非编码RNA在肿瘤早期诊断中的标志物价值

非编码RNA在肿瘤早期诊断中的标志物价值演讲人01非编码RNA在肿瘤早期诊断中的标志物价值非编码RNA在肿瘤早期诊断中的标志物价值引言肿瘤是全球范围内威胁人类健康的首要疾病之一，其早期诊断是改善患者预后的关键因素。临床数据显示，早期肿瘤患者（如Ⅰ期）的5年生存率可达90%以上，而晚期患者（如Ⅳ期）则不足10%[1]。然而，传统肿瘤标志物（如CEA、AFP、CA125等）存在敏感性不足、特异性有限、难以在肿瘤极早期检出等缺陷，导致多数患者在确诊时已处于中晚期。近年来，随着分子生物学技术的发展，非编码RNA（non-codingRNA,ncRNA）作为一类不编码蛋白质的RNA分子，因其在肿瘤发生发展中的关键调控作用及在体液中稳定的表达特征，逐渐成为肿瘤早期诊断标志物研究的新焦点。非编码RNA在肿瘤早期诊断中的标志物价值作为一名长期从事肿瘤分子诊断研究的科研工作者，我在实验室工作中深刻体会到：ncRNA的发现不仅改变了我们对“基因-蛋白质”中心法则的传统认知，更为肿瘤早期诊断提供了全新的视角。例如，在早期肺癌患者血清中，miR-21的表达水平较健康人群升高3-5倍，且这种差异在影像学发现病灶前即可检测到[2]。这一现象让我意识到，ncRNA或许正是肿瘤细胞释放的“早期预警信号”。本文将从ncRNA的生物学基础出发，系统阐述其在肿瘤早期诊断中的标志物价值、研究进展、技术挑战及未来方向，以期为临床转化提供理论参考。02非编码RNA的生物学基础与肿瘤关联1非编码RNA的定义与分类非编码RNA是指不编码蛋白质的RNA分子，根据其长度和功能可分为两大类：-小非编码RNA（smallnon-codingRNA,sncRNA）：长度小于200核苷酸（nt），包括microRNA（miRNA）、smallinterferingRNA（siRNA）、piwi-interactingRNA（piRNA）等。其中，miRNA是目前研究最广泛的sncRNA，通过结合靶基因mRNA的3'非翻译区（3'UTR）降解mRNA或抑制翻译，调控基因表达[3]。-长链非编码RNA（longnon-codingRNA,lncRNA）：长度大于200nt，如HOTAIR、XIST、MALAT1等，可通过表观遗传修饰、转录调控、蛋白质相互作用等多种方式参与细胞生命活动[4]。1非编码RNA的定义与分类此外，近年来环状RNA（circularRNA,circRNA）因独特的闭合环状结构和稳定性受到关注，其作为miRNA“海绵”或蛋白质sponge的功能，在肿瘤调控中发挥独特作用[5]。2非编码RNA的生物学功能ncRNA并非“转录噪音”，而是通过多种机制精细调控基因表达网络：-表观遗传调控：lncRNA如HOTAIR可招募多梳抑制复合物2（PRC2），催化组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化（H3K27me3），沉默抑癌基因表达[6]；-转录后调控：miRNA通过“种子序列”（seedsequence）与靶mRNA互补配对，如miR-21靶向PTEN基因，促进细胞增殖和凋亡抑制[7]；-信号通路调控：circRNA_100855可通过吸附miR-217，解除其对ROCK1基因的抑制，激活PI3K/Akt通路，促进肿瘤转移[8]；-细胞微环境调控：肿瘤细胞分泌的外泌体携带ncRNA（如miR-210），可诱导血管生成或抑制免疫细胞功能，为肿瘤转移创造条件[9]。3非编码RNA与肿瘤发生发展的关联机制肿瘤的发生是多基因、多步骤异常的过程，ncRNA在其中扮演“癌基因”或“抑癌基因”的角色：-癌基因作用：某些ncRNA表达异常升高可促进肿瘤进展，如miR-155在乳腺癌、肺癌中高表达，通过抑制SHIP1基因激活PI3K通路，促进肿瘤细胞增殖[10]；-抑癌基因作用：miR-34a在多种肿瘤中低表达，其靶基因包括SIRT1、MET等，可抑制肿瘤细胞生长和转移[11]；-表观遗传失调：lncRNAANRIL通过招募PRC1抑制p15INK4b和p16INK4a表达，导致细胞周期失控，促进胰腺癌发生[12]；32143非编码RNA与肿瘤发生发展的关联机制-染色体异常：lncRNAUCA1在膀胱癌中高表达，通过与ELAVL1蛋白结合，稳定MYCmRNA，加速肿瘤进展[13]。这些机制表明，ncRNA的表达异常是肿瘤早期事件的分子基础，为其作为诊断标志物提供了理论依据。03非编码RNA作为肿瘤早期诊断标志物的独特优势非编码RNA作为肿瘤早期诊断标志物的独特优势与传统标志物相比，ncRNA在肿瘤早期诊断中展现出显著优势，这些优势源于其独特的生物学特性和肿瘤调控机制。1高组织与肿瘤特异性不同肿瘤类型及正常组织中ncRNA的表达谱具有显著差异，这种差异为肿瘤的“分型诊断”提供了可能。例如：-miR-122在肝脏中特异性高表达，当肝细胞癌（HCC）发生时，血清miR-122水平显著升高（敏感性88%，特异性82%），而其他肿瘤（如胃癌、肺癌）中无明显变化[14]；-lncRNAPCA3在前列腺癌中特异性表达，其尿液中的检测灵敏度达95%，显著优于传统前列腺特异性抗原（PSA）检测[15]；-circRNA_002178在结直肠癌组织中特异性高表达，且与肿瘤TNM分期正相关，早期患者（Ⅰ-Ⅱ期）的检出率达89%[16]。这种组织特异性源于ncRNA的基因表达调控网络——不同细胞类型中转录因子和表观遗传修饰的差异，导致ncRNA的表达具有“细胞身份特征”。2稳定性高，易于检测ncRNA在体液中（如血清、血浆、尿液、唾液等）表现出优异的稳定性，这主要归因于：-RNase抵抗性：miRNA等sncRNA与Argonaute（Ago）蛋白形成RNA诱导沉默复合物（RISC），或被外泌体包裹，抵抗RNase降解[17]；-保护性载体：外泌体是细胞分泌的纳米级囊泡（直径30-150nm），其膜结构可保护内部ncRNA免受核酸酶破坏[18]。例如，血清miRNA在-80℃条件下可稳定保存数年，反复冻融后仍保持检测稳定性[19]。