兽医化验员专项考核试卷及答案

兽医化验员专项考核试卷及答案一、单项选择题（每题2分，共40分）1.实验室配制0.9%生理盐水时，若需配制500ml，应称取氯化钠的质量为（）A.4.5gB.5gC.9gD.18g2.进行革兰氏染色时，关键的脱色步骤应使用（）A.95%乙醇B.无水乙醇C.丙酮D.二甲苯3.犬血常规检测中，正常成年犬淋巴细胞百分比参考范围是（）A.5%-15%B.20%-45%C.50%-70%D.75%-85%4.检测猪瘟病毒抗原时，最常用的血清学方法是（）A.间接血凝试验（IHA）B.酶联免疫吸附试验（ELISA）C.中和试验（NT）D.琼脂扩散试验（AGP）5.实验室高压蒸汽灭菌的标准条件是（）A.100℃、30分钟B.121℃、15-20分钟C.160℃、2小时D.180℃、30分钟6.进行血液涂片时，推片与载玻片的角度应控制在（）A.15°-20°B.25°-30°C.45°-50°D.60°-70°7.检测禽流感病毒核酸时，首选的分子生物学方法是（）A.普通PCRB.实时荧光定量PCR（qPCR）C.环介导等温扩增（LAMP）D.核酸杂交8.犬细小病毒快速检测试纸条的检测原理是（）A.抗原-抗体胶体金免疫层析B.酶标抗体显色反应C.核酸探针杂交D.红细胞凝集抑制9.实验室常用的吉姆萨染液主要用于（）A.细菌形态观察B.血液细胞分类计数C.病毒包涵体检测D.真菌孢子染色10.进行细菌分离培养时，若样本含杂菌较多，应选择的培养基是（）A.营养琼脂B.麦康凯琼脂C.血琼脂D.巧克力琼脂11.检测奶牛布鲁氏菌病的国家标准方法是（）A.虎红平板凝集试验（RBPT）B.试管凝集试验（SAT）C.补体结合试验（CFT）D.以上均是12.实验室离心机使用时，若离心管未对称放置，最可能导致的后果是（）A.转速无法达标B.离心管破裂C.电机损坏D.样本溶血13.进行血清生化检测时，若样本发生溶血，会导致（）指标升高A.总蛋白（TP）B.谷丙转氨酶（ALT）C.葡萄糖（GLU）D.尿素氮（BUN）14.检测马传染性贫血病毒的特异性方法是（）A.琼脂免疫扩散试验（AGID）B.血凝试验（HA）C.间接免疫荧光试验（IFA）D.聚合酶链式反应（PCR）15.实验室配制1mol/LNaOH溶液时，正确的操作是（）A.直接称取40gNaOH溶于1L水中B.称取40gNaOH溶于少量水，冷却后定容至1LC.称取40gNaOH溶于1L沸水D.称取40gNaOH溶于1L无水乙醇16.进行病毒滴定（TCID50）时，判定结果的依据是（）A.细胞病变（CPE）出现的孔数B.荧光显微镜下的阳性细胞数C.显色反应的OD值D.红细胞凝集的滴度17.检测鸡新城疫抗体时，常用的方法是（）A.血凝抑制试验（HI）B.酶联免疫吸附试验（ELISA）C.中和试验（NT）D.以上均可18.实验室冰箱温度监控要求中，4℃冰箱的温度允许波动范围是（）A.0-4℃B.2-8℃C.4-10℃D.8-12℃19.进行药敏试验时，纸片扩散法（K-B法）的标准培养基是（）A.营养琼脂B.M-H琼脂C.血琼脂D.巧克力琼脂20.检测猪蓝耳病（PRRS）病毒核酸时，引物设计的靶基因通常选择（）A.ORF1B.ORF5C.ORF7D.NSP2二、判断题（每题1分，共10分）1.实验室废弃的化学试剂可直接倒入下水道。（）2.进行PCR检测时，阳性对照出现扩增曲线，阴性对照无扩增，说明实验未污染。（）3.血液样本采集后应在2小时内完成检测，否则会影响细胞计数结果。（）4.革兰氏阳性菌经染色后呈红色，革兰氏阴性菌呈紫色。（）5.检测弓形虫抗体时，IgM抗体阳性提示近期感染，IgG抗体阳性提示既往感染。（）6.高压蒸汽灭菌时，为确保效果，物品应紧密堆放。（）7.进行细菌计数时，麦氏比浊管0.5号相当于1.5×10^8CFU/ml。（）8.血清样本长期保存应置于-20℃以下，避免反复冻融。（）9.检测犬瘟热病毒时，眼鼻分泌物比血液样本的检出率更高。（）10.实验室生物安全柜使用后，需用75%酒精擦拭内部，无需紫外线照射。（）三、简答题（每题8分，共40分）1.简述ELISA检测抗原的操作步骤（以检测猪伪狂犬病病毒抗原为例）。2.列举5种常见的血液分析仪检测参数，并说明其临床意义。3.细菌分离培养时，如何区分纯培养与混合培养？需要哪些操作验证？4.简述PCR实验室分区要求及各区域的功能。5.实验室质量控制中，室内质控（IQC）的主要内容包括哪些？四、案例分析题（每题15分，共30分）案例1：某犬场爆发疫情，病犬表现为高热（40.5℃）、咳嗽、流脓性鼻液，部分犬出现神经症状（抽搐）。