2024高考生物：PCR重难点考试突破

一、基本概念1.(2020·新高考Ⅰ)通过PCR技术可在总cDNA中专一性的扩增出

Wx基因的cDNA，原因是__________________________________________________2.(2022·全国乙卷)

为了确保新冠病毒核酸检测的准确性，在设计PCR引物时必须依据新冠病毒RNA中的__________________来进行。PCR过程每次循环分为3步，其中温度最低的一步是___________3.(2022·广东)

研究者针对每个需要扩增的酶基因设计一对______，利用PCR技术，在优化反应条件后扩增得到目标酶基因。4.(2022·山东)为构建重组载体，需先设计引物，通过PCR特异性扩增基因。用于扩增基因的引物需满足的条件是_______________________________5.(2021·全国)PCR技术可用于临床的病原菌检测。为检测病人是否感染了某种病原菌，进行了相关操作：①分析PCR扩增结果；②从病人组织样本中提取DNA；③利用PCR扩增DNA片段；④采集病人组织样本。回答问题(1)若要得到正确的检测结果，正确的操作顺序应该是_________（用数字序号）。(2)操作③中使用的酶是_______________________，PCR

反应中的每次循环可分为变性、复性、________三步，其中复性的结果是________。

(3)为了做出正确的诊断，PCR反应所用的引物应该能与____________特异性结合。

(4)PCR（多聚酶链式反应）技术是指____________________________________。该技术目前被广泛地应用于疾病诊断等方面。【参考答案】1.引物能与WX基因的cDNA特异性结合2.特异性核苷酸序列

复性3.引物4.两种引物分别与两条模板链3′端的碱基序列互补配对5.(1)

④②③①

(2)

耐高温的DNA聚合酶

延伸

(3)

病原菌DNA(4)

在生物体外大量快速扩增DNA片段的技术二、条件优化1.(2021·湖北)某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外，还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是A.增加模板DNA的量

B.延长热变性的时间C.延长延伸的时间

D.提高复性的温度2.(2021·江苏)热启动PCR可提高扩增效率，方法之一是：先将除

TaqDNA聚合酶以外的各成分混合后，加热到80℃以上再混入酶，然后直接从94℃开始PCR扩增，下列叙述正确的有_____。A.Taq酶最适催化温度范围为50∼60℃

B.与常规PCR相比，热启动PCR可减少反应起始时引物错配形成的产物C.两条子链的合成一定都是从5′端向3′端延伸D.PCR产物DNA碱基序列的特异性体现了Taq酶的特异性3.(2017·江苏)设计引物是

PCR

技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理（见图），请分别说明理由。(1)第1组：

；(2)第2组：

。【参考答案】1.D

2.BC3.(1)引物Ⅰ与引物Ⅱ局部互补配对而失效

(2)引物Ⅰ′自身折叠后互补配对而失效三、应用类型1.(2020·北京)为了对重金属污染的土壤进行生物修复，研究者将从杨树中克隆的重金属转运蛋白HMA3基因与外源高效启动子连接，导入杨树基因组中（如图）。为检测获得的转基因杨树苗中是否含有导入的HMA3基因，同时避免内源HMA3基因的干扰，在进行PCR扩增时，应选择的引物组合是(

)。1.(2022·山东)为使PCR产物能被限制酶切割，需在引物上添加相应的限制酶识别序列，该限制酶识别序列应添加在引物的______（填“

3′端”或“

5′端”）。2.(2023·模拟)限制酶识别序列应添加在引物的______（填“

3′端”或“

5′端”），原因是________________________________________________3.融合PCR技术是采用具有互补末端的引物，将不同来源的扩增片段连接起来的方法，其过程如图所示.(1)第一阶段中PCR至少进行____次循环，才能获得含引物2且双链等长的DNA，第二阶段中两DNA能成功"搭桥"连接的原因___________________________________。(2)若通过融合PCR技术将启动子、标记基因、目的基因、终止子拼接起来，需要设计_____种引物，其中能够起着"搭桥"作用的引物有____种.第二阶段融合扩增时____（需要