2026年饮用水微生物化验员实操考核试题及答案

2026年饮用水微生物化验员实操考核试题及答案一、单选题（每题2分，共30分）1.在《生活饮用水卫生标准》（GB5749-2022）中，规定总大肠菌群不得检出的水样类型是：A.出厂水B.管网末梢水C.二次供水D.以上全部答案：D解析：GB5749-20224.1.2条款明确，出厂水、管网末梢水、二次供水、自建供水设施出水等所有类型生活饮用水，总大肠菌群均不得检出。2.滤膜法测定大肠埃希氏菌时，用于确认可疑菌落的培养基是：A.营养琼脂B.EC-MUG肉汤C.伊红美蓝琼脂D.乳糖蛋白胨培养液答案：B解析：滤膜法流程为：滤膜→mTEC琼脂（44.5℃，24h）→可疑菌落转入EC-MUG肉汤（44.5℃，4h），荧光阳性即判定为大肠埃希氏菌。3.下列哪种消毒剂残留对大肠菌群检测干扰最大，需在采样时加入中和剂：A.二氧化氯B.臭氧C.游离氯D.氯胺答案：C解析：游离氯具有持续杀菌作用，采样瓶需提前加入硫代硫酸钠（≥18mg/100mL）中和，否则后续培养阶段继续抑菌，导致假阴性。4.多管发酵法测定总大肠菌群，若10mL、1mL、0.1mL三梯度各接种5管，阳性管数分别为5-3-1，则MPN值为：A.70B.110C.150D.240答案：B解析：查GB/T5750.12-2023附录BMPN表，5-3-1对应MPN为110/100mL。5.进行滤膜法前，需用无菌镊子将滤膜正面（光面）朝下贴于培养基表面，其目的是：A.防止气泡残留B.减少菌落扩散C.避免滤膜卷曲D.方便计数答案：A解析：光面朝下可借助毛细作用自动排尽气泡，保证滤膜与培养基紧密贴合，避免菌落因营养缺失而漏检。6.若采样后2h内不能开始检测，则水样需冷藏保存，但最长不得超过：A.4hB.6hC.8hD.10h答案：C解析：GB/T5750.12-20234.1.3规定，从采样到检验间隔≤8h，若超过需重新采样。7.在酶底物法测定大肠埃希氏菌时，黄色荧光同时阳性即判定为阳性，其中荧光波长应为：A.365nmB.366nmC.365-366nmD.365-370nm答案：C解析：仪器使用长波紫外灯365-366nm，大肠埃希氏菌产生的β-葡萄糖醛酸酶分解MUG，释放4-甲基伞形酮，产生蓝白色荧光。8.下列哪项不是滤膜法质量控制要求：A.每批培养基做空白对照B.每10个样品做一个平行样C.每月用标准菌株做阳性对照D.每季度更换一次滤膜品牌答案：D解析：滤膜品牌更换无需固定周期，但应验证新批号回收率≥80%。其余均为GB/T5750.12-2023强制质控条款。9.多管发酵法初发酵产酸产气，复发酵不产气，最可能的原因是：A.非大肠菌群产酸菌B.培养基失效C.接种量过大D.温度失控答案：A解析：初发酵乳糖产酸产气菌株可能为克雷伯菌属、柠檬酸杆菌属等非目标菌，复发酵采用乳糖胆盐，抑制非大肠菌群，故产气消失。10.酶底物法使用的MMO-MUG培养基中，MUG浓度为：A.50mg/LB.75mg/LC.100mg/LD.150mg/L答案：C解析：配方依据《水和废水标准检验方法》第24版，MUG100mg/L为最佳显色/荧光平衡点。11.滤膜法计数时，若两个相邻菌落发生融合，应：A.计为一个菌落B.计为两个菌落C.按面积比例估算D.弃用该滤膜答案：B解析：只要菌落间有明显独立中心，即使边缘重叠，仍分别计数；完全融合且无法分辨者，可计为1个并备注。12.二次供水水箱水样采集，应先放水：A.30sB.1minC.2minD.3min答案：C解析：GB/T5750.2-2023规定，采集末梢水或二次供水需放水2min，以冲掉滞水，保证代表性。13.滤膜法培养温度44.5℃±0.5℃，若培养箱实际显示45.2℃，会导致：A.假阳性升高B.假阴性升高C.