场主怀疑为犬瘟热病毒感染，送3份病料（眼鼻分泌物、血液、脑组织）至实验室检测。问题：（1）请设计实验室检测方案（包括检测方法及选择依据）。（2）若检测结果为犬瘟热病毒核酸阳性，需进一步做哪些验证？案例2：某猪场育肥猪群出现腹泻，粪便呈水样、灰褐色，部分含黏液。采集5份粪便样本，镜检未发现寄生虫卵，细菌分离培养见革兰氏阴性杆菌。问题：（1）可能的病原是什么？需进一步做哪些检测？（2）若检测为猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）阳性，如何区分TGEV与猪流行性腹泻病毒（PEDV）？答案一、单项选择题1.A2.A3.B4.B5.B6.B7.B8.A9.B10.B11.D12.C13.B14.A15.B16.A17.D18.B19.B20.B二、判断题1.×2.√3.√4.×5.√6.×7.√8.√9.√10.×三、简答题1.ELISA检测抗原步骤：①包被：用抗猪伪狂犬病病毒单克隆抗体包被酶标板，4℃孵育过夜；②封闭：加入封闭液（如5%牛血清白蛋白），37℃孵育1小时，洗板3次；③加样：加入待检病料处理液（如组织匀浆上清），同时设阳性、阴性对照，37℃孵育1小时，洗板5次；④加酶标抗体：加入HRP标记的抗伪狂犬病毒多克隆抗体，37℃孵育1小时，洗板5次；⑤显色：加入TMB显色液，避光反应15分钟；⑥终止：加入2MH2SO4终止反应，酶标仪读取450nm波长OD值；⑦判读：样本OD值≥2.1倍阴性对照均值为阳性。2.血液分析仪常见参数及意义：①红细胞计数（RBC）：降低提示贫血，升高提示脱水或真性红细胞增多；②血红蛋白（HGB）：与RBC呈正相关，反映贫血程度；③白细胞计数（WBC）：升高常见于细菌感染、炎症，降低见于病毒感染或免疫抑制；④血小板计数（PLT）：降低提示出血性疾病或血小板减少症；⑤淋巴细胞百分比（LY%）：升高常见于病毒感染（如犬瘟热），降低见于免疫缺陷。3.区分纯培养与混合培养方法：①观察菌落形态：纯培养菌落形态、大小、颜色一致；混合培养可见两种及以上不同形态菌落；②涂片染色镜检：纯培养细菌形态、染色性一致；混合培养可见多种形态（如球菌+杆菌）或不同染色性（革兰氏阳性+阴性）；③传代培养：取单个菌落再次划线接种，若仍出现单一形态菌落为纯培养，否则为混合培养。4.PCR实验室分区及功能：①试剂准备区：配制PCR反应体系（引物、dNTP、酶等），需专用冰箱、移液器；②样本处理区：核酸提取（包括样本裂解、纯化），需生物安全柜、离心机；③扩增区：加入模板进行PCR扩增，需PCR仪、离心机；④产物分析区：电泳检测或荧光读取，需电泳仪、凝胶成像系统。注：各区严格单向流动，避免交叉污染。5.室内质控主要内容：①人员培训：确保操作规范，定期考核；②仪器校准：天平、移液器、离心机等需定期计量；③试剂管理：记录批号、有效期，使用前做阳性/阴性对照；④检测过程：每批样本加质控品（如弱阳性质控、空白质控），监控重复性；⑤结果审核：双人核对数据，异常结果复查；⑥记录保存：包括仪器使用、试剂消耗、质控数据等，保存至少2年。四、案例分析题案例1：（1）检测方案：①核酸检测（首选）：采集眼鼻分泌物/脑组织，提取RNA，用RT-PCR或qPCR检测犬瘟热病毒N基因（保守区），因该部位病毒载量高，检出率高于血液；②抗原检测：使用胶体金试纸条检测眼鼻分泌物中的犬瘟热病毒抗原，快速筛查；③血清学检测：采集血液分离血清，用ELISA检测犬瘟热病毒抗体（IgM/IgG），辅助判断感染阶段（IgM阳性提示急性感染）。（2）验证措施：①重复检测：用不同批次试剂或不同引物对（如检测H基因）重新扩增，确认结果一致性；②测序分析：对PCR产物进行测序，与GenBank中犬瘟热病毒参考序列比对（同源性≥98%）；③病毒分离：将阳性样本接种犬肾细胞（MDCK），观察细胞病变（CPE），并通过免疫荧光验证。案例2：（1）可能病原及检测：可能病原：猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）、轮状病毒（RV）或产肠毒素大肠杆菌（ETEC）。进一步检测：①病毒检测：提取粪便RNA，用多重RT-PCR同时检测TGEV、PEDV、RV的特异性基因；②细菌检测：对分离的革兰氏阴性杆菌进行生化鉴定（如IMViC试验），并检测肠毒素基因（如LT、ST）；③电镜观察：负染色后用电子显微镜观察病毒形态（TGEV为冠状病毒，有包膜、棒状棘突）。（2）区分T