临床微生物学检验标本采集和送检指南

临床微生物学检验标本采集和送检指南临床微生物学检验是感染性疾病诊断的核心环节，其结果的准确性直接影响患者的治疗方案选择与预后。标本采集与送检作为检验流程的起点，是保证检验质量的关键步骤。规范的操作可有效减少污染、避免标本降解，确保病原体被正确分离鉴定。以下从采集前准备、各类标本采集规范、保存与运输要求及质量控制要点四方面进行详细阐述。一、采集前准备（一）患者准备1.抗生素使用评估：采集前应尽可能了解患者近期抗生素使用情况（包括种类、剂量、用药时间）。若已使用抗生素，需在病历中注明，以便实验室选择针对性培养基（如含抗生素中和剂的培养基）或调整培养条件。对于需长期使用抗生素的患者（如感染性心内膜炎），建议在下次给药前2小时采集，以提高阳性率。2.采样时机选择：根据感染类型确定最佳采集时间。发热患者优先在体温上升期（寒战初期）采集血液标本；呼吸道感染患者应在症状出现后3天内采集痰液，避免后期大量正常菌群覆盖病原体；尿路感染患者宜取晨起首次尿液，此时尿液在膀胱内停留时间长，细菌浓度较高。3.局部清洁与禁忌：采集体表或黏膜标本（如伤口、咽拭子）前，需用生理盐水清洁局部，去除表面污染物（如痰液采集前需漱口3次，避免唾液混入）。避免在患者进食、饮水后30分钟内采集口腔或呼吸道标本，以防食物残渣干扰。对于厌氧菌感染（如深部脓肿），需避免接触空气，采集后立即封闭容器。（二）医护人员准备操作前需进行严格手卫生（七步洗手法，时间≥40秒），穿戴无菌手套、口罩及隔离衣（接触开放性伤口或体液时）。参与采样的医护人员应接受定期培训，掌握不同标本的采集技巧（如血液培养的皮肤消毒方法）及常见污染菌的识别（如凝固酶阴性葡萄球菌在血液标本中多为污染菌）。（三）器材与标识准备1.容器选择：根据标本类型选择专用无菌容器。血液培养需使用需氧瓶与厌氧瓶（儿童可仅用需氧瓶），瓶内培养基应无抑菌成分；痰液、尿液等标本使用带螺旋盖的无菌广口瓶（容量≥50ml）；咽拭子、宫颈分泌物等使用含无菌运输培养基的拭子套装（如Amies培养基）；组织标本需用无菌生理盐水湿润的纱布包裹，置于密封袋中。2.标识规范：每个标本容器需粘贴唯一标识，内容包括患者姓名、住院号（或门诊号）、年龄、性别、采样时间、标本类型、临床诊断（如“肺炎”“尿路感染”）及送检目的（如“普通细菌培养”“厌氧菌培养”“真菌培养”）。标识信息需与申请单完全一致，避免因信息错误导致检验结果与患者不匹配。二、各类标本采集规范（一）血液标本血液培养是诊断菌血症、败血症的金标准，规范操作可显著提高阳性率。1.采集部位：成人首选肘静脉，次选股静脉（仅在其他部位不可用时）；儿童可选股静脉或头皮静脉。避免在静脉输液侧肢体采集，若无法避开，需在输液点上方20cm处采集。2.皮肤消毒：采用“三步法”：75%乙醇擦拭皮肤（直径≥8cm），待干30秒；1%~2%碘酊（或碘伏）以穿刺点为中心螺旋式消毒（直径≥10cm），待干60秒；再次用75%乙醇脱碘（避免碘剂残留抑制细菌生长）。3.采集量与次数：成人每次采集10~20ml（需氧瓶8~10ml，厌氧瓶5~10ml），儿童按1~2ml/kg（不超过5ml/瓶）。怀疑感染性心内膜炎时，24小时内采集3次（间隔≥1小时），每次从不同部位采集；其他菌血症患者首日采集2~3次。4.注意事项：避免将血液注入真空采血管后转移至培养瓶（可能导致补体激活或抗凝剂残留）；若患者已使用抗生素，可增加采集量或使用树脂中和培养基（如BDBACTECPlus需氧/厌氧瓶）。（二）呼吸道标本1.痰液：患者清晨用清水漱口3次（避免牙膏残留），深吸气后用力咳出气管深部痰液（而非唾液），置于无菌容器中（量≥1ml）。对于无痰或痰少患者，可雾化吸入0.9%氯化钠溶液（35~37℃）诱导排痰；儿童可用无菌棉拭子刺激咽部引发咳嗽后采集。2.咽拭子：用无菌拭子越过舌背，快速擦拭双侧腭弓、咽后壁及扁桃体隐窝（避免接触舌面），立即插入含运输培养基的管中（保持拭子湿润）。怀疑百日咳杆菌感染时，需使用专用的Regan-Lowe培养基拭子，采集后立即送检。3.支气管肺泡灌洗液（BALF）：经纤维支气管镜采集，灌洗量100~200ml（分3~5次注入），回收液≥50ml。标本需置于无菌容器中，避免震荡（防止细胞破坏释放酶类降解病原体）。（三）尿液标本1.