2025年植病研究法试题及答案

2025年植病研究法试题及答案1.单项选择题（每题1分，共20分）1.1柯赫氏法则第四步“再分离培养”的核心目的是A.验证分离物是否为纯培养B.比较原始病组织与再分离菌株的形态差异C.证明再分离菌株与原始致病菌株为同一病原D.测定病原菌的致病力强弱答案：C1.2利用RealtimeqPCR检测植物病原真菌时，选择内参基因的首要标准是A.片段长度<200bpB.在病原菌与寄主中均稳定表达C.扩增效率>110%D.引物Tm值差异>5℃答案：B1.3进行稻瘟病菌非亲和小种鉴定时，国际通用的一套近等基因系品种简称为A.IRRIBLB.LTHsetC.CO39NILsD.MonogenicLines答案：D1.4在组织切片中观察菌丝隔膜，最佳染色剂为A.0.05%台盼蓝乳酸酚B.3%KOH荧光增白剂C.酸性品红苯胺蓝D.苏丹Ⅲ乙醇答案：A1.5测定细菌胞外多糖（EPS）对致病力贡献时，最常用的构建突变体策略是A.Tn5随机插入B.同源双交换敲除eps基因簇C.CRISPRdCas9抑制D.反义RNA沉默答案：B1.6利用农杆菌介导的瞬时表达研究效应蛋白功能，通常注射本氏烟叶片后观察时间为A.6hB.12hC.24–48hD.7d答案：C1.7在田间调查柑橘溃疡病严重度时，国际推荐的取样单元数为A.每园5点，每点2树，每树10叶B.每园对角线3点，每点1树，每树30叶C.每园棋盘式10点，每点1果枝D.每园随机walk，共100果答案：A1.8下列哪种统计分布最适合描述“病株率”资料A.正态分布B.二项分布C.泊松分布D.负二项分布答案：B1.9进行血清学ELISA检测时，封闭液通常选用A.5%脱脂奶粉PBSB.10%甘油PBSC.0.1%Tween20PBSD.1%SDSPBS答案：A1.10在RNAseq差异表达分析中，校正多重假设检验的经典方法是A.BonferroniB.FDRBHC.TukeyD.Duncan答案：B1.11利用GFP标记病原菌时，为提高荧光强度，通常采用的启动子为A.gpdAB.35SC.UbiD.nptII答案：A1.12测定卵菌游动孢子趋化性时，微孔室法常用的趋化物为A.0.1MCaCl₂B.1%蛋白胨C.10mM肉桂酸D.0.5M谷氨酸答案：C1.13在温室人工接种中，维持饱和湿度最关键的设备是A.超声波加湿器+定时器B.离心喷雾器C.高压喷枪D.循环风扇答案：A1.14利用ISSR分子标记分析群体遗传结构时，首选的聚类算法为A.UPGMAB.NeighborJoiningC.MaximumParsimonyD.Bayesian答案：A1.15测定细菌III型分泌系统（T3SS）抑制剂活性时，常用报告基因为A.luxCDABEB.gfpC.hrpA::uidAD.lacZ答案：C1.16在田间药效试验中，GCP原则要求试验药剂与对照药剂应A.有效成分相同B.剂型相同C.施药器械相同D.以上全部答案：D1.17利用VIGS沉默植物基因时，最常用载体源自A.TMVB.PVXC.TRVD.CMV答案：C1.18测定真菌抗药性突变频率时，常用的选择性培养基含A.苯莱特+链霉素B.多菌灵+氯霉素C.甲霜灵+利福平D.戊唑醇+四环素答案：B1.19在扫描电镜样品制备中，去除表面水分的关键步骤是A.临界点干燥B.冷冻固定C.戊二醛固定D.锇酸后固定答案：A1.20利用无人机多光谱遥感监测柑橘黄龙病时，最具指示性的植被指数为A.NDVIB.GNDVIC.RededgeNDVID.DVI答案：C2.多项选择题（每题2分，共20分；每题至少有两个正确答案，多选少选均不得分）2.1下列哪些措施可有效降低PCR假阳性A.分装试剂B.紫外照射工作台C.增加循环数至45D.使用dUTPUNG系统答案：A、B、D2.2关于植物病原细菌分泌蛋白转运途径，正确的有A.T3SS依赖ATPB.T4SS可转运DNAC.T2SS主要分泌细胞壁降解酶D.Sec途径需信号肽酶Ⅱ答案：A、B、C2.3在构建真菌遗传连锁图谱时，必需软件包括A.MapManagerB.JoinMapC.R/qtlD.Structure答案：A、B、C2.4下列属于活体营养型病原的有A.白粉菌B.稻瘟病菌C.锈菌D.灰霉菌答案：A、C2.5关于CRISPRCas12a系统特点，正确的有A.仅需单个crRNAB.识别PAM序列为TTTVC.产生黏性末端D.可多重编辑答案：A、B、D2.6测定病原菌生物膜形成量，常用定量指标有A.结晶紫染色OD570B.菌落直径C.活菌计数CFUD.扫描电镜评分答案：A、C、D2.7在田间药效试验中，属于二级防效计算指标的有A.病情指数下降率B.防效C.增产率D.相对防效答案：B、D2.8下列哪些因素会影响qPCR扩增效率A.引物二聚体B.模板降解C.镁离子浓度D.