DB54T 0573-2026 西藏羊胚胎移植技术规程

ICS65.020.30CCSB4354IDB54/T0573—2026 2规范性引用文件 3术语和定义 4材料与方法 4.1实验室准备 4.2供体羊的选择 4.3受体羊的选择 4.4饲养管理 4.5同期发情 4.6超数排卵 4.7供体母羊发情鉴定 4.8人工输精 4.9胚胎采集 4.10胚胎移植 4.11术后护理 4.12术后饲养 4.13早期妊娠诊断 附录A（资料性）同期发情、超数排卵药品 附录B（资料性）常规耗材 附录C（资料性）胚胎移植设备 附录D（资料性）受体绵羊胚胎移植流程 附录E（资料性）胚胎鉴定 附录F（资料性）供体羊冲胚记录 附录G（资料性）受体羊移植记录 DB54/T0573—2026本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由西藏自治区农业农村标准化技术委员会提出并归口。本文件起草单位：西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所。本文件主要起草人：德庆卓嘎，杨燕燕，乌达巴拉，李秀男，格桑加措，陈鑫艳，洛桑催成，平措班旦，扎西央吉，巴桑吉巴，次仁曲珍，张立，任越。DB54/T0573—20261西藏羊胚胎移植技术规范本文件按照西藏地区饲养的本地绵羊胚胎移植技术中试剂耗材的使用、供体羊的选择与饲养管理、同期发情、超数排卵、发情鉴定、人工输精、胚胎采集及新鲜胚胎移植、受体母羊选择、术后管理和饲养以及早期妊娠诊断等技术的术语和定义、方法及操作流程。本文件适用于西藏绵羊胚胎移植。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T826绵羊胚胎移植技术规程NY/T1571羊胚胎移植技术规程NY/T1674牛羊胚胎质量检测技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1胚胎移植指将母羊（供体）体内的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状况相同的母羊（受体）体内，使之继续发育为新个体的技术。3.2供体羊指经超数排卵、同期发情等人工调控后，为胚胎移植提供遗传物质（精子或胚胎）的特异性羊只。3.3受体羊指生殖系统机能健全、经同期发情处理后生理状态与供体羊协同的雌性羊只，是胚胎着床与发育的生理载体。4材料与方法4.1实验室准备4.1.1试剂、药品试剂药品详情参见附录A，附录B。DB54/T0573—202624.1.2设备、耗材设备耗材详情参见附录C。4.2供体羊的选择4.2.1品种选择选择品种优良、生产性能良好、具有较高的经济价值和育种价值、适应高原地区的优良绵羊品种。4.2.2母羊的选择（1）符合本品种特征，遗传背景明确、系谱清晰、体质健壮、体况良好；（2）年龄在2周岁～5周岁，体重35kg～40kg，经产母羊；（3）繁殖机能正常，无遗传性及传染性疾病；（4）经产母羊产后90d以上，羔羊已断奶，生殖机能恢复正常的空怀母羊；（5）重复超数排卵间隔时间在60d以上。4.2.3公羊的选择（1）符合品种标准，遗传性稳定，系谱清楚，体质健壮、中等及以上膘情；（2）年龄在2周岁～5周岁，睾丸发育良好，性欲旺盛，精液质量合格的公羊。4.3受体羊的选择受体羊的选择应符合以下要求：（1）空怀母羊；（2）选择无繁殖障碍，体格发育正常，健康，无传染性疾病，经产母羊；（3）年龄在2周岁～5周岁，经观察后有两个正常发情周期的母羊。4.4饲养管理将供体羊、受体羊应与其他羊只分开，进行分群舍饲，并提供科学的饲养管理，以确保其体况健康、繁殖机能正常。