病理学技术考试题真题与答案

病理学技术考试题真题与答案一、单项选择题（每题1分，共30分）1.下列哪项不是HE染色的基本步骤？A.脱蜡至水B.苏木素染色C.伊红染色D.银氨液处理答案：D解析：银氨液处理用于网状纤维染色（如Foot法），不属于HE染色流程。HE染色核心为苏木素染核、伊红染胞质。2.免疫组化染色中，DAB显色终产物呈：A.蓝色B.红色C.棕褐色D.绿色答案：C解析：DAB（3,3'-二氨基联苯胺）在H₂O₂存在下被HRP催化氧化生成不溶性棕褐色聚合物。3.用于显示糖原的固定液是：A.10%中性甲醛B.4%多聚甲醛C.冷丙酮D.Carnoy液答案：D解析：Carnoy液（无水乙醇∶氯仿∶冰醋酸=6∶3∶1）可快速穿透并保存糖原，减少水解。4.石蜡切片出现“刀痕”最常见原因是：A.组织脱水不足B.切片刀缺口C.浸蜡温度过高D.展片水温过低答案：B解析：刀口微小缺口会在切片表面留下线性划痕，即刀痕。5.下列抗体中，用于标记B细胞的是：A.CD3B.CD20C.CD68D.SMA答案：B解析：CD20为B淋巴细胞表面抗原；CD3标记T细胞；CD68标记巨噬细胞；SMA标记平滑肌。6.冷冻切片快速HE染色中，苏木素染色后最常用的返蓝试剂是：A.1%盐酸乙醇B.氨水C.磷钨酸D.碳酸锂答案：B解析：弱碱性氨水可迅速使苏木素-铝结合物由红变蓝，完成返蓝。7.网状纤维染色中，银氨液作用机制是：A.与胶原纤维结合B.与糖蛋白结合C.与网状纤维中的网状蛋白结合D.与弹性蛋白结合答案：C解析：网状蛋白含高比例二硫键，还原银氨液中的Ag⁺为金属银沉积。8.免疫荧光染色后，切片应保存在：A.室温干燥B.4℃湿盒避光C.−20℃冷冻D.37℃烘干答案：B解析：荧光染料易淬灭，4℃湿盒避光可延缓信号衰减。9.用于显示含铁血黄素的染色是：A.PASB.普鲁士蓝C.油红OD.刚果红答案：B解析：普鲁士蓝反应：Fe³⁺+K₄[Fe(CN)₆]→Fe₄[Fe(CN)₆]₃（蓝色）。10.石蜡切片厚度一般设置为：A.1μmB.3–5μmC.10μmD.20μm答案：B解析：3–5μm兼顾细胞形态完整与透光性，常规病理诊断标准。11.下列哪项不是抗原修复方法？A.高压热修复B.酶消化C.微波修复D.锇酸后固定答案：D解析：锇酸为电镜固定剂，无抗原修复作用。12.苏丹III染脂类呈：A.蓝色B.橙红色C.黑色D.紫色答案：B解析：苏丹III为脂溶性偶氮染料，将中性脂肪染成橙红色。13.切片脱蜡最常用的试剂是：A.丙酮B.二甲苯C.乙醇D.乙醚答案：B解析：二甲苯对石蜡溶解力强，常规脱蜡2×5min。14.免疫组化阳性对照应选择：A.已知阳性组织B.阴性组织C.空白切片D.一抗稀释液答案：A解析：阳性对照验证体系有效性，排除假阴性。15.电镜超薄切片染色常用的重金属盐是：A.醋酸铀+柠檬酸铅B.磷钨酸C.氯化金D.硝酸银答案：A解析：铀染核酸、膜；铅染膜蛋白，提供高电子密度反差。16.下列哪种固定液含苦味酸？A.Bouin液B.Zenker液C.Hollande液D.PLP液答案：A解析：Bouin液：甲醛+苦味酸+冰醋酸，用于胚胎组织，软化兼硬化。17.切片封固前需经“梯度乙醇”目的：A.增加折光率B.逐步脱去水分，避免组织收缩C.增强染色D.硬化组织答案：B解析：梯度乙醇（70%→95%→100%）温和脱水，防止细胞突然收缩。18.PAS染色中，过碘酸作用时间为：A.30sB.5minC.10minD.30min答案：B解析：0.5%过碘酸氧化5min，使1,2-乙二醇基→醛基，与Schiff试剂结合。19.免疫组化非特异性背景最常见于：A.一抗浓度过高B.二抗失效C.抗原修复过度D.显色时间过短答案：A解析：一抗过量导致非特异结合增加，背景染色。20.石蜡包埋时，组织块与包埋框底面应：A.垂直B.平行且贴底C.倾斜45°D.任意放置答案：B解析：平行贴底保证切片平面与刀口平行，减少修片量。21.冷冻切片OCT包埋剂主要成分是：A.聚乙二醇+聚乙烯醇B.明胶C.琼脂D.石蜡答案：A解析：OCT（optimalcuttingtemperature）为水溶性乙二醇树脂，低温固化快。22.下列哪项不是影响IHC结果的组织前处理因素？A.固定时间B.切片厚度C.抗体品牌D.烤片温度答案：C解析：抗体品牌属试剂因素，非组织前处理。23.电镜固定液戊二醛常用浓度：A.0.1%B.1%C.2.5%D.10%答案：C解析：2.5%戊二醛PBS（pH7.4）可稳定蛋白交联，维持超微结构。