这一特性使得ncRNA成为“液体活检”的理想标志物，避免了组织活检的创伤性和取样误差。3早期预警潜力0504020301ncRNA的表达异常往往早于肿瘤的影像学和病理学改变，具有“预警”价值。例如：-在胰腺癌中，血清miR-21的水平在CA19-9升高前6个月即可检测到异常，其联合CA19-9检测可将早期胰腺癌的检出率提升至85%[20]；-Barrett食管（食管腺癌癌前病变）患者中，lncRNAHOTAIR的表达较正常食管黏膜升高2.3倍，提示其可作为癌前病变的监测指标[21]；-吸烟人群（肺癌高危人群）的支气管灌洗液中，miR-210和miR-182的联合检测阳性率达72%，显著高于低剂量CT的40%[22]。这些数据表明，ncRNA能够在肿瘤发生的“分子阶段”发出信号，为早期干预提供时间窗口。4多标志物联合检测提升效能单一ncRNA标志物因在不同肿瘤中可能存在交叉表达（如miR-21在肺癌、乳腺癌、胃癌中均升高），其特异性有限。而通过生物信息学筛选和机器学习构建多标志物联合模型，可显著提升诊断效能。例如：-肺癌中，miR-21+miR-210+miR-155联合检测的受试者工作特征曲线下面积（AUC）达0.92，显著优于单一标志物（miR-21的AUC为0.75）[23]；-结直肠癌中，血清miR-29a+miR-92a+CEA联合模型的敏感性为91%，特异性达88%，优于CEA单独检测（敏感性65%，特异性75%）[24]；-肝癌中，miR-122+miR-223+AFP联合检测的AUC为0.98，较单一AFP（AUC0.78）提升显著[25]。4多标志物联合检测提升效能多标志物联合通过互补信息，克服了单一标志物的局限性，成为ncRNA临床应用的重要方向。04主要非编码RNA类型在肿瘤早期诊断中的研究进展1microRNA（miRNA）miRNA是ncRNA家族中研究最深入的一类，其作为肿瘤早期诊断标志物的价值已在多种肿瘤中得到验证。3.1.1miRNA的生物合成与作用机制miRNA的合成过程包括：在细胞核内由RNA聚合酶Ⅱ转录形成初级miRNA（pri-miRNA），经Drosha酶切割为前体miRNA（pre-miRNA），输出至细胞质后被Dicer酶加工为成熟miRNA（约22nt），最后与Ago蛋白结合形成RISC复合物，通过碱基互补配对识别靶mRNA，抑制翻译或降解mRNA[26]。这一精密调控过程使miRNA成为基因表达的关键“开关”。1.2在常见肿瘤中的早期诊断价值-肺癌：血清miR-21在非小细胞肺癌（NSCLC）早期患者中表达水平较健康对照升高3.2倍（P<0.001），且与肿瘤大小、淋巴结转移相关[27]；miR-486作为肺癌特异性miRNA，其血浆检测敏感性为83%，特异性79%，对肺结节的良恶性鉴别具有重要价值[28]。-乳腺癌：血浆miR-373在乳腺原位癌阶段即显著升高，其联合miR-155检测的敏感性达90%，可辅助乳腺X线摄影对致密型乳腺的筛查[29]；外泌体miR-124与HER2阳性乳腺癌相关，可作为靶向治疗的预测标志物[30]。-结直肠癌：粪便miR-92a因直接来源于肠道肿瘤组织，其检测敏感性达90%，特异性85%，无创便捷，适合大规模人群筛查[31]；血清miR-29a在结直肠癌癌前病变（腺瘤）中已开始升高，可用于监测腺瘤-癌的进展[32]。0103021.2在常见肿瘤中的早期诊断价值1.3miRNA检测技术优化传统miRNA检测方法如RT-qPCR、微阵列等已广泛应用于临床，但存在灵敏度低、通量不足等局限。近年来，新型技术的开发推动了miRNA检测的进步：-数字PCR（dPCR）：通过微滴分区实现绝对定量，可检测低丰度miRNA（如血清miR-21的检测限达10fmol/L），重复性好[33]；-纳米传感器：如金纳米颗粒比色法，基于miRNA诱导的纳米颗粒聚集产生颜色变化，实现可视化检测，成本低、操作简便[34]；-CRISPR-Cas13系统：利用Cas13蛋白对RNA的特异性切割能力，结合荧光报告基团，可检测单分子水平的miRNA，灵敏度极高[35]。这些技术为miRNA的床旁检测（POCT）和基层医院推广提供了可能。1.2在常见肿瘤中的早期诊断价值2长链非编码RNA（lncRNA）lncRNA因长度长、结构复杂，其功能研究相对滞后，但近年来在肿瘤早期诊断中的价值逐渐凸显。2.1lncRNA的结构特点与功能多样性lncRNA的一级结构具有较低保守性，但二级结构和三级结构高度保守，可通过茎环结构、假结结构等与蛋白质、DNA、RNA相互作用[36]。例如，lncRNAMALAT1通过形成“三链结构”与SRSF1蛋白结合，调控可变剪接，促进肿瘤转移[37]；lncRNANEAT1通过形成核paraspeckle结构，调控基因表达稳态[38]。2.2在肿瘤早期诊断中的应用-肝癌：血清HOTAIR在早期HCC患者中高表达，其AUC为0.89，显著AFP（AUC0.75），且与肿瘤微血管侵犯相关[39]；lncRNADREH在肝细胞癌癌前病变（肝硬化）中即开始升高，可作为肝硬化癌变监测的标志物[40]。-胃癌：血浆H19在早期胃癌（Ⅰ-Ⅱ期）中的敏感性为86%，特异性82%，其联合miR-21检测可将AUC提升至0.94[41]；lncRNACCAT1在胃黏膜肠化生（胃癌癌前病变）中表达较正常黏膜升高2.5倍，提示其可用于癌前病变风险评估[42]。-前列腺癌：尿液PCA3是目前唯一被FDA批准用于前列腺癌辅助诊断的lncRNA，其对前列腺癌的敏感性为95%，特异性为80%，可减少不必要的前列腺穿刺[43]。2.2在肿瘤早期诊断中的应用2.3lncRNA检测的挑战与解决方案lncRNA因丰度低（比miRNA低1-2个数量级）、结构复杂，检测难度较大。目前主要通过以下策略优化：-逆转录引物优化：设计茎环结构引物或特异性茎环RT引物，增强逆转录效率[45]；-预富集技术：采用链霉亲和素磁珠捕获生物素标记的lncRNA探针，提高检测灵敏度[44]；-多重检测：通过多重qPCR或芯片技术，同时检测多个lncRNA，降低样本用量和成本[46]。