具体管理要求如下：（1）供体羊：超数排卵前30天起补饲，日粮粗蛋白质14%～16%，代谢能≥10MJ/kg。小群管理，确保圈舍卫生与通风，在诱情、超排及采卵等关键节点避免应激。（2）受体羊：移植前30天补饲，保证日粮能量与蛋白质水平，新引进受体羊须经隔离观察、驱虫（伊维菌素等）与免疫（口蹄疫、小反刍兽疫等）程序，适应环境且发情周期正常后方可使用。（3）配种公羊：维持膘情，日粮补充足量蛋白质及维生素A、E，保障精液品质，试情时，对公羊或母羊采取物理隔配措施，严防计划外配种。4.5同期发情母羊发情周期的任意一天放置孕酮栓（PIDR-孕酮海绵栓或CIDR-孕酮缓释硅胶栓羊胚胎移植方案参见附录D。4.6超数排卵以母羊发情之日作为发情周期的第0d，在母羊发情周期的第10d开始，每天早、晚各注射1次FSH，连续3d，递减注射，在第13d注射FSH（促卵泡素）时，同时肌肉注射PMSG（孕马血清促性腺激素）。确DB54/T0573—20263定供体羊发情后开始配种，并注射LH（促黄体生成素）。如果FSH未注射完供体羊已发情，停止注射FSH（促卵泡素），立即注射LH（促黄体生成素）。4.7供体母羊发情鉴定超数排卵处理后开始观察发情，以母羊站立接受试情公羊爬跨做为发情标准。发情观察早中晚各1次，每次不少于0.5h。做好发情记录。4.8人工输精在供体母羊发情后12h～24h进行人工输精，输精两次，间隔8h～12h。具体输精操作按照NY/T826和NY/T1571执行。4.9胚胎采集4.9.1供体羊保定供体羊仰卧在手术架上，固定四肢。4.9.2供体羊准备肌肉注射2%静松灵0.5ml，局部用0.5%盐酸普鲁卡因麻醉，对乳房前腹中线部或后肢股内侧腹股沟部剪毛消毒。4.9.3冲胚时间供体母羊发情后6d～7.5d内采用子宫角冲胚法进行冲胚。4.9.4冲胚用肠钳夹在子宫角分叉处，注射器吸入预热的冲胚液（生理盐水、葡萄糖、氨基酸、维生素等组成）50ml～60ml，冲卵针头从子宫角尖端插入，当确认针头在管腔内且进退通畅时，将回收卵针头从肠钳钳夹基部的上方迅速扎入，冲胚液经硅胶管收集于烧杯内，最后用两手拇指和食指轻轻挤压子宫角。另一侧同样方法冲洗。冲胚完毕后，用25℃~30℃的生理盐水将子宫冲洗干净。供体母羊创口采用三层缝合法。即腹膜、肌肉连续缝合；皮肤结节缝合，针脚间距1cm。在肌肉与皮肤间喷洒适量青、链霉素，以防创口感染。4.9.5检胚（1）在35mm的培养皿中注入胚胎保存液，放在恒温台上预热；（2）将收集到的冲胚液移至体视显微镜下，检出胚胎，移入35mm的培养皿中；（3）每个培养皿在显微镜下重复检查3次，检出培养皿中所有胚胎。4.9.6胚胎鉴定在20倍～40倍体视显微镜下观察胚胎的形态、颜色、分裂球的大小、均匀度、细胞的密度、与透明带的间隙以及变性情况。具体胚胎发育阶段和质量鉴定，参见附录E。A、B级胚胎均可用于鲜胚移植，C级不用。鉴定后的胚胎做好记录，包括羊号、胚胎发育阶段、质量等信息，参见附录F，具体胚胎鉴定按照NY/T1674执行。4.10胚胎移植DB54/T0573—202644.10.1受体羊同期发情在受体母羊生殖道内植入孕酮栓PIDR（孕酮海绵栓）或CIDR（孕酮缓释硅胶栓），15d～17d撤栓，同时按每只羊肌肉注射PMSG200IU/只～2500IU/只（PMSG-孕马血清促性腺激素撤栓24h～48h内进行胚胎移植。4.10.2受体羊的保定将受体羊仰卧于保定架上，按每公斤体重静脉注射0.01ml～0.02ml2%盐酸塞拉唑，并对手术部位进行剃毛消毒。4.10.3移植过程（1）常规手术法a）输卵管移植时，将有黄体一侧的输卵管伞部拨开，找到管口，把装有胚胎的移植器从此插入3cm~4cm，然后将胚胎轻轻推出即可，操作中不可用力牵拉卵巢，不能触摸黄体；b）子宫角移植时，将较好一侧黄体的子宫拉出，避开血管，在子宫角打孔，把装有胚胎的移植器从此插入子宫腔内，伸至子宫角尖端后将胚胎轻轻推出即可。