单克隆抗体的制备20250417

单克隆抗体的制备1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒发明了单克隆抗体的制备技术，于1984年获得了诺贝尔生理学或医学奖。科学思维：采用模型与建模的方法，阐明单克隆抗体的制备过程。生命观念：通过学习杂交瘤细胞的筛选原理，强化生命的物质观和结构功能观。社会责任：了解单克隆抗体在医学领域上的应用，认同其优势和发展潜力。学习目标：视频视频-抗癌单抗药物提出问题如何获得单克隆抗体？传统抗体制备方法抗原传统抗血清（多种抗体混合）免疫1

1234缺陷：产量低、纯度低，特异性差。如何解决上述缺陷呢？资料（P49）：①小鼠在外界环境中会接触多种抗原，体内产生的特异性抗体种类多达百万种以上②每个B淋巴细胞（浆细胞）只分泌一种特异性的抗体每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体单一B淋巴细胞单一B淋巴细胞群选择克隆产生大量纯度高特异性强的抗体（单克隆抗体）克隆单一的B淋巴细胞，形成B淋巴细胞群，由细胞群产生大量的纯度高的抗体一个正常的B淋巴细胞不可能无限增殖的。怎样才能使B细胞在产生抗体的同时，具备无限增殖能力呢？大量制备单一抗体的思路：一个极富创造力的方案：动物细胞融合杂交瘤细胞动物细胞培养单克隆抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖一个B淋巴细胞能分泌专一特异性抗体既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒发明了单克隆抗体的制备技术，于1984年获得了诺贝尔生理学或医学奖。①用特定抗原对小鼠进行免疫的原因？②从免疫小鼠脾脏中得到的B淋巴细胞是否都能产生抗特定抗原的特异性抗体？③骨髓瘤细胞、免疫的B淋巴细胞各有何特点？④

免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后，得到的细胞是否都是杂交瘤细胞？杂交瘤细胞有何特点？单克隆抗体的制备过程活动一：请大家结合教材P48—49相关内容，以小组为单位，讨论单克隆抗体制备过程(2min)，回答下列问题活动二：建构模型（5min）尝试利用下列素材构建单克隆抗体制备流程图（用素材+箭头的形式）特定抗原免疫小鼠体外培养或注射到小鼠腹腔培养骨髓瘤细胞诱导融合B2B3B1瘤瘤瘤瘤B2瘤B3瘤瘤瘤B1特定培养基筛选克隆化培养和抗体检测B1瘤瘤瘤瘤单克隆抗体BnBnBn单克隆抗体的制备过程①用特定抗原对小鼠进行免疫的原因？②从免疫小鼠脾脏中得到的B淋巴细胞是否都能产生抗特定抗原的特异性抗体？③骨髓瘤细胞、免疫的B淋巴细胞各有何特点？④

免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后，得到的细胞是否都是杂交瘤细胞？杂交瘤细胞有何特点？⑤杂交瘤细胞是如何筛选出来的？⑥是否所有的杂交瘤细胞都能产生所需的抗体？单克隆抗体的制备过程拓展：杂交瘤细胞的筛选通常用HAT培养基,其中含有次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶核苷3种关键成分。哺乳动物正常细胞的DNA合成有D和S两条途径,淋巴细胞中虽有D途径和S途径,但一般不分裂增殖;鼠骨髓瘤细胞虽只有D途径,但能不断分裂增殖。氨基蝶呤可阻断D途径,S途径需要HGPRT和TK两种酶的参与,以催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷用于DNA合成。据此分析,HAT培养基上只有

细胞能生长,其他类别细胞不能生长的原因是，该类细胞能生长的原因是

。杂交瘤细胞是如何筛选出来的？（第1次筛选）请大家阅读下列相关内容，以小组为单位，讨论(2min)，尝试回答问题单克隆抗体的制备过程方法：用培养液

稀释培养杂交瘤细胞(多种)每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞抗原—抗体杂交抗原—抗体特异性结合原理：抗体检测呈

阳性的杂交瘤细胞

多孔细胞培养板阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。克隆化培养和抗体筛选（第2次筛选）是否所有的杂交瘤细胞都能产生所需的抗体？单克隆抗体第二次筛选杂交细胞多种杂交瘤细胞体外或体内培养第一次筛选骨髓瘤细胞

诱导融合分泌特异抗体的杂交瘤细胞杂交瘤细胞群提取免疫的多种B淋巴细胞既能大量繁殖又能产生抗体注射抗原小结：单克隆抗体的制备过程肿瘤是引起老龄犬死亡的主要原因之一,宠物肿瘤治疗目前仍以手术、放疗、化疗为主。研究发现,cPD-1单克隆抗体可用于进行肿瘤免疫治疗。下图是通过小鼠杂交瘤细胞制备cPD-1单克隆抗体的流程。请回答下列问题:(1)如图所示,从小鼠脾脏中获取已免疫的B淋巴细胞之前,需要用

注射多只小鼠。(2)图中①表示诱导细胞融合,动物细胞特有的融合方法是

_。(3)图中③进行的原理是

。巩固新知cPD-1灭活病毒诱导法抗原抗体特异性结合（2020·江苏·高考真题）新型冠状病毒可通过表面的棘突蛋白（S蛋白）与人呼吸道黏膜上皮细胞的ACE2受体结合，侵入人体，引起肺炎。图2为筛选、制备抗S蛋白单克隆抗体的示意图。请据图回答下列问题：据图2所示，研制抗S蛋白单克隆抗体，需先注射

免疫小鼠以激活小鼠的免疫细胞，再提取激活的B细胞与骨髓瘤细胞融合，用HAT培养基筛选获得

细胞。因为同一种抗原可能激活

细胞