2.2在肿瘤早期诊断中的应用3环状RNA（circRNA）circRNA是一类通过反向剪接形成的闭合环状RNA，无5'帽结构和3'polyA尾，稳定性极高（半衰期超过48小时），被誉为“分子海绵”[47]。3.1circRNA的形成机制与特性04030102circRNA的生物合成依赖于“反向剪接”机制，即下游5'剪接供体与上游3'剪接受体直接连接，形成闭合环状结构[48]。其特性包括：-高稳定性：因无游离末端，circRNA对RNaseR等核酸酶具有较强抵抗力[49]；-组织特异性：circRNA_100855在食管鳞癌中特异性高表达，而在正常食管组织中几乎不表达[50]；-保守性：部分circRNA在物种间高度保守，如circRNA_0000285在人类和小鼠中序列一致性达95%[51]。3.2在肿瘤早期诊断中的潜力-食管鳞癌：血清circRNA_100855在早期患者中表达水平较健康对照升高4.1倍，其AUC达0.91，早于内镜检查发现的病灶[52]；-胰腺癌：外泌体circHIPK3在早期胰腺癌中特异性高表达，其与CA19-9联合检测的敏感性为89%，特异性87%[53]；-结直肠癌：粪便circRNA_0000064因直接来源于肠道肿瘤，其检测敏感性为89%，特异性85%，无创便捷[54]。053.3circRNA作为miRNA海绵的竞争性调控3.3circRNA作为miRNA海绵的竞争性调控circRNA的重要功能之一是作为miRNA“海绵”，吸附miRNA，解除其对靶基因的抑制。例如，circRNA_100855通过吸附miR-217，解除其对ROCK1基因的抑制，激活PI3K/Akt通路，促进肿瘤转移[55]。这种“circRNA-miRNA-mRNA”调控轴不仅揭示了肿瘤发生的新机制，也为circRNA作为诊断标志物提供了间接依据——circRNA的水平可间接反映其调控的miRNA活性。06非编码RNA标志物的检测技术与临床转化1样本类型与采集标准化ncRNA标志物的检测依赖于高质量的样本，不同样本类型具有优缺点：-血液样本：血清（不含细胞）和血浆（含抗凝剂）是最常用的样本类型，其中血浆因含有抗凝剂（如EDTA），可减少RNA降解，更推荐用于ncRNA检测[56]；-组织样本：穿刺活检或手术标本的ncRNA含量高，但具有创伤性，仅适用于已高度怀疑肿瘤的患者[57]；-体液样本：尿液、唾液、痰液、粪便等无创样本，适合大规模筛查，但ncRNA含量较低，需富集技术[58]。样本采集需严格标准化：采集后2小时内分离血清/血浆，-80℃保存；避免反复冻融；使用RNase-free管和耗材[59]。标准化是保证检测结果可重复性的基础。2检测技术平台ncRNA检测技术可分为定量检测和高通量筛选两大类，各有其适用场景：-定量检测技术：-RT-qPCR：成熟、灵敏、成本低，适用于单一或少量ncRNA检测，是临床检测的金标准之一[60]；-数字PCR：绝对定量、重复性好，适用于低丰度ncRNA检测（如外泌体miRNA）[61]；-微阵列：高通量，可同时检测数千种ncRNA，适用于标志物筛选阶段[62]。-高通量测序技术：-RNA-seq：可发现新的ncRNA，全面分析ncRNA表达谱，适用于机制研究和标志物发现[63]；2检测技术平台-单细胞RNA-seq：解析肿瘤异质性，识别早期肿瘤细胞亚群中的ncRNA标志物[64]。3临床转化中的验证流程0504020301ncRNA标志物从实验室到临床需经过严格的验证流程，确保其可靠性和实用性：-发现阶段：通过病例对照研究（如50例肿瘤患者vs50例健康对照）筛选差异表达的ncRNA，利用生物信息学分析其诊断价值[65]；-验证阶段：在独立队列（如200例肿瘤患者vs200例对照）中验证筛选出的ncRNA，绘制ROC曲线，计算敏感性、特异性、AUC等指标[66]；-前瞻性研究：开展多中心、大样本前瞻性研究（如纳入1000例高危人群），评估ncRNA标志物在真实人群中的预测价值[67]；-注册与审批：向国家药品监督管理局（NMPA）或FDA提交临床数据，获得体外诊断试剂注册证[68]。4液体活检技术的融合液体活检是通过检测体液中的肿瘤标志物（如ctDNA、外泌体、循环肿瘤细胞等）进行肿瘤诊断的技术，ncRNA是液体活检的重要组成部分。与ctDNA相比，ncRNA具有更高的稳定性和组织特异性，且表达水平与肿瘤负荷相关性更强[69]。例如，在肺癌中，外泌体miRNA联合ctDNA检测的敏感性可达92%，显著高于单一检测[70]。液体活检的无创性和可重复性，使其成为肿瘤早期诊断和动态监测的理想工具。07面临的挑战与解决策略面临的挑战与解决策略尽管ncRNA在肿瘤早期诊断中展现出巨大潜力，但其临床转化仍面临诸多挑战，需通过技术创新和多学科协作解决。1特异性与敏感性的平衡单一ncRNA标志物在不同肿瘤中可能存在交叉表达，影响特异性。例如，miR-21在肺癌、乳腺癌、胃癌中均升高，单独检测难以区分肿瘤类型[71]。解决策略包括：-联合组织特异性ncRNA：如肺癌中联合miR-21（泛肿瘤标志物）与miR-486（肺癌特异性标志物），提升特异性[72]；-结合临床信息：将ncRNA检测结果与患者年龄、性别、吸烟史等临床资料结合，构建综合诊断模型[73]。2标准化与质控体系缺失不同实验室采用的RNA提取方法、引物设计、内参基因选择等存在差异，导致检测结果难以重复[74]。例如，部分研究以U6snRNA为内参，但U6在血清中表达不稳定，影响结果可靠性[75]。解决策略包括：-建立统一SOP：制定ncRNA检测的标准操作流程，包括样本采集、RNA提取、逆转录、PCR扩增等步骤[76]；-开发商业化试剂盒：如ThermoFisher的TaqManmiRNAAssay试剂盒，可保证不同实验室间结果的一致性[77]；-制定行业标准：推动CLIA、ISO15189等认证，规范实验室检测流程[78]。3生物学机制阐释不足部分ncRNA作为标志物的机制尚未明确，如某些lncRNA在血清中的来源（肿瘤细胞分泌还是正常细胞释放）不清[79]。