2025 年大学生物科学（分子生物学实验）上学期期末测试卷

2025年大学生物科学（分子生物学实验）上学期期末测试卷

（考试时间：90分钟满分100分）班级______姓名______一、选择题（总共10题，每题3分，每题只有一个正确答案，请将正确答案填写在括号内）1.在分子生物学实验中，用于提取DNA的常用试剂是（）A.乙醇B.氯仿C.异丙醇D.蛋白酶K2.以下哪种技术可用于检测特定基因的表达水平（）A.PCRB.WesternblotC.NorthernblotD.Southernblot3.限制性内切酶的作用是（）A.合成DNAB.切割DNAC.连接DNAD.修饰DNA4.构建重组DNA分子时，常用的载体是（）A.质粒B.噬菌体C.病毒D.以上都是5.进行PCR反应时，需要的酶是（）A.DNA聚合酶B.RNA聚合酶C.逆转录酶D.限制性内切酶6.在DNA测序中，常用的方法是（）A.Sanger法B.化学降解法C.焦磷酸测序法D.以上都是7.用于蛋白质分离的技术是（）A.SDSB.离子交换色谱C.亲和色谱D.以上都是8.以下哪种方法可用于检测蛋白质与DNA的相互作用（）A.凝胶迁移实验B.染色质免疫沉淀C.酵母双杂交D.以上都是9.在分子生物学实验中，常用的缓冲液是（）A.Tris-HClB.PBSC.TED.以上都是10.以下哪种技术可用于基因编辑（）A.CRISPR/Cas9B.TALENsC.ZFNsD.以上都是二、多项选择题（总共5题，每题5分，每题有两个或两个以上正确答案，请将正确答案填写在括号内）1.分子生物学实验中常用的仪器有（）A.离心机B.移液器C.PCR仪D.凝胶成像系统2.以下哪些方法可用于DNA的定量（）A.紫外分光光度法B.荧光定量PCRC.凝胶电泳D.Bradford法3.在构建重组DNA分子时，需要用到的工具酶有（）A.限制性内切酶B.DNA连接酶C.逆转录酶D.碱性磷酸酶4.以下哪些技术可用于蛋白质的纯化（）A.离子交换色谱B.凝胶过滤色谱C.亲和色谱D.疏水相互作用色谱5.分子生物学实验中常用的检测方法有（）A.凝胶电泳B.免疫印迹C.荧光定量PCRD.基因测序三、判断题（总共10题，每题2分，请判断下列说法是否正确，正确的打“√”，错误的打“×”）1.在分子生物学实验中，所有的操作都需要在无菌条件下进行。（）2.PCR反应中，引物的设计对扩增结果没有影响。（）3.限制性内切酶可以识别特定的DNA序列，并在该序列处切割DNA。（）4.构建重组DNA分子时，载体和目的基因的连接是随机的。（）5.Westernblot可用于检测蛋白质的分子量和表达水平。（）6.在DNA测序中，Sanger法是最常用的方法。（）7.蛋白质分离技术中，SDS可以根据蛋白质的电荷和分子量进行分离。（）8.凝胶迁移实验可用于检测蛋白质与DNA的相互作用。（）9.在分子生物学实验中，常用的缓冲液可以随意配制。（）10.CRISPR/Cas9技术可用于对特定基因进行编辑。（）四、简答题（总共3题，每题10分）1.简述PCR反应的基本原理和步骤。2.请说明构建重组DNA分子的主要步骤和方法。3.简述蛋白质免疫印迹（Westernblot）的原理和操作流程。五、实验设计题（总共1题，20分）设计一个实验，从细胞中提取总RNA，并检测某个基因的表达水平。请详细描述实验步骤、所用试剂和仪器，以及预期结果。答案：一、选择题1.B2.C3.B4.D5.A6.D7.D8.A9.D10.D二、多项选择题1.ABCD2.AB3.AB4.ABCD5.ABCD三、判断题1.×2.×3.√4.×5.√6.√7.√8.√9.×10.√四、简答题1.PCR反应的基本原理是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。步骤包括：变性，将模板DNA加热至95℃左右使其变性解链；退火，降温至合适温度，使引物与模板互补序列结合；延伸，在DNA聚合酶作用下，以dNTP为原料合成新的DNA链。2.构建重组DNA分子的主要步骤：获取目的基因，可通过PCR扩增、从基因组文库或cDNA文库中获取等方法；选择合适载体，如质粒、噬菌体等；用限制性内切酶切割目的基因和载体；用DNA连接酶连接目的基因和载体形成重组DNA分子。方法有黏性末端连接、平端连接等。3.Westernblot原理：蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后转移到固相载体上，然后用特异性抗体与目标蛋白结合，再通过酶标二抗显色来检测目标蛋白。操作流程：样品处理与电泳；转膜；封闭；一抗孵育；二抗孵育；显色检测。五、实验设计题实验步骤：1.细胞收集：取适量细胞，离心收集。2.RNA提取：使用Trizol试剂提取总RNA，按说明书操作，包括加试剂、振荡、离心分层等步骤，取上清用异丙醇沉淀RNA。3.RNA定量：用紫外分光光度计测定RNA浓度和纯度。4.cDNA合成：以提取的RNA为模板，用逆转录试剂盒合成cDNA。5.PCR扩增：设计该基因特异性引物，以cDNA为模板进行PCR扩增。6.电泳检测：将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，观察条带。所用试剂