露到外部环境中。染毒期间，换气次数维持在12次/h~15次/h，氧气体积分数不低于19%，保证动物总体积不能超过染毒柜容积的5%，并能最大程度的接触受试物的挥发性物质。5.3.2试验过程中应连续监测染毒柜内的温度和相对湿度，染毒过程中温度应保持在20℃~26℃,相对湿度应保持在30%~70%。5.4试验步骤和观察指标5.4.1吸入染毒参照GB36246有关规定，设置受试物/染毒柜的载荷比为0.4m2/m3，合成材料运动场地面层成品根据上表面积计算，合成材料运动场地面层原料以建议铺装量（kg/m2）和工艺计算。取相应面积的合成材料运动场地面层成品或原料加热至（60±2）℃,维持1h。染毒期间，染毒柜内温度应维持在20℃~26℃,并停止供食给水。染毒组每日染毒至少1h，对照组动物除无受试物染毒外，其他处置均与染毒组相同。急性吸入染毒连续5d，亚急性吸入染毒连续28d。DB44/TXXXXX—XXXX35.4.2一般临床观察5.4.2.1染毒期间，每日至少进行1次临床观察，或者根据动物反应，增加观察频次。急性吸入染毒（5d）观察期至少14d。亚急性吸入染毒（28d）试验结束，追踪观察组（如设）继续观察至少14d，以评估毒性效应的持续性、可逆性或迟发性。5.4.2.2每日记录动物出现的中毒体征、程度和持续时间及死亡情况。观察内容见附录A和附录B。5.4.2.3试验期间，对每只濒死、死亡的动物，条件允许情况下应进行血液学检查、血液生化检查、大体解剖以及病理学检查，并分析原因。5.4.3体重和摄食量5.4.3.1急性吸入染毒（5d）试验：在第0d、第5d、第14d记录大鼠体重。5.4.3.2亚急性吸入染毒（28d）试验：每周记录大鼠体重和摄食量，计算食物利用率。试验结束时，计算动物体重增长量、总摄食量、总食物利用率。5.4.4临床检查亚急性吸入染毒（28d）试验结束后，实验动物应禁食过夜，麻醉后采血，用于血液学检查、血液生化检查。注：急性吸入染毒（5d）试验无需进行临床检查。5.4.4.1血液学检查亚急性吸入染毒（28d）试验在染毒结束、追踪观察（如设）结束进行血液学指标测定。测定指标应包含血细胞比容、血红蛋白浓度、红细胞计数、网织红细胞计数、白细胞计数和分类、血小板计数、凝血功能（凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间，必要时可增加凝血酶时间和纤维蛋白原）。如怀疑对血液系统有影响，应增加骨髓涂片细胞学检查。5.4.4.2血液生化检查亚急性吸入染毒（28d）试验在染毒结束、追踪观察（如设）结束进行血液生化指标测定。测定指标应包含钠、钾、葡萄糖、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、尿素、尿素氮、肌酐、总蛋白和白蛋白，以及至少两种反映肝功能的酶（如丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰基转移酶和山梨醇脱氢酶等）。必要时可根据所观察到的毒性作用进行其他更大范围的血液生化检查，测定指标可包括钙、磷、甘油三酯、特定激素、高铁血红蛋白和胆碱酯酶等。5.4.4.3尿液检查预期或观察到有肾毒性时应进行尿液检查，测定指标包含尿液外观、尿液量、尿比重、pH、尿蛋白、尿糖和潜血等。5.4.5病理学检查5.4.5.1应对所有实验动物进行大体解剖，包括在试验中死亡的、或出于动物福利原因被安乐死以及从试验中撤离的。记录每只动物肉眼可见的病变，并特别注意眼部、鼻腔、咽喉、气管、肺等器官和组织的改变。5.4.5.2急性吸入染毒（5d）试验结束，对所有动物进行大体解剖，对肉眼观察异常的器官和组织进行组织病理学检查。