24.切片出现“龟裂”提示：A.脱水不足B.透明不足C.浸蜡温度过高D.刀钝答案：C解析：浸蜡>65℃使组织硬脆，切片易龟裂。25.免疫组化一抗稀释液通常含：A.0.01mol/LPBS+1%BSAB.纯水C.10%甲醛D.30%蔗糖答案：A解析：BSA封闭非特异结合，PBS维持pH与离子强度。26.显示弹性纤维的染色是：A.WeigertB.MassonC.VanGiesonD.PAS答案：A解析：Weigert间苯二酚-品红染弹性纤维呈蓝黑色。27.切片封固常用中性树胶，其折光率接近：A.1.33B.1.45C.1.52D.1.62答案：C解析：中性树胶n≈1.52，与玻璃相近，减少光散射。28.免疫组化显色后，苏木素复染时间应：A.1sB.10sC.30sD.5min答案：B解析：10s浅染胞核，避免掩盖DAB棕褐色信号。29.石蜡切片烤片最佳温度时间：A.37℃10minB.56℃30minC.80℃5minD.100℃1h答案：B解析：56℃30min使蜡微熔，组织贴附牢固，抗原保存好。30.切片出现“颤痕”提示：A.切片速度不均B.脱水过度C.刀角过大D.展片水温过高答案：A解析：手轮转速不稳，刀刃与组织接触频率变化，形成平行波纹。二、配伍题（每题1分，共10分）A.过碘酸-Schiff（PAS）B.普鲁士蓝C.油红OD.刚果红E.甲苯胺蓝31.显示淀粉样物质32.显示中性脂肪33.显示糖原34.显示含铁血黄素35.显示肥大细胞颗粒答案：31-D32-C33-A34-B35-E解析：刚果红在偏振光下呈苹果绿双折光；油红O脂溶染色；PAS染糖原；普鲁士蓝染铁；甲苯胺蓝异染性染肥大细胞颗粒呈紫红色。三、填空题（每空1分，共20分）36.免疫组化三步法顺序：一抗→________→________→DAB显色。答案：二抗（HRP标记）、HRP底物37.石蜡切片脱蜡后经________复水至水化。答案：梯度乙醇（100%→95%→70%）38.电镜超薄切片厚度为________nm。答案：50–7039.抗原修复高压锅法温度可达________℃，持续________min。答案：120、240.PAS阳性物质呈________色，位于________。答案：紫红、胞质或基底膜41.网状纤维染色后，纤维呈________色，背景呈________色。答案：黑、淡黄42.免疫荧光切片封片剂含________以防淬灭。答案：对苯二胺或DAPI+抗淬灭剂43.固定液Bouin液中，苦味酸浓度约为________%。答案：0.7–0.9（饱和水溶液）44.冷冻切片机箱体温度一般设定________℃。答案：−20至−2545.显示DNA的Feulgen反应，酸水解常用________mol/LHCl，________℃下________min。答案：1、60、8–10四、名词解释（每题3分，共15分）46.抗原修复答案：利用热、酶或化学方法逆转甲醛交联，暴露被遮蔽的抗原表位，提高抗体结合效率。47.非特异性结合答案：抗体Fc段与组织中带正电荷或疏水区域低亲和力结合，导致背景染色。48.折光率答案：光在真空与介质中速度之比，决定透明封固剂与组织界面光散射程度。49.异染性答案：染料与组织成分结合后呈现与染料本身不同的颜色，如甲苯胺蓝染肥大细胞颗粒呈紫红而非蓝色。50.半薄切片答案：0.5–1μm的树脂切片，用于光镜定位电镜观察区域，可toluidineblue染色。五、简答题（每题5分，共25分）51.简述石蜡切片出现“空洞”原因及对策。答案：原因：组织固定不足，脂滴溶解；脱水透明不彻底，浸蜡不充分；切片刀钝。对策：延长固定，4%甲醛24h；丙酮或异丙醇脱脂；更换刀片；56℃新蜡二次浸蜡。52.写出免疫组化阳性信号弱的可能技术因素。答案：一抗浓度过低或失效；抗原修复不足；HRP活性下降；DAB配制错误；切片烤片过度；复染过深掩盖信号。53.说明冷冻切片与石蜡切片在免疫荧光应用中的优劣。答案：冷冻切片保留抗原活性高，操作快，适合磷酸化蛋白；缺点是形态差，冰晶易破坏。石蜡切片形态好，可长期保存，但抗原需修复，部分表位丢失。54.列举三种显示胶原纤维的染色并给出颜色结果。答案：Masson三色：胶原蓝绿，肌纤维红；VanGieson：胶原红，肌纤维黄；Siriusred偏振光：胶原亮黄绿或橙红，具双折光。55.