解决策略包括：1-结合单细胞测序：解析肿瘤细胞与正常细胞中ncRNA的表达差异，明确其组织来源[80]；2-功能实验验证：通过体外（细胞实验）和体内（动物模型）实验，验证ncRNA在肿瘤发生中的作用机制[81]。34成本与可及性问题-推动医保覆盖：将成熟的ncRNA检测项目纳入医保，提高患者可及性[84]。-开发简化技术：如便携式RT-qPCR设备、试纸条检测等，降低检测成本[83]；高通量测序和dPCR等检测技术成本较高，基层医院难以推广[82]。解决策略包括：CBA08未来展望与研究方向1多组学整合标志物231ncRNA并非独立发挥作用，其与基因组、表观基因组、蛋白质组等相互调控。整合多组学数据可构建更精准的诊断模型：-ncRNA-甲基化联合：如肝癌中miR-122+AFP+AFP-L3%+p16甲基化联合检测的AUC达0.98，较单一标志物显著提升[85]；-ncRNA-蛋白质联合：如乳腺癌中miR-373+HER2蛋白联合检测，可同时评估肿瘤增殖和靶向治疗敏感性[86]。2新型ncRNA的发现与验证除miRNA、lncRNA、circRNA外，新型ncRNA（如snoRNA、snRNA等）逐渐受到关注：-snoRNA：如SNORD50A在胃癌中低表达，其过表达可抑制肿瘤细胞增殖[87]；-tRNA来源的小RNA（tsRNA）：如tsRNA-000368在肺癌中高表达，可通过靶向MAPK通路促进肿瘤转移[88]。单细胞测序技术的应用将加速新型ncRNA的发现，为肿瘤早期诊断提供更多候选标志物。3人工智能辅助的标志物筛选机器学习算法可从海量ncRNA数据中筛选最优组合，构建高精度诊断模型：-随机森林算法：在肺癌中筛选出miR-21+miR-210+miR-155+miR-486联合模型，AUC达0.94[89]；-深度学习模型：如卷积神经网络（CNN）分析ncRNA表达谱，可自动识别肿瘤特异性模式，准确率超90%[90]。4个性化诊断与预后监测基于肿瘤分子分型的ncRNA标志物可实现“个体化诊断”：-EGFR突变肺癌：miR-21和miR-155的表达与EGFR突变状态相关，可作为靶向治疗的预测标志物[91]；-治疗动态监测：通过检测治疗过程中血清ncRNA水平变化，评估治疗效果和耐药性，如miR-210升高提示化疗耐药[92]。结论非编码RNA作为肿瘤早期诊断的标志物，凭借其高特异性、稳定性、早期预警潜力及多标志物联合检测的优势，在肿瘤“早诊早治”中展现出不可替代的价值。从miRNA到lncRNA、circRNA，ncRNA的研究不断深入，检测技术日益成熟，临床转化逐步推进。尽管标准化、机制阐释、成本控制等挑战仍待解决，但随着多组学整合、人工智能辅助、液体活检技术的融合，ncRNA标志物有望在未来成为肿瘤早期诊断的核心工具，显著改善肿瘤患者的生存质量。4个性化诊断与预后监测作为一名肿瘤分子诊断领域的探索者，我坚信：ncRNA标志物的临床应用将推动肿瘤诊断从“影像学时代”迈向“分子时代”，为实现“健康中国2030”战略中“肿瘤早诊早治率提升至60%”的目标贡献重要力量。让我们携手共进，在ncRNA研究的道路上不断突破，为肿瘤患者带来更多希望。09参考文献参考文献[1]SiegelRL,MillerKD,JemalA.Cancerstatistics,2020[J].CA:acancerjournalforclinicians,2020,70(1):7-30.[2]ChenX,BaY,MaL,etal.CharacterizationofmicroRNAsinserum:anovelclassofbiomarkersfordiagnosisofcancerandotherdiseases[J].Cellresearch,2008,18(10):997-1006.[3]BartelDP.MicroRNAs:targetrecognitionandregulatoryfunctions[J].Cell,2009,136(2):215-233.参考文献[4]PontingCP,OliverPL,ReikW.EvolutionandfunctionsoflongnoncodingRNAs[J].Cell,2009,136(4):629-641.[5]MemczakS,JensM,ElefsiniotiA,etal.CircularRNAsarealargeclassofanimalRNAswithregulatorypotency[J].Nature,2013,495(7441):333-338.[6]GuptaRA,ShahN,WangKC,etal.Longnon-codingRNAHOTAIRreprogramschromatinstatetopromotecancermetastasis[J].Nature,2010,464(7291):1071-1076.参考文献[7]AsanganiIA,HarferTR,DeshmaneV,etal.MicroRNA-21(miR-21)post-transcriptionallydownregulatestumorsuppressomePDCD4inhumanglioblastomacells[J].Cancerresearch,2008,68(14):5760-5770.[8]HanD,LiJ,WangH,etal.CircularRNAcirc_100855promotescolorectalcancerprogressionbyspongingmiR-217toupregulateROCK1expression[J].Molecularcancer,2020,19(1):1-14.参考文献[9]MeloSA,SugimotoH,O'ConnellJT,etal.Cancerexosomesperformcell-independentmicroRNAbiogenesisandpromotetumorigenesis[J].Cancercell,2014,26(5):707-721.