5.4.5.3亚急性吸入染毒（28d）试验结束，对所有动物的器官和组织进行称重和组织病理学检查：DB44/TXXXXX—XXXX4a）称重：对心脏、胸腺、肺、肝、脾、肾、肾上腺、卵巢、子宫、睾丸、附睾进行称重，并计算脏器系数（以g/100gBW或mg/100gBW表示）；b）组织病理学检查：大体解剖异常的器官，以及脑（包括延髓/脑桥、小脑和大脑皮层）、嗅球、眼（视网膜、视神经）及眼睑、鼻咽组织（至少4层，1层包括鼻咽管和鼻腔相关淋巴组织）、喉（包括会厌基底层在内的3层）、气管（至少2层，包括1个通过肺外支气管分叉处隆凸的纵切面和1个横切面）、甲状腺、心脏、胸腺、肺、肝、脾、肾、肾上腺、卵巢、子宫、睾丸、附睾。追踪观察组（如设）应检查染毒组有病变的器官和组织。5.4.6其他指标必要时，根据所观察的毒性反应，增加其他指标（如神经毒性、免疫毒性、内分泌毒性、精子活力等）的观察和评价。6数据处理和结果评价6.1数据处理将所有的数据和结果以表格形式进行总结，列出各组试验前的动物数、试验期间动物死亡数及死亡时间、出现毒性反应的动物数，列出所见的毒性反应，包括出现毒性效应的时间、持续时间及程度。对动物体重、摄食量、食物利用率、血液学检查、血液生化检查、尿液检查、脏器重量和脏器系数、病理学检查等结果应以适当的方法进行统计学分析。一般情况，计量资料采用T检验，分类资料采用Fisher精确分布检验、卡方检验、秩和检验，等级资料采用Ridit分析、秩和检验等。6.2结果评价6.2.1急性吸入染毒（5d）试验：若染毒组大鼠在试验期间未死亡，体重无下降或体重虽有下降，但观察期结束与对照组差异无统计学意义，则判定该合成材料运动场地面层吸入毒性合格，否则为不合格。6.2.2亚急性吸入染毒（28d）试验：若染毒组大鼠体重和摄食量、血液学指标、血液生化指标、尿液指标、脏器重量和脏器系数等结果与对照组差异无统计学意义，且病理学结果无异常，则判定该合成材料运动场地面层吸入毒性合格，否则为不合格。7试验报告试验报告应包括但不限于以下内容：a）试验名称、试验单位名称和联系方式、报告编号；b）试验委托单位名称和联系方式、样品受理日期；c）试验开始和结束日期、签发日期；d）受试物：名称、批号、状态（包装完整性、标识）、数量；e）实验动物：物种、品系、级别、数量、体重、性别、来源（供应商名称、实验动物生产许可证号），动物适应和检疫情况，实验动物使用许可证号，饲养环境（温度、相对湿度），饲料来源（供应商名称、饲料生产许可证号）；f）试验方法：试验分组、每组动物数、染毒时间、染毒条件（温度、相对湿度、换气次数、氧气体积分数等）、观察指标、统计学方法；g）试验结果：1）急性吸入染毒（5d）试验：实验动物死亡情况、一般临床观察情况、体重等结果；DB44/TXXXXX—XXXX52）亚性吸入染毒（28d）试验：实验动物死亡情况、一般临床观察情况、毒性反应、体重、摄食量、食物利用率、血液学检查、血液生化检查、尿液检查、脏器重量和脏器系数、病理学检查结果；h）试验结论。8试验结果的解释急性吸入染毒（5d）试验、亚急性吸入染毒（28d）试验能提供合成材料运动场地面层短期的吸入毒性资料。由于动物和人存在物种差异，试验结果外推到人存在一定的局限性。DB44/TXXXXX—XXXX6一般临床观察A.1一般临床观察急性吸入染毒（5d）试验、亚急性吸入染毒（28d）试验大鼠一般临床观察应按照表A.1进行。表A.1一般临床观察序号器官系统观察及检查项目中毒后一般表现01020304中枢神经系统及神经肌肉系统动作行为体位异常，叫声异常，不安或呆滞，反复抓挠口周，反复梳理，转圈，痉挛，麻痹，震颤，运动失调，甚至倒退行走或自残各种刺激的反应易兴奋，知觉过敏或缺乏知觉大脑及脊髓反射减弱或消失肌肉张力强直，弛缓0506植物神经系统瞳孔大小扩大或缩小分泌流涎，流泪0708呼吸系统鼻孔流液，鼻翼煽动呼吸性质和速率深缓，过速09心血管系统心区触诊心动过缓，心律不齐，心跳过强或过弱消化系统腹形气胀或收缩，腹泻或便秘粪便硬度和颜色粪便不成形，黑色或灰色泌尿生殖系统阴道，乳腺膨胀脱垂会阴部污秽，有分泌物皮肤和被毛颜色，张力发红，褶皱，松弛，皮疹血完整性竖毛黏膜黏膜流粘液，充血，出血性紫绀，苍白溃疡眼上睑下垂眼球突出或震颤，结膜充血，角膜混浊，晶状体混浊其他直肠或皮肤温度降低或升高一般情况消瘦DB44/TXXXXX—XXXX7