无影响D.菌落变小答案：B解析：超过45℃抑制大肠埃希氏菌生长，部分耐热菌亦被抑制，导致检出率下降。14.下列哪项不是酶底物法比色判读工具：A.10W白光LEDB.366nm紫外灯C.色度标准比色盘D.程控分光光度计答案：D解析：酶底物法采用定性/半定量比色，无需分光光度计；其余均为标准配置。15.若同一天检测10份出厂水，其中1份总大肠菌群阳性，应：A.立即复检原样B.立即报告不合格C.重新采样检测D.通知水厂停止供水答案：C解析：GB5749-20229.2条款，出现阳性需立即重新采样，若仍阳性则判定不合格，启动应急处置。二、判断题（每题1分，共10分）16.滤膜法可使用0.22μm孔径的醋酸纤维膜。答案：×解析：标准规定0.45μm±0.02μm，0.22μm孔径易堵塞且截留过度，影响菌落生长。17.多管发酵法初发酵培养基可高压蒸汽灭菌121℃30min。答案：√解析：乳糖蛋白胨培养液含乳糖、蛋白胨、指示剂，121℃30min灭菌不会破坏有效成分。18.酶底物法可在24h后延长判读至28h。答案：√解析：若24h阴性，可继续培养至28h，但超过28h判读无效。19.采集水样时，采样人员可戴一次性PE手套，无需消毒。答案：×解析：手套外表面需用75%酒精消毒，防止交叉污染。20.滤膜法计数范围宜控制在20-60CFU/滤膜。答案：√解析：GB/T5750.12-20235.2.3规定，20-60CFU为最佳计数区间，误差最小。21.二次发酵证实为大肠菌群后，无需再做革兰氏染色。答案：×解析：仲裁检验或出现争议时，需做革兰氏染色镜检，确认革兰氏阴性无芽孢杆菌。22.酶底物法可同时检测总大肠菌群与大肠埃希氏菌。答案：√解析：MMO-MUG培养基含两种底物，ONPG显黄色为总大肠菌群，MUG荧光阳性为大肠埃希氏菌。23.滤膜法培养箱可用水浴锅替代。答案：×解析：水浴锅湿度大，易致滤膜吸水脱落，且温度波动±1℃，不符合±0.5℃要求。24.出厂水余氯测定合格，即可判定微生物指标合格。答案：×解析：余氯仅反映消毒效果，微生物指标需直接检测，两者无替代关系。25.采样瓶灭菌后有效期为3个月。答案：√解析：实验室常用121℃20min灭菌，干燥后密封，室温保存3个月，过期需重新灭菌。三、填空题（每空1分，共20分）26.多管发酵法初发酵培养条件：________℃，________h。答案：36±1，24±227.滤膜法测定大肠埃希氏菌所用培养基为________，培养温度________℃。答案：mTEC，44.5±0.528.酶底物法阳性结果判读：黄色为________，366nm荧光为________。答案：总大肠菌群，大肠埃希氏菌29.采样时，每125mL采样瓶加入________mg硫代硫酸钠，用于中和________。答案：18，游离氯30.滤膜法空白对照要求：每批培养基至少________张无菌滤膜，菌落数为________。答案：1，031.多管发酵法复发酵培养基为________，接种量从初发酵阳性管转接________mL。答案：乳糖胆盐，0.132.出厂水每日至少检测________份微生物样品，每月需覆盖________%采样点。答案：1，10033.滤膜法计数时，菌落呈________色、________光泽、直径________mm为典型大肠埃希氏菌。答案：黄绿，金属，0.5-234.酶底物法若样品浑浊，需稀释________倍，仍黄色/荧光阳性则报告________。答案：10，≥2420（MPN/100mL）35.二次供水水箱清洗后，需放水至余氯≥________mg/L，方可重新________。答案：0.05，投入使用四、简答题（每题10分，共40分）36.简述多管发酵法检测总大肠菌群的完整流程，并指出关键质量控制点。