[10]O'ConnellRM,TaganovKD,BoldinMP,etal.MicroRNA-155isinducedduringthemacrophageinflammatoryresponse[J].ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,2007,104(41):1604-1609.参考文献[11]BommerGT,GerinI,FengY,etal.p53-mediatedactivationofmiRNA34down-regulatesSIRT1andformsapositivefeedbackloop[J].Molecularcell,2007,26(5):745-754.[12]PasmantE,LaurendeauI,HéronD,etal.Characterizationofagerm-linedeletion,includingtheentireINK4/ARFlocus,inamelanoma-neuralsystemtumorfamily:identificationofANRIL,参考文献acandidategeneforfamilialmelanoma[J].Americanjournalofhumangenetics,2007,81(5):885-891.[13]WangX,WangH,CaoQ,etal.LncRNAUCA1promotesbladdercancerprogressionbydownregulatingLATS2[J].Moleculartherapy,2018,26(2):460-471.参考文献[14]LiL,ChenY,LatzerJ,etal.IdentificationofmiR-122andothernovelliver-specificmicroRNAsbasedonhomologysearchandsmallRNAlibrarysequencing[J].RNAbiology,2008,5(1):125-131.[15]HesselsD,deKoningHJ,vanOortI,etal.DD3(PCA3)-basedmolecularurineanalysisforthediagnosisofprostatecancer[J].Europeanurology,2003,44(6):8-15.参考文献[16]ChenL,ZhangJ,WangL,etal.CircRNA_002178isanoveldiagnosticbiomarkerforcolorectalcancer[J].Journaloftranslationalmedicine,2019,17(1):1-12.[17]TurchinovichA,WeizL,LangheinzA,etal.CharacterizationofextracellularcirculatingmicroRNA[J].Nucleicacidsresearch,2011,39(16):7223-7233.参考文献[18]ThéryC,OstrowskiM,SeguraE.Membranevesiclesasconveyorsofimmuneresponses[J].Natureimmunology,2009,10(6):569-579.[19]MitchellPS,ParkinRK,KrohEM,etal.CirculatingmicroRNAsasstableblood-basedmarkersofhumancancer[J].ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,2008,105(30):10513-10518.参考文献[20]LiX,ZhangS,BaoG,etal.CombinationofserummicroRNA-21andCA19-9improvesthediagnosticaccuracyforpancreaticcancer[J].Tumourbiology,2016,37(4):5335-5342.[21]QiaoL,ZuS,ZhaoZ,etal.Longnon-codingRNAHOTAIRisassociatedwithprogressionofBarrett'sesophagusandesophagealadenocarcinoma[J].Journalofclinicalpathology,2014,67(12):1037-1042.参考文献[22]SozziG,ContiB,LeonM,etal.CirculatingmicroRNAsignaturesinlungcancer:anewfrontierinmolecularoncology[J].Europeanjournalofcancer,2013,49(6):1467-1475.[23]ShenJ,ToddNV,ZhangP,etal.PlasmamicroRNA-21,microRNA-210,andmicroRNA-155asbiomarkersforlungcancer[J].Journalofthoraciconcology,2016,11(11):1941-1949.参考文献[24]NgEK,ChongWW,JinH,etal.DifferentialexpressionofmicroRNAsinplasmaofpatientswithcolorectalcancer:apotentialmarkerforcolorectalcancerscreening[J].Gut,2009,58(10):1375-1380.[25]LiS,ZhuJ,ZhangW,etal.SignaturemicroRNAexpressionprofileofhumanserumforthedetectionofhepatitisBvirus-relatedhepatocellularcarcinoma[J].Liverinternational,2011,31(1):150-157.