生物制药层析柱装填工艺工程师岗位招聘考试试卷及答案

生物制药层析柱装填工艺工程师岗位招聘考试试卷及答案试题部分一、填空题（10题，每题1分）1.生物制药中常用的层析填料类型包括离子交换、疏水相互作用、______和凝胶过滤等。2.琼脂糖凝胶填料的商品名通常以______开头（如Sepharose）。3.层析柱装填的两种主要方法是重力沉降法和______法。4.评价层析柱柱效的核心指标是______（理论塔板数）。5.层析柱装填后需用______缓冲液平衡柱床，使填料达到目标吸附状态。6.导致柱床塌陷的常见原因之一是______（如流速过快或缓冲液pH变化过大）。7.预装柱的优势之一是______（无需现场装填，稳定性高）。8.装填过程中需使用______泵控制缓冲液流速，避免压力波动。9.层析柱验证的关键参数包括动态载量（DBC）、柱效和______。10.层析填料通常需在______℃避光保存，防止降解。二、单项选择题（10题，每题2分）1.下列哪种填料属于离子交换层析填料？A.SephadexG-25B.DEAE-SepharoseC.PhenylSepharoseD.ProteinASepharose2.层析柱装填时，加压的压力范围一般不超过多少MPa？A.0.1B.0.3C.0.5D.1.03.下列哪项不是层析柱装填前的准备工作？A.填料溶胀B.柱体清洗C.样品制备D.缓冲液配制4.评价柱床均匀性的直观方法是：A.测定理论塔板数B.观察柱床有无沟流C.检测动态载量D.测量柱床高度5.动态载量（DBC）是指：A.单位体积填料静态结合目标蛋白量B.单位体积填料动态流速下结合目标蛋白量C.填料容纳的最大样品体积D.柱床最大承受压力6.疏水层析填料平衡时应使用：A.低盐缓冲液B.高盐缓冲液C.去离子水D.有机溶液7.下列哪种情况会导致柱效下降？A.柱床高度均匀B.流速稳定C.填料颗粒破碎D.平衡充分8.预装柱的使用寿命一般受限于：A.填料再生次数B.柱体材质C.缓冲液pHD.环境温度9.离子交换层析中，缓冲液pH应：A.与目标蛋白等电点一致B.高于等电点2个单位C.低于等电点2个单位D.无特定要求10.层析柱装填后若柱床有气泡，应采取的措施是：A.直接使用B.反向冲洗C.增加流速D.更换填料三、多项选择题（10题，每题2分）1.影响层析柱柱效的因素包括：A.填料颗粒大小B.柱床高度C.流速D.缓冲液粘度2.层析柱装填常见缺陷有：A.柱床塌陷B.沟流C.气泡残留D.填料流失3.层析柱验证需检测的项目包括：A.柱效（N）B.动态载量（DBC）C.分离度（R）D.填料纯度4.填料再生的常用试剂包括：A.NaOH溶液B.盐酸胍C.乙醇D.去离子水5.层析柱维护的要点包括：A.避免压力波动B.定期再生填料C.防止微生物污染D.保存时填充缓冲液6.重力沉降法装填的适用场景是：A.小体积填料B.低粘度缓冲液C.大柱径层析柱D.高流速需求7.亲和层析填料的特点包括：A.特异性结合目标蛋白B.需配体偶联C.载量较高D.再生简单8.装填过程中需注意的事项有：A.避免填料干涸B.控制压力稳定C.检查无气泡D.柱体垂直放置9.离子交换层析填料选择的依据包括：A.目标蛋白电荷性质B.缓冲液pHC.目标蛋白浓度D.填料孔径10.层析柱装填后平衡的目的是：A.去除填料残留溶剂B.使填料达到吸附平衡C.检测柱效D.防止样品降解四、判断题（10题，每题2分）1.重力装填比加压装填更适合大体积层析柱。（）2.柱效（N）越高，层析柱分离效果越好。（）3.填料装填后若暂时不用，可直接保存于室温。（）4.平衡缓冲液的pH和离子强度需与样品一致。（）5.柱床塌陷的唯一原因是流速过快。（）6.预装柱无需进行柱效验证即可直接使用。（）7.动态载量（DBC）比静态载量更具生产指导价值。（）8.装填过程中若出现气泡，应立即反向冲洗。（）9.疏水层析填料需用高盐缓冲液平衡，低盐洗脱。（）10.所有层析填料均可使用NaOH溶液再生。（）五、简答题（4题，每题5分）1.简述层析柱装填的基本步骤。2.如何判断层析柱装填是否合格？3.层析柱装填常见缺陷及解决方法。4.简述动态载量（DBC）的定义及测定意义。六、讨论题（2题，每题5分）1.比较重力装填与加压装填的适用场景及优缺点。2.如何根据目标蛋白特性选择合适的层析填料及装填参数？---答案部分一、填空题答案1.亲和层析2.Seph-3.加压装填4.N5.目标（或平衡）6.流速过快（或缓冲液pH突变）7.无需现场装填8.蠕动9.分离度（R）10.4二、单项选择题答案1.B2.B3.C4.B5.B6.B7.C8.A9.A10.B三、多项选择题答案1.ABCD2.ABCD3.ABC4.ABC5.ABCD6.AB7.ABC8.ABCD9.ABD10.AB四、判断题答案1.×2.√3.×4.√5.×6.×7.√8.√9.√10.×五、简答题答案1.①填料预处理：溶胀、清洗杂质；②柱体准备：清洗、安装筛网、垂直固定；③装填：重力/加压法加入填料悬液；④柱床稳定：冲洗至高度稳定；⑤平衡：用目标缓冲液冲洗至吸附平衡；⑥验证：检测柱效、DBC等。2.①柱效：N≥说明书要求（如≥1000/10cm柱高）；②柱床：无塌陷、沟流、气泡，表面平整；③DBC：符合工艺要求（如≥50mg/mL）；④压力稳定：流速下无波动；⑤分离度：目标蛋白与杂质R≥1.5。3.①塌陷：降流速、调缓冲液、重新装填；②沟流：重新装填（均匀悬液、柱垂直）；③气泡：反向冲洗；④流失：换合适筛网、控压力；⑤压力高：降流速、换填料。4.定义：单位体积填料在动态流速下结合目标蛋白的最大量（mg/mL）。意义：反映实际载量，指导填料体积计算，评估再生效果，验证工艺稳定性。六、讨论题答案1.重力装填：适用小柱（<100mL）、低粘度；优点：操作简单、压力稳；缺点：耗时、大柱不均。加压装填：适用大柱（>100mL）、高粘度；优点：速度快、柱床匀；缺点