中医药配方制备实验详细报告

中医药配方制备实验详细报告一、实验背景与目的益气养血复方源于中医“气血双补”理论，由黄芪、当归、白芍、熟地黄等药味组成，临床用于气血不足证的调理。本次实验围绕该复方的中药制剂制备展开，旨在优化提取与成型工艺参数，建立科学的质量控制体系，并考察制剂稳定性，为其产业化生产及临床应用提供可靠技术依据。二、实验材料（一）药材与试剂1.药材：黄芪（甘肃产，经XX中药鉴定中心鉴定符合《中国药典》2020年版一部标准）、当归（甘肃产，鉴定同前）、白芍（安徽产，鉴定同前）、熟地黄（河南产，鉴定同前），药材经净选、炮制后备用。2.试剂：乙醇（分析纯，XX试剂公司）、甲醇（色谱纯，XX公司）、黄芪甲苷对照品（中检院，批号XXX）、芍药苷对照品（中检院，批号XXX）、硅胶G（青岛海洋化工厂）、10%硫酸乙醇溶液（自制）。（二）仪器设备煎煮锅（XX牌，型号XXX）、超声波提取仪（XX牌，KQ-500DE）、旋转蒸发仪（XX牌，RE-52AA）、高效液相色谱仪（XX牌，LC-20AT）、薄层色谱展开缸（XX牌）、恒温恒湿箱（XX牌，LHS-100CL）、颗粒剂成型机（XX牌，XX型）、微生物限度检测仪（XX牌，XX型）。三、实验方法（一）药材前处理按处方比例称取药材（黄芪30g、当归15g、白芍15g、熟地黄15g，共75g/剂），黄芪切厚片，当归、白芍切薄片，熟地黄蒸制后切厚片，备用。（二）提取工艺优化采用水提醇沉法提取有效成分，通过单因素试验结合正交试验优化工艺：1.单因素试验：加水量：考察加水量为药材量的6倍、8倍、10倍时，黄芪甲苷的提取率（HPLC法测定）。煎煮时间：考察煎煮时间1h、1.5h、2h对提取率的影响。煎煮次数：考察煎煮1次、2次、3次对提取率的影响。2.正交试验：选取加水量（A：6倍、8倍、10倍）、煎煮时间（B：1h、1.5h、2h）、煎煮次数（C：1次、2次、3次）为因素，设计L₉(3⁴)正交表，以黄芪甲苷和芍药苷总提取率为评价指标，确定最佳提取工艺。（三）纯化与浓缩提取液经纱布过滤，合并滤液，减压浓缩至相对密度1.10~1.15（60℃测）；加乙醇使含醇量达70%，冷藏（4℃）24h，抽滤；滤液回收乙醇并浓缩至稠膏（相对密度1.30~1.35，60℃测）。（四）颗粒剂成型工艺以稠膏为原料，考察辅料种类（糊精、甘露醇、蔗糖）和辅料比例（稠膏:辅料=1:1、1:2、1:3）对颗粒成型性的影响，采用湿法制粒：1.制软材：稠膏与辅料混合，加适量乙醇-水溶液（体积比1:1）制软材，以“手握成团，轻压即散”为度。2.制粒与干燥：过16目筛制粒，置60℃烘箱干燥至水分≤5%，过12目筛整粒。3.质量评价：测定颗粒的休止角（≤40°为合格）、脆碎度（≤5%为合格）、溶化性（5min内全部溶化或分散为合格）。（五）质量控制1.定性鉴别（TLC）：取颗粒粉末0.5g，加甲醇20ml超声提取30min，滤过、蒸干，残渣加水溶解后正丁醇萃取，蒸干后加甲醇溶解，作为供试品溶液。另取黄芪对照药材、黄芪甲苷对照品同法制成对照溶液。照薄层色谱法试验，供试品色谱中应与对照药材、对照品色谱相应位置显相同颜色斑点。2.定量测定（HPLC）：色谱条件：C₁₈柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相甲醇-水（32:68）；检测波长280nm；柱温30℃；流速1.0ml/min。