2025年大学（理学）生物化学实验试题及答案

2025年大学（理学）生物化学实验试题及答案

（考试时间：90分钟满分100分）班级______姓名______第I卷（选择题共30分）每题只有一个正确答案，请将正确答案的序号填在括号内。(总共10题，每题3分，每题只有一个选项符合题意)1.下列关于蛋白质定量测定方法的说法，错误的是（）A.凯氏定氮法是通过测定氮含量来推算蛋白质含量B.双缩脲法测定蛋白质时，蛋白质中的肽键在碱性条件下与铜离子结合产生紫色反应C.考马斯亮蓝法灵敏度高，是最常用的蛋白质定量方法之一D.紫外吸收法是利用蛋白质中色氨酸和酪氨酸残基在280nm处有特征吸收峰来测定蛋白质含量，不受核酸干扰2.在核酸提取过程中，常用的蛋白酶K的作用是（）A.水解蛋白质，去除与核酸结合的蛋白质B.降解核酸，使核酸释放出来C.促进核酸的沉淀D.保护核酸不被氧化3.以下哪种方法不能用于分离蛋白质（）A.离子交换层析B.亲和层析C.凝胶过滤层析D.纸层析4.测定酶活性时，反应体系中通常需要加入的物质不包括（）A.底物B.酶C.辅酶D.终止剂5.下列关于DNA变性的说法，正确的是（）A.变性后DNA的一级结构发生改变B.变性是由于磷酸二酯键断裂引起的C.变性后DNA在260nm处的吸光度会降低D.加热可导致DNA变性6.蛋白质的等电点是指（）A.蛋白质溶液的pH值等于7时的pH值B.蛋白质分子呈正离子状态时溶液的pH值C.蛋白质分子呈负离子状态时溶液的pH值D.蛋白质分子净电荷为零时溶液的pH值7.在PCR反应中，不需要的物质是（）A.模板DNAB.引物C.dNTPD.限制性内切酶8.下列关于凝胶过滤层析的说法，错误的是（）A.大分子物质先被洗脱出来B.小分子物质在凝胶颗粒内部扩散路径长，后被洗脱出来C.可根据分子大小对蛋白质等生物大分子进行分离D.凝胶颗粒的孔径大小对分离效果无影响9.测定血糖含量常用的方法是（）A.斐林试剂法B.葡萄糖氧化酶法C.碘量法D.重铬酸钾法10.下列关于蛋白质电泳的说法，错误的是（）A.不同蛋白质在电场中移动速度不同是因为其电荷和分子量不同B.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳可消除蛋白质分子原有电荷差异，按分子量大小分离C.琼脂糖凝胶电泳常用于分离分子量较大的核酸D.蛋白质电泳后常用考马斯亮蓝染色，而核酸电泳后常用溴化乙锭染色第II卷（非选择题共70分）1.填空题(总共5题，每题4分，每空2分)-蛋白质的二级结构主要有α-螺旋、β-折叠、β-转角和______四种基本类型。-DNA的双螺旋结构中，两条链的走向是______。-酶的活性中心包括结合部位和______部位。-常用的核酸沉淀剂有______和乙醇（写出一种即可）。-蛋白质的一级结构是指______的排列顺序。2.简答题(总共3题，每题10分)-简述蛋白质变性的本质及影响因素。-说明PCR技术的原理及反应过程。-如何测定酶促反应的米氏常数（Km）？3.实验设计题(1题，20分)设计一个实验，从动物肝脏中提取DNA，并进行纯度和浓度的测定。请简要说明实验步骤和所用到的试剂及仪器。4.材料分析题(1题，15分)材料：在研究某种酶的活性时，进行了如下实验。将酶溶液与不同浓度的底物溶液混合，在适宜温度和pH条件下反应一定时间后，测定产物生成量。得到如下数据：|底物浓度（mmol/L）|产物生成量（mmol）||----|----||0.1|5||0.2|10||0.3|15||0.4|18||0.5|20||0.6|20|分析底物浓度对酶活性的影响，并解释原因。5.论述题(1题，15分)论述生物化学实验在生命科学研究中的重要性。答案：第I卷答案1.D2.A3.D4.D5.D6.D7.D8.D9.B10.C第II卷答案1.填空题答案-无规卷曲-反向平行-催化-醋酸钠-氨基酸残基2.简答题答案-蛋白质变性的本质是蛋白质分子的空间结构被破坏，导致其理化性质改变和生物活性丧失。影响因素包括物理因素（如加热、紫外线、X射线等）、化学因素（如强酸、强碱、重金属盐、有机溶剂等）。-PCR技术的原理是在模板DNA、引物、dNTP和DNA聚合酶等存在的条件下，通过高温变性、低温退火和适温延伸三个步骤的循环，使目的DNA片段得以迅速扩增。反应过程：变性阶段，将模板DNA加热至95℃左右，使其双链解开；退火阶段，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链结合；延伸阶段，温度升至72℃左右，DNA聚合酶以dNTP为原料，从引物的3'端开始延伸合成新的DNA链。-测定酶促反应的米氏常数（Km）常用双倒数作图法（Lineweaver-Burk作图法）。将酶促反应速度方程1/v=Km/(Vmax[S])+1/Vmax进行变形，以1/v为纵坐标，1/[S]为横坐标作图，所得直线的斜率为Km/Vmax，截距为1/Vmax，进而可求出Km值。也可用其他方法如直接线性作图法等。3.实验设计题答案实验步骤：-取新鲜动物肝脏，剪碎后加入适量的匀浆缓冲液，在冰浴中匀浆。-将匀浆液离心，取上清液。-向上清液中加入适量的蛋白酶K和SDS，在55℃水浴中保温一段时间，使蛋白质变性。-加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混合液，振荡混匀，离心，取上清液。-向上清液中加入2倍体积的无水乙醇，轻轻混匀，DNA沉淀析出，离心收集沉淀。-用70%乙醇洗涤沉淀，干燥后溶于适量TE缓冲液中。试剂：匀浆缓冲液、蛋白酶K、SDS、酚/氯仿/异戊醇混合液、无水乙醇、TE缓冲液。仪器：离心机、水浴锅、移液器等。-纯度测定：采用紫外分光光度法，测定260nm和280nm处的吸光度，计算A260/A280比值，判断DNA纯度。-浓度测定：根据A260的值，利用公式计算DNA浓度，公式为：DNA浓度（μg/μL）=50×A260×稀释倍数。4.材料分析题答案随着底物浓度的增加，酶促反应的产物生成量逐渐增加。当底物浓度较低时，底物浓度的增加对产物生成量的影响较大，酶促反应速度随底物浓度的增加而迅速上升。当底物浓度达到一定程度后，产物生成量不再明显增加，酶促反应速度趋于稳定。这是因为在底物浓度较低时，酶分子有较多的活性中心未被底物占据，增加底物浓度可以使更多的酶与底物结合，从而加快反应速度。当底物浓度足够高时，所有的酶活性中心都已被底物饱和，此时再增加底物浓度，反应速度也不会进一步加快。5.论述题答案生物化学实验在生命科学研究中具有极其重要的地位。它是揭示生命现象本质、探索生命活动规律的关键手段。通过生物化学实验，我们可以分离、纯化生物大分子，如蛋白质、核酸等，深入研究它们的结构和功能，从而了解生命过程的分子机制。例如，通过蛋白质纯化技术获得某种酶，研究其催化特性，有助于理解相关代谢途径。生物化学实验还能定量分析生物分子的含量和活性，为生命科学研究提供准确的数据支持。在疾病诊断和