探针荧光淬灭答案：A、B、C2.9利用农杆菌介导转化真菌时，提高转化率的措施有A.共培养pH5.3B.添加乙酰丁香酮200μMC.使用新鲜菌丝D.热激50℃30min答案：A、B、C2.10关于植物抗病性诱导剂，正确的有A.BTH诱导系统获得抗性B.壳寡糖激活PTIC.β氨基丁酸抑制HRD.水杨酸信号依赖NPR1答案：A、B、D3.填空题（每空1分，共30分）3.1柯赫氏法则共包括________个步骤，其中第三步要求________。答案：4；将纯培养物接种于健康寄主并再现相同症状3.2在qPCR中，阈值线应设定在扩增曲线________期，且高于________。答案：指数；基线噪音3.3测定真菌孢子浓度时，血球计数板中央大方格容积为________nL，若孢子数为150，则浓度为________孢子/mL。答案：0.1；1.5×10⁶3.4植物病原细菌革兰氏染色常用试剂为________、________、________三步。答案：结晶紫、碘液、番红3.5进行稻瘟病菌非亲和小种鉴定时，国际统一喷雾接种浓度为________孢子/mL，接种后保湿________h。答案：1×10⁵；243.6在ISSRPCR中，引物设计核心为________重复序列，退火温度一般比常规RAPD高________℃。答案：简单序列；5–83.7利用GFP标记病原菌时，常用筛选抗生素为________，工作浓度对真菌为________μg/mL。答案：hygromycin；1503.8测定卵菌游动孢子释放率公式为________。答案：（释放孢子数/总孢子数）×100%3.9在田间调查病害时，若病级分为0–9级，共________个等级，其中7级代表病斑面积占叶片面积________。答案：10；50–75%3.10利用ELISA检测植物病毒时，底物TMB显色终止液为________，阳性孔颜色变为________。答案：2MH₂SO₄；黄色3.11测定细菌生长曲线时，OD600每增加0.3约相当于________CFU/mL，平台期细菌处于________状态。答案：1×10⁸；动态平衡3.12在RNAseq建库中，去除rRNA常用试剂盒为________，片段化条件为________℃，________min。答案：RiboZero；94；83.13利用CRISPRCas9敲除真菌基因时，若donor模板含________bp同源臂，敲除效率可提高至________%以上。答案：1000；803.14测定药剂对菌丝扩展抑制率时，对照组菌落直径为80mm，处理组40mm，则抑制率为________%。答案：753.15在Bayesian聚类分析中，ΔK最大值对应最佳K值，该算法由________软件实现。答案：Structure4.简答题（封闭型，每题5分，共25分）4.1简述利用RealtimeqPCR绝对定量病原菌生物量的实验流程。答案：①提取样品总DNA；②设计物种特异性引物与TaqMan探针；③构建含目标片段的质粒并梯度稀释制作标准曲线；④样品与标准品同步进行qPCR，获得Ct值；⑤根据标准曲线方程计算样品中目标DNA拷贝数，换算为每克叶片组织病原生物量。4.2说明利用农杆菌介导的瞬时表达验证效应蛋白抑制植物免疫的实验要点。答案：①将效应蛋白基因构建到植物表达载体35S启动子下游；②转化农杆菌GV3101，注射浓度OD600=0.5；③共注射BAX或INF1诱导PCD；④48h观察叶片坏死程度，台盼蓝染色定量；⑤设置空载体对照，验证效应蛋白抑制HR能力。4.3列举三种测定真菌抗药性突变体适合度的方法并给出关键指标。答案：①菌丝生长速率：测定菌落半径日增量；②孢子产量：每cm²菌落产孢数；③致病力：活体叶片接种病情指数；④竞争适合度：按1:1混合野生型与突变型，继代培养三代后qPCR测定等位基因频率变化。4.4简述利用VIGS沉默植物抗病基因验证其功能的操作步骤。答案：①选择目标基因300–400bp片段，构建到TRV2载体；②转化农杆菌，注射本氏烟下部叶片；③14d后取上部系统叶片提取RNA，RTqPCR检测沉默效率；④接种病原菌，记录病斑面积；⑤与TRV2空载体对照比较，评估抗病性变化。4.5说明田间药效试验中“四因素三水平”正交设计的优点及统计分析方法。答案：优点：减少试验次数，获得各因素主效应与交互效应；分析：采用ANOVA，计算F值与P值，利用极差R排序因素重要性，最优组合通过综合评分法确定。5.简答题（开放型，每题10分，共20分）5.1结合实例论述如何利用多组学整合解析病原菌致病的关键通路。答案：以稻瘟病菌为例，首先比较侵染0h、24h、72h的转录组，发现MoAP1等转录因子显著上调；随后进行TMT标记蛋白组，确认MAPK级联蛋白磷酸化增强；进一步利用GCMS代谢