简述电镜生物样品四氧化锇后固定目的。答案：锇酸与不饱和脂肪酸反应生成电子致密锇黑，稳定膜结构；增加组织电子反差；同时作为第二交联剂提高硬度。六、计算与综合题（共20分）56.（10分）实验室需配制500mL0.01mol/LPBS（pH7.4），现有NaH₂PO₄·2H₂O（MW156.01）、Na₂HPO₄·12H₂O（MW358.14）、NaCl（MW58.44）。按经典比例NaH₂PO₄∶Na₂HPO₄=1∶4（摩尔比），离子强度0.15mol/LNaCl，计算各试剂用量并写出配制步骤。答案：设NaH₂PO₄为xmol，则Na₂HPO₄为4xmol。总磷酸盐：5x=0.01mol/L×0.5L=0.005mol→x=0.001molNaH₂PO₄·2H₂O质量=0.001mol×156.01g/mol=0.156gNa₂HPO₄·12H₂O质量=0.004mol×358.14g/mol=1.433gNaCl质量=0.15mol/L×0.5L×58.44g/mol=4.383g步骤：1.称取上述试剂置烧杯；2.加400mL蒸馏水搅拌溶解；3.用pH计调pH至7.4（可微加1MNaOH或HCl）；4.定容至500mL；5.0.22μm滤膜过滤，4℃保存。57.（10分）某病理中心年接收外检标本2.4万例，平均每例需3张免疫组化片，每张片一抗工作液用量150μL。若一抗原液浓度为0.2mg/mL，按1∶200稀释，计算年需一抗原液多少毫升？若改用1∶500稀释，节约抗体费用百分比？（假设抗体价格与用量成正比）答案：总片数=24000×3=72000张每张工作液150μL，总量=72000×0.15mL=10800mL1∶200稀释：原液用量=10800mL/200=54mL1∶500稀释：原液用量=10800mL/500=21.6mL节约百分比=(54−21.6)/54×100%=60%结论：提高稀释比至1∶500，年节约抗体费用60%，但需验证信号强度。七、病例分析题（共30分）58.（15分）男性，58岁，胃镜活检“胃窦大弯”2块。镜下见固有层大量梭形细胞，排列成束，核杆状，胞质红染，间质少量炎细胞。免疫组化：CD117（+）、DOG1（+）、SMA（−）、Desmin（−）、S100（−）、Ki-67约5%。问题：（1）写出最可能病理诊断。（2）指出需补充的特殊染色或分子检测。（3）若CD117阴性，下一步抗体选择？答案：（1）胃肠道间质瘤（GIST），低度危险度。（2）c-KIT或PDGFRA基因突变检测，指导伊马替尼治疗；可补做Masson三色观察胶原比例。（3）若CD117阴性，加做PDGFRA、SDHB、PKC-θ免疫组化，必要时分子检测PDGFRAD842V突变。59.（15分）女性，45岁，乳腺肿物粗针穿刺。HE：导管内增生，细胞均匀，核卵圆，可见胞质空泡，坏死缺如。免疫组化：ER（+90%，强阳）、PR（+80%，强阳）、HER2（0）、Ki-675%、p63（肌上皮+）、CK5/6（部分+）。问题：（1）给出诊断及依据。（2）若行FISH检测HER2，判断标准？（3）简述ER免疫组化阳性对照组织。答案：（1）低级别导管原位癌（LG-DCIS）。依据：单形性细胞，ER高表达，HER2阴性，Ki-67低，肌上皮存在。（2）HER2FISH：HER2/CEP17比值<2.0且HER2平均拷贝数<4.0为阴性；若比值≥2.0或拷贝数≥6.0为阳性。（3）ER阳性对照：正常乳腺组织中的导管上皮细胞核应呈强阳性，间质细胞阴性，外检可用已知阳性乳腺癌组织切片。八、论述题（共30分）60.（15分）结合实例论述多重免疫荧光（mIF）在肿瘤微环境研究中的技术流程、荧光染料选择、光谱拆借策略及定量分析方法。答案：技术流程：1.组织固定（4%PFA24h）→石蜡包埋→3μm切片→脱蜡水化；2.抗原修复：高压热修复pH9.0EDTA2min；3.阻断：10%正常羊血清30min；4.一抗混合孵育：CD8（mouse）、PD-L1（rabbit）、CK（rat）4℃过夜；5.二抗孵育：对应AlexaFluor488、555、647，避光1h；6.核染：DAPI5min；7.抗淬灭封片；8.全景扫描：VectraPolaris多光谱成像系统，420–720nm每10nm采集；9.光谱拆借：使用自动拆分算法（inForm）去除自发荧光，基于纯染料光谱库；10.定量：阳性细胞密度（cells/mm²）、共定