答案：（1）准备：乳糖蛋白胨培养液分装10mL/管，含杜氏小管，121℃20min灭菌；采样瓶灭菌并加硫代硫酸钠。（2）初发酵：无菌吸取10mL、1mL、0.1mL水样各5管，36℃±1℃培养24h±2h，观察产酸（变黄）产气（杜氏小管气泡≥10%）。（3）复发酵：从阳性管取0.1mL接种乳糖胆盐，44.5℃±0.5℃培养24h±2h，产气即确认。（4）计数：查MPN表，报告MPN/100mL。关键质控：①每批空白阴性；②每月用ATCC25922大肠埃希氏菌做阳性；③培养基pH6.9±0.1；④杜氏小管无气泡方可使用；⑤超纯水电导率≤1μS/cm。37.滤膜法测定大肠埃希氏菌时，出现“边缘菌落过多，中心稀少”现象，分析原因并给出纠正措施。答案：原因：①滤膜未完全贴附，中心气泡致营养缺乏；②培养基表面过湿，菌落泳动；③加样过快，颗粒沉积边缘。纠正：①滤膜光面朝下，滚动排气；②培养基预干燥，25℃30min去表面水分；③缓慢抽滤，≤50mL/100mL杯，避免冲击；④若已出现，可重新换膜，或将边缘菌落单独计数后备注。38.某实验室采用酶底物法检测水源水，结果24h黄色但无荧光，48h仍无荧光，如何报告？并解释原理。答案：报告：总大肠菌群阳性，大肠埃希氏菌阴性。原理：MMO被β-半乳糖苷酶分解产黄色，为总大肠菌群标志；MUG需β-葡萄糖醛酸酶，仅大肠埃希氏菌等少数菌具备。无荧光说明缺乏该酶，故大肠埃希氏菌未检出。GB/T5750.12-20236.3.5规定，24-28h判读，无需延长48h，故以24h结果为准。39.采样人员携带便携式余氯仪、温度计、采样箱赴现场，发现出厂水余氯0.45mg/L、水温18℃，计划检测微生物，请列出采样步骤及注意事项。答案：步骤：①用75%酒精消毒龙头，放水2min；②取下采样瓶外盖，勿触瓶口，采水至瓶肩，不留顶空；③立即加入硫代硫酸钠（已提前加入瓶内），颠倒混匀；④现场测定余氯、温度并记录；⑤贴标签（编号、时间、地点、余氯、温度）；⑥置4℃采样箱，2h内送检；⑦运输避免震动、光照，与化学样物理隔离。注意事项：①一人一瓶，避免交叉；②采样箱预冷至4℃；③若长途运输，使用冰袋，防止冻结；④交接时填写链式记录，签字确认。五、综合应用题（共40分）40.背景：某市疾控中心对A水厂进行双盲考核，提供三份考核样（编码K1、K2、K3），要求同时采用多管发酵法、滤膜法、酶底物法检测总大肠菌群与大肠埃希氏菌，并在6h内出具初步结果。实验室具备Ⅱ级生物安全柜、恒温培养箱、便携式紫外灯、真空泵、无菌室。（1）制定人员分工与时间轴（10分）（2）设计原始记录表（含质控栏）（10分）（3）结果判定与报告格式（10分）（4）若三份样品均检出大肠埃希氏菌，请写出向水厂反馈的要点（10分）答案：（1）分工与时间轴0-0.5h：组长解码、分样、贴签；甲负责多管（初发酵接种）；乙负责滤膜（mTEC贴膜）；丙负责酶底物（分装51孔定量盘）。0.5-1h：甲置36℃；乙置44.5℃；丙置37℃。1-2h：甲准备复发酵管；乙准备EC-MUG确认；丙准备空白、阳性对照。24h：甲读初发酵，乙计数滤膜，丙判读酶底物黄色/荧光。24-25h：甲复发酵接种；乙可疑菌落转EC-MUG；丙记录MPN。44-45h：甲读复发酵；乙读荧光；丙复核。45-46h：汇总，三级审核，出具临时报告。（2）原始记录表（示例）样品编号：K1方法：多管发酵接种量：10mL×5，1mL×5，0.1mL×5初发酵阳性管：5-3-1复发酵阳性管：5-2-0MPN/100mL：110质控：空白0管阳性；阳性对照ATCC25922产气+检验员：甲复核人：丁日期：2026-06-25（3）报告格式检测报告编号：2026SW-K001样品：出厂水考核样项目：总大肠菌群、大肠埃希氏