2026年PCR实验室试题及答案

2026年PCR实验室试题及答案一、单项选择题（每题2分，共20分）1.以下关于PCR技术的描述，正确的是：A.PCR反应体系中不需要dNTPB.TaqDNA聚合酶具有3’→5’外切酶活性C.变性温度通常设置为9498℃D.退火温度应高于引物Tm值510℃答案：C2.荧光定量PCR中，“Ct值”指的是：A.扩增产物达到平台期的循环数B.荧光信号达到设定阈值时的循环数C.引物与模板完全结合的温度点D.反应体系中dNTP耗尽的时间点答案：B3.PCR实验室分区中，属于“污染高风险区”的是：A.试剂准备区B.样本处理区C.扩增区D.产物分析区答案：D4.引物设计时，避免3’端互补的主要目的是：A.减少引物二聚体形成B.提高扩增特异性C.降低退火温度D.增加扩增效率答案：A5.以下哪种物质最可能导致PCR抑制？A.基因组DNAB.血液中的血红蛋白C.dNTPD.Taq酶答案：B6.常规PCR反应中，延伸步骤的温度一般为：A.5565℃B.72℃左右C.94℃D.4℃答案：B7.实验室使用紫外灯消毒时，有效消毒时间应至少为：A.5分钟B.15分钟C.30分钟D.60分钟答案：C8.阳性对照出现扩增但阴性对照无扩增，说明：A.实验无污染B.阳性对照污染C.扩增体系正常D.样本可能假阴性答案：C9.以下哪种操作可能导致气溶胶污染？A.缓慢打开离心管盖B.使用带滤芯吸头C.剧烈振荡样本D.分区使用专用移液器答案：C10.荧光定量PCR结果判读时，“无Ct值”且扩增曲线呈直线，最可能的原因是：A.模板浓度过高B.引物浓度过高C.模板未加入或降解D.退火温度过低答案：C二、多项选择题（每题3分，共15分，少选得1分，错选不得分）1.影响PCR扩增效率的因素包括：A.引物Tm值差异过大B.dNTP浓度过高C.Mg²+浓度过低D.循环数过多答案：ABC2.PCR实验室必须设置的功能区有：A.试剂准备区B.样本处理区C.扩增区D.产物分析区答案：ABCD3.关于PCR结果判读，正确的做法是：A.阴性对照必须无扩增B.阳性对照Ct值应在预期范围内C.样本Ct值≥38时直接判为阴性D.弱阳性结果需重复检测确认答案：ABD4.实验室生物安全操作要求包括：A.样本处理时佩戴手套、口罩B.离心管需盖紧后再离心C.废弃标本直接丢入普通垃圾桶D.操作区每日用75%乙醇擦拭答案：ABD5.荧光定量PCR的应用场景包括：A.病原体载量检测B.基因表达量分析C.基因突变筛查D.蛋白质结构鉴定答案：ABC三、判断题（每题2分，共10分，正确√，错误×）1.样本处理时应遵循“先阴性后阳性”的顺序以避免污染。（√）2.扩增区可以同时进行加样和产物分析操作。（×）3.阳性对照必须使用高浓度标准品以确保可见扩增。（×）4.引物二聚体的出现会导致Ct值假性降低。（√）5.实验室医疗废弃物需高压蒸汽灭菌后按感染性废物处理。（√）四、简答题（每题8分，共32分）1.简述PCR实验室“四区”的功能及气流方向要求。答案：PCR实验室分为试剂准备区（配制、分装PCR试剂）、样本处理区（样本核酸提取）、扩增区（PCR扩增反应）、产物分析区（扩增产物检测）。气流方向应严格遵循“试剂准备区→样本处理区→扩增区→产物分析区”，保持单向流动，避免交叉污染，可通过压差控制（如前区压力高于后区）实现。2.列举3种常见PCR污染来源，并说明对应的防控措施。答案：（1）气溶胶污染：来源为扩增产物的扩散；防控措施包括使用带滤芯吸头、分区操作、紫外灯消毒、定期清洁实验室。（2）样本间交叉污染：来源为吸样时的气溶胶或共用移液器；防控措施包括样本处理时戴手套、使用专用移液器、严格分区。（3）试剂污染：来源为试剂配制时混入扩增产物；防控措施包括在试剂准备区单独操作、使用高压灭菌水、分装小剂量试剂。3.荧光定量PCR扩增曲线分为哪几个阶段？各阶段的意义是什么？答案：（1）基线期：前15个循环左右，荧光信号未超过背景值，反映仪器检测噪声。（2）指数增长期：荧光信号随循环数呈指数增长，此阶段Ct值用于定量分析，因扩增效率稳定。（3）平台期：扩增产物积累至一定量，酶或底物耗尽，扩增速率下降，信号趋于平稳，此阶段不宜用于定量。4.某实验中，所有样本Ct值均高于阳性对照且部分样本无Ct值，可能的原因有哪些？答案：（1）核酸提取效率低：样本裂解不充分、提取试剂失效或操作失误导致核酸损失。（2）扩增体系问题：引物/探针浓度不足、Mg²+浓度不合适、Taq酶活性降低。（3）抑制物残留：样本中存在PCR抑制物（如血红蛋白、肝素）未去除。（4）反应条件设置错误：退火温度过高或延伸时间过短影响扩增效率。（5）模板浓度过低：样本本身病毒载量低或稀释过度。五、案例分析题（13分）某实验室进行新冠病毒核酸检测时，出现以下情况：阳性对照Ct=25（预期2024），阴性对照无扩增，部分临床样本Ct=3537（室内质控品Ct=30），但患者临床症状典型。请分析可能原因，并提出解决措施。答案：可能原因：（1）阳性对照Ct值偏高：可能因标准品稀释过度、保存不当导致浓度下降；或扩增体系中引物/探针浓度不足、酶活性降低。（2）样本Ct值偏高但临床症状典型：可能为样本采集不规范（如咽拭子未接触到感染部位）、核酸提取时抑制物残留（如黏液未充分裂解）、扩增反应条件（如退火温度偏高）影响效率；也可能因病毒载量处于窗口期，需结合临床症状综合判断。解决措施：（1）核查阳性对照的配制记录及保存条件，重新配制标准品并验证；（2）检查扩