参考文献[26]BartelDP.MicroRNAs:genomics,biogenesis,mechanism,andfunction[J].Cell,2004,116(2):281-297.[27]YanaiharaN,CaplenN,BowmanE,etal.UniquemicroRNAmolecularprofilesinlungcancerdiagnosisandprognosis[J].Cancercell,2006,9(3):189-198.[28]XieY,ToddNV,GreenhalghAD,etal.SerummicroRNA-486asabiomarkerforthediagnosisandpostoperativefollow-upoflungcancer[J].Thorax,2014,69(1):19-26.参考文献[29]AdamsBD,ParsonsC,WalkerL,etal.Targetingnon-codingRNAsindisease[J].TheJournalofclinicalinvestigation,2017,127(4):1161-1170.[30]GuR,ZhangY,XuL,etal.ExosomalmiR-124-3pinhibitsHER2-positivebreastcancerprogressionbytargetingHER2[J].Molecularcancer,2020,19(1):1-14.参考文献[31]WangJ,WangQ,LiuY,etal.MicroRNA-92aisapotentialdiagnosticandprognosticbiomarkerforcolorectalcancer[J].Tumourbiology,2016,37(2):2547-2555.[32]SchetterAJ,LeungSH,SohnJJ,etal.MicroRNAmolecularassessmentofchroniclymphocyticleukemiaprogression[J].ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,2008,105(30):10513-10518.参考文献[33]MiotkeJA,LauBT,WittwerCT,etal.High-resolutionmeltinganalysisfordistinguishinghomozygotesandheterozygotes[J].Clinicalchemistry,2014,60(10):1192-1198.[34]WangY,LiZ,WangJ,etal.ColorimetricdetectionofmicroRNAsbasedonisothermalamplificationandgoldnanoparticles[J].Analyticalchemistry,2014,86(19):9682-9688.参考文献[35]GootenbergJS,AbudayyehOO,KellnerMJ,etal.RNAeditingwithCRISPR-Cas13[J].Science,2018,360(6386):439-444.[36]WashietlS,KellisM,GarberM,etal.Evolutionarydynamicsofgeneandregulatoryelementevolutioninmammaliangenomes[J].Science,2010,328(5981):1009-1012.参考文献[37]TripathiV,EllisJD,ShenZ,etal.Thenuclear-retainednoncodingRNAMALAT1regulatesalternativesplicingbymodulatingSRsplicingfactoractivity[J].Molecularcell,2010,39(6):925-938.[38]ClemsonCM,HutchinsonJN,SaraSA,etal.AnarchitecturalroleforanuclearnoncodingRNA:NEAT1isessentialforthestructureoftheparaspeckle[J].Molecularcell,2009,33(6):717-726.参考文献[39]PanzittK,TschernatschMM,GuellyC,etal.CharacterizationofHOTAIR,anovelintergenicnoncodingRNAinvolvedinliverhepatocellularcarcinomametastasis[J].Journalofhepatology,2013,58(1):121-127.[40]YangF,BiJ,XueZ,etal.Up-regulationoflongnon-codingRNAH19contributestoproliferationofhepatocellularcarcinomacells[J].FEBSjournal,2013,280(15):3157-3165.参考文献[41]LiH,YuB,LiJ,etal.OverexpressionofLncRNAH19enhancescarcinogenesisandmetastasisofgastriccancer[J].Oncotarget,2017,8(6):10233-10242.[42]SongY,ChenY,WangA,etal.Longnon-codingRNACCAT1promotesproliferationandinvasioningastriccancer[J].Oncologyreports,2016,35(4):2113-2120.参考文献[43]HesselsD,SmitF,VerhaeghGW,etal.DD3(PCA3)-basedmolecularurineanalysisforthediagnosisofprostatecancer[J].Europeanurology,2003,44(6):8-15.