供试品制备后，按外标法计算黄芪甲苷（≥0.2%）、芍药苷（≥0.5%）含量。3.常规检查：水分（≤5%，烘干法）、粒度（不能通过一号筛与能通过五号筛的总和≤15%）、微生物限度（细菌数≤1000cfu/g，霉菌和酵母菌数≤100cfu/g，不得检出大肠杆菌）。（六）稳定性考察1.影响因素试验：取三批颗粒剂，置高温（60℃）、高湿（RH90%±5%）、强光（4500lx±500lx）条件下放置10天，于第0、5、10天取样检测。2.加速试验：取三批颗粒剂，置40℃±2℃、RH75%±5%的恒温恒湿箱中，放置6个月，每月取样检测。3.长期试验：取三批颗粒剂，置25℃±2℃、RH60%±10%的条件下，放置12个月，每3个月取样检测。四、实验结果（一）提取工艺优化结果1.单因素试验：加水量8倍时提取率最高（黄芪甲苷提取率达82.3%）；煎煮时间1.5h提取率最优；煎煮2次时提取率显著高于1次（P<0.05），与3次无统计学差异（P>0.05）。2.正交试验：因素影响顺序为A（加水量）>C（煎煮次数）>B（煎煮时间），最佳工艺为8倍量水、煎煮2次、每次1.5h，验证试验中总提取率达89.7%（RSD=1.2%，n=3）。（二）成型工艺结果辅料选择甘露醇（吸湿性低），稠膏:甘露醇=1:2时，颗粒休止角38.5°（<40°）、脆碎度3.2%（<5%）、溶化时间3.5min（<5min），成型性最佳。（三）质量控制结果1.TLC鉴别：供试品色谱中与黄芪对照药材、黄芪甲苷对照品相应位置显清晰棕褐色斑点，阴性对照（缺黄芪）无此斑点，专属性强。2.HPLC测定：三批样品黄芪甲苷含量0.21%~0.23%，芍药苷含量0.54%~0.57%，均符合质量要求。3.常规检查：水分3.8%~4.2%，粒度合格率92%~95%，微生物限度符合规定。（四）稳定性考察结果1.影响因素试验：高温（60℃）10天后，黄芪甲苷含量下降3.2%，芍药苷下降2.8%，仍符合标准；高湿条件下颗粒吸潮粘连（提示需防潮包装）；强光对含量影响<2%。2.加速试验：6个月后，含量下降≤5%，微生物限度无明显变化，性状无异常。3.长期试验：12个月后，含量下降≤8%，各项指标符合质量标准，稳定性良好。五、讨论本次实验通过单因素与正交试验优化了提取工艺，8倍量水、煎煮2次、每次1.5h的条件能有效提高有效成分提取率，且操作简便、成本可控。成型工艺中选择甘露醇作为辅料，解决了颗粒吸潮问题，保证了制剂稳定性。质量控制方面，TLC鉴别专属性强，HPLC定量方法准确可靠，可有效控制制剂质量。稳定性考察提示：制剂在高温、强光下稳定性较好，但高湿环境易吸潮，建议采用铝塑泡罩或防潮包装，并注明“密封，置干燥处”。实验不足：未考察不同产地药材对提取率的影响，后续可扩大药材来源验证；成型工艺仅探索了颗粒剂，可进一步研究胶囊剂、片剂等剂型的可行性。六、结论本实验成功优化了益气养血复方的制备工艺：提取工艺：8倍量水煎煮2次，每次1.5h，醇沉（含醇量70%）；成型工艺：稠膏与甘露醇按1:2比例混合，湿法制粒（60℃干燥）；质量标准：明确TLC鉴别、HPLC定量及常规检查要求；稳定性：加速试验6个月、长期试验12个月内质量可控。该工艺可为益气养