(2)腹腔内窥镜法a)用手术刀片在腹中线两侧，距离乳房2cm处，各切1cm～1.5cm的小口；b)用与腹腔镜配套的专用穿刺器将腹膜、肌肉打通，在两侧刀口放入腹腔镜和子宫钳；c）在子宫不暴露于体外的情况下，利用腹腔镜观察卵巢上黄体发育情况；d）用子宫钳夹住黄体较好侧子宫角尖端系膜并将其拉出，避开血管，在子宫角打孔；将装有胚胎的移植枪超子宫角方向推出胚胎。4.11术后护理术后创口处理及观察要求如下：（1）供体冲胚完毕后，用37℃灭菌生理盐水湿润母羊子宫，冲去凝血块，器官复位，腹腔内倒入250mL37℃灭菌生理盐水；（2）腹膜、肌肉层采用连续缝合后撒适量青霉素粉，皮肤层采用结节缝合法缝合后伤口用碘酒消（3）从手术当天开始每天早晚对肌肉注射青霉素、链霉素各80万IU，同时用碘酒对伤口进行消毒，连续3d，第7d可拆线；（4）受体羊移植胚胎后，将子宫角复位即可缝合，方法和供体羊一致，缝合完毕后肌肉注射孕酮2mL和青霉素、链霉素各80万IU；（5）供体、受体羊术后观察48h，一周后无异常合群放牧或与其他羊只混群；（6）如有卧地不起、弓背症状或不进食不排便的现象，应及时检查创口缝合情况，给予必要治疗或重新缝合。4.12术后饲养供体、受体羊术后护理应注意以下事项：（1）术后供体、受体羊应单群饲养、专人管理；初期，饲喂干草并提供清洁的饮水，以加盐的温水为宜；（2）术后3d，恢复术前精料饲喂量；DB54/T0573—20265（3）受体羊需补充维生素与矿物质，同时强化饲养管理，减少应激反应。术后1个～2个发情周期内，需密切观察受体羊返情情况，若出现返情，应及时安排配种或下次移植；若2个发情周期未返情，可初步判定为妊娠，妊娠羊需进一步加强饲养管理，重点满足其对蛋白质的营养需求；（4）做好妊娠母羊的助产、产羔记录和羔羊培育工作；（5）产羔记录应包括产羔母羊耳号、供体耳号、配种公羊耳号、产羔日期、羔羊数量、羔羊初生重、羔羊健康状况等。4.13早期妊娠诊断采用超生波诊断仪（B超）进行早期的妊娠诊断，对移植后25d以上的受体羊可用B超检查。利用探头在羊只腹部子宫部位移动，在荧光屏上便可观察到周围黑色中间有一个长1cm～2cm灰白色图像，即是胎儿。60日龄时胎儿长为6cm～7cm，90日龄时胎儿长为14cm～17cm。受体成功，加强营养、做好环境管理、密切监测健康与进行孕期检查；未受体母羊的进行再次配种。DB54/T0573—20266（资料性）同期发情、超数排卵药品同期发情、超数排卵耗材详见表A.1。表A.1同期发情、超数排卵药品序号名称用途1孕酮栓供、受体羊同期发情。2促卵泡素(FSH)供体羊超数排卵3孕马血清促性腺激素(PMSG)供、受体羊同期发情4促黄体素释放激素(LH)供体羊同期排卵5冲胚液子宫角冲胚6胚胎保存液(Holding)胚胎体外保存DB54/T0573—20267常规耗材同期发情、超数排卵耗材详见表B.1。表B.1同期发情、超数排卵耗材1手术器械1套供、受体羊手术2消炎粉手术创口消炎3缝合线手术创口缝合4冲卵管子宫角冲胚5冲卵针子宫角冲胚6胚胎移植枪受体羊移植胚胎用790mm培养皿收集冲胚液用835mm培养皿胚胎保存和质量鉴定975%酒精手术部位消毒碘酊手术部位消毒抗生素供、受体羊手术后抗感染8胚胎移植设备胚胎移植设备详见表C.1。表C.1胚胎移植设备序号名称用途1移动紫外灯实验室消毒2水浴锅生理盐水和冲胚液加热、保温3手术床供、受体羊保定4生物显微镜精子活力检查5腹腔内窥镜输精和移植胚胎用6体视显微镜检胚和胚胎质量鉴定7恒温台胚胎恒温操作9（资料性）受体绵羊胚胎移植流程受体绵羊胚胎移植流程详见表D.1。表D.