中段尿：女性患者用温水清洗外阴（从前向后），用0.1%苯扎溴铵消毒尿道口；男性翻起包皮，消毒龟头及尿道口。排尿时弃去前段尿（约10ml），用无菌容器接取中段尿10~20ml，立即盖紧。2.导尿标本：严格无菌操作下插入导尿管，弃去前段尿后留取10~20ml（避免导尿管表面污染菌混入）。长期留置导尿管患者需更换新导尿管后采集，不可从集尿袋中直接取尿（袋中尿液可能因停留时间过长导致细菌过度生长）。3.耻骨上膀胱穿刺尿：仅用于中段尿采集困难的婴幼儿或厌氧菌培养。局部消毒后，用20ml注射器经皮肤穿刺膀胱，抽取5~10ml尿液（需避免穿入肠道或血管）。（四）脑脊液（CSF）1.采集时机：怀疑化脓性脑膜炎时，应在抗生素使用前采集；病毒性脑膜炎可在发病后3~5天采集（病毒载量较高）。2.操作规范：腰椎穿刺后，取第2管或第3管CSF（避免皮肤消毒液污染第1管），量5~10ml（细菌培养需≥1ml，真菌培养需≥2ml，抗酸染色需≥3ml）。3.注意事项：CSF对温度敏感，需立即送检（室温下≤30分钟）。怀疑新型隐球菌感染时，需取1mlCSF离心（3000转/分钟，10分钟）后取沉淀涂片；怀疑结核分枝杆菌感染时，需采集≥5mlCSF，离心后取沉淀接种罗氏培养基。（五）粪便标本1.常规采集：选取含黏液、脓血或稀便部分（量≥5g），置于无菌容器中（避免混入尿液或污水）。2.特殊病原体采集：怀疑霍乱弧菌时，用棉拭子蘸取米泔水样便，插入碱性蛋白胨水保存液；怀疑艰难梭菌时，采集新鲜稀便（不可用成形便），置于厌氧运输管中；怀疑寄生虫（如阿米巴滋养体）时，标本需保温（35~37℃），30分钟内送检（滋养体在低温下易死亡）。（六）分泌物与组织标本1.伤口分泌物：用无菌生理盐水清洁伤口表面（去除坏死组织及脓液），用拭子深入伤口基底部或边缘（避免接触正常皮肤）采集；脓肿标本需用无菌注射器抽取脓液（量≥1ml），注入厌氧运输瓶（排尽空气）。2.生殖道分泌物：女性宫颈分泌物需用窥阴器暴露宫颈，用无菌拭子擦去表面黏液，再用另一拭子插入宫颈管1~2cm旋转10秒；男性尿道分泌物采集前需禁尿2小时，用拭子插入尿道2~4cm旋转采集。3.组织标本：手术或活检获取的组织需立即置于无菌生理盐水中（避免干燥），量≥0.5g。怀疑真菌或分枝杆菌感染时，需取深部组织（避免表面污染），必要时研磨成匀浆后接种培养基。三、标本保存与运输（一）保存条件1.需氧菌与兼性厌氧菌：血液培养瓶、痰液、尿液等标本可室温保存（22~28℃），但需在2小时内送检；若延迟送检（>2小时），尿液需4℃保存（≤24小时），痰液需冷藏（4℃≤4小时）。2.厌氧菌：伤口分泌物、脓肿液等标本需立即放入厌氧运输装置（如厌氧袋或预还原培养基），室温保存不超过30分钟。3.苛养菌：流感嗜血杆菌、肺炎链球菌等对温度敏感，痰液、咽拭子需用含活性炭的运输培养基保存（4℃≤2小时）；百日咳杆菌标本需4℃保存（≤24小时），避免冷冻。4.病毒与衣原体：需用含抗生素（防止细菌污染）的病毒保存液（如Hank’s液），4℃保存（≤48小时）或-70℃冻存（长期）。（二）运输要求1.及时性：所有标本需在采集后2小时内送达实验室，特殊标本（如CSF、BALF）需30分钟内送检。2.安全性：标本容器需双层包装（内层无菌袋，外层防渗漏袋），标注“生物危害”标识。运输过程中避免剧烈震荡（防止容器破裂或细胞破坏）。3.记录与交接：运输人员需核对标本标识与申请单信息，填写交接记录（包括采集时间、接收时间、标本状态）。实验室接收时需检查标本是否符合要求（如痰液是否为脓性、血液培养瓶是否有渗漏）。四、质量控制要点（一）合格标本判定标准1.血液：培养瓶无渗漏，标识完整，采集量符合要求（成人≥10ml/瓶）。2.痰液：镜检鳞状上皮细胞<10个/低倍视野，中性粒细胞>25个/低倍视野（提示为深部痰液）。3.尿液：中段尿标本细菌计数≥10⁵CFU/ml（女性）或≥10⁴CFU/ml（男性）时需结合临床判断，若计数<10⁴CFU/ml且为单一菌，可能为污染。4.CSF：外观清亮或浑浊（化脓性脑膜炎呈米汤样），细胞计数与分类符合感染特征（如细菌感染以中性粒细胞为主）。（二）不合格标本处理对标识错误、容器渗漏、采集量不足（如血液<5ml/瓶）、保存不当（如CSF冷冻）或严重污染（如痰液鳞状上皮细胞>25个/低倍视野）的标本，实验室需及时通知临床重新采集，并记录原因。（三）持续改进临床与实验室需定期召开联席会议，分析