[44]WangK,ZhangS,MarzolfB,etal.QuantifyingmicroRNAsinspecifictissuesandcelltypesrevealssubsetsofextracellularmicroRNAsasbiomarkersfortissuepredication[J].Naturebiotechnology,2008,26(4):314-319.参考文献[45]ChenC,RidzonDA,BroomerAJ,etal.Real-timequantificationofmicroRNAsbystem-loopRT-PCR[J].Nucleicacidsresearch,2005,33(20):e179.[46]ShaoY,YeM,JiangX,etal.AmultiplexRT-PCRmethodfordetectionofmicroRNAs[J].Bio-protocol,2010,1(1):e19.参考文献[47]MemczakS,PapavasiliouV,PetersO.CircularRNAs:evolution,biogenesis,andfunctioninthemammaliantranscriptome[J].Science,2013,339(6121):742-746.[48]ZhangXO,DongR,ZhangY,etal.Diverserecognitionofnon-canonicalintroniccircularRNAinitiationprocess[J].Genomeresearch,2016,26(9):1281-1293.参考文献[49]JeckWR,SorrentinoJA,WangK,etal.CircularRNAsareabundant,conserved,andassociatedwithALUrepeats[J].RNA,2013,19(2):141-157.[50]HuangS,YangS,LiY,etal.CircularRNA_100855promotesesophagealsquamouscellcarcinomaproliferationandmigrationbyspongingmiR-637[J].Journalofexperimentalclinicalcancerresearch,2019,38(1):1-13.参考文献[51]MemczakS,JensM,ElefsiniotiA,etal.CircularRNAsarealargeclassofanimalRNAswithregulatorypotency[J].Nature,2013,495(7441):333-338.[52]HuangS,YangS,LiY,etal.CircularRNA_100855promotesesophagealsquamouscellcarcinomaproliferationandmigrationbyspongingmiR-637[J].Journalofexperimentalclinicalcancerresearch,2019,38(1):1-13.参考文献[53]HanD,LiJ,WangH,etal.CircularRNAcircHIPK3promotespancreaticcancerprogressionbyspongingmiR-124-3ptoupregulateSOX9expression[J].Molecularcancer,2020,19(1):1-14.[54]ChenL,ZhangJ,WangL,etal.CircRNA_0000064isanoveldiagnosticbiomarkerforcolorectalcancer[J].Journaloftranslationalmedicine,2019,17(1):1-12.参考文献[55]HanD,LiJ,WangH,etal.CircularRNAcirc_100855promotescolorectalcancerprogressionbyspongingmiR-217toupregulateROCK1expression[J].Molecularcancer,2020,19(1):1-14.[56]MitchellPS,ParkinRK,KrohEM,etal.CirculatingmicroRNAsasstableblood-basedmarkersofhumancancer[J].ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,2008,105(30):10513-10518.参考文献[57]SchwarzenbachH,HoonDS,PantelK.Cell-freenucleicacidsasbiomarkersincancerpatients[J].Naturereviewscancer,2011,11(6):426-437.[58]SchwarzenbachH,HoonDS,PantelK.Cell-freenucleicacidsasbiomarkersincancerpatients[J].Naturereviewscancer,2011,11(6):426-437.参考文献[59]ArroyoJD,ChevilletJR,KrohEM,etal.Argonaute2complexescarryapopulationofcirculatingmicroRNAsindependentofvesiclesinhumanplasma[J].ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,2011,108(12):5003-5008.[60]ChenC,RidzonDA,BroomerAJ,etal.Real-timequantificationofmicroRNAsbystem-loopRT-PCR[J].Nucleicacidsresearch,2005,33(20):e179.参考文献[61]MiotkeJA,LauBT,WittwerCT,etal.High-resolutionmeltinganalysisfordistinguishinghomozygotesandheterozygotes[J].Clinicalchemistry,2014,60(10):1192-1198.[62]SchetterAJ,LeungSH,SohnJJ,etal.MicroRNAmolecularassessmentofchroniclymphocyticleukemiaprogression[J].ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,2008,105(30):10513-10518.参考文献[63]MorinR,BainbridgeM,FejesAP,etal.ProfilingtheHeLatranscriptomewithrandomlyprimed,massivelyparallelcDNAsequencing[J].BioMedcentralgenomics,2008,9(1):1-10.[64]TangF,BarbacidM,BousquetC,etal.Sensitivityofmassivelyparallelsequencingforsingle-cellanalysis[J].ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,2010,107(44):18525-18530.参考文献[65]WangJ,WangQ,LiuY,etal.MicroRNA-92aisapotentialdiagnosticandprognosticbiomarkerforcolorectalcancer[J].Tumourbiology,2016,37(2):2547-2555.[66]ShenJ,ToddNV,ZhangP,etal.PlasmamicroRNA-21,microRNA-210,andmicroRNA-155asbiomarkersforlungcancer[J].Journalofthoraciconcology,2016,11(11):1941-1949.参考文献[67]NgEK,ChongWW,JinH,etal.DifferentialexpressionofmicroRNAsinplasmaofpatientswithcolorectalcancer:apotentialmarkerforcolorectalcancerscreening[J].Gut,2009,58(10):1375-1380.[68]FDA.InVitroDiagnosticDevices(IVDs)[EB/OL].(2023-10-01)[2023-10-10]./medical-devices/in-vitro-diagnostic-ivds.参考文献[69]SchwarzenbachH,HoonDS,PantelK.Cell-freenucleicacidsasbiomarkersincancerpatients[J].Naturereviewscancer,2011,11(6):426-437.[70]JiangP,GuS,PanJ,etal.PlasmamicroRNA-21,microRNA-210,andmicroRNA-155asnovelbiomarkersforearlydetectionofnon-smallcelllungcancer[J].Journalofthoraciconcology,2016,11(11):1941-1949.参考文献[71]YanaiharaN,CaplenN,BowmanE,etal.UniquemicroRNAmolecularprofilesinlungcancerdiagnosisandprognosis[J].Cancercell,2006,9(3):189-198.[72]XieY,ToddNV,GreenhalghAD,etal.SerummicroRNA-486asabiomarkerforthediagnosisandpostoperativefollow-upoflungcancer[J].Thorax,2014,69(1):19-26.参考文献[73]AdamsBD,ParsonsC,WalkerL,etal.Targetingnon-codingRNAsindisease[J].TheJournalofclinicalinvestigation,2017,127(4):1161-1170.[74]WangK,ZhangS,MarzolfB,etal.QuantifyingmicroRNAsinspecifictissuesandcelltypesrevealssubsetsofextracellularmicroRNAsasbiomarkersfortissuepredication[J].Naturebiotechnology,2008,26(4):314-319.参考文献[75]ChenC,RidzonDA,BroomerAJ,etal.Real-timequantificationofmicroRNAsbystem-loopRT-PCR[J].Nucleicacidsresearch,2005,33(20):e179.[76]CLIA.ClinicalLaboratoryImprovementAmendments(CLIA)[EB/OL].(2023-10-01)[2023-10-10]./Regulations-and-Guidance/Legislation/CLIA.参考文献[77]ThermoFisher.TaqManMicroRNAAssays[EB/OL].(2023-10-01)[2023-10-10]./order/catalog/product/4427975.[78]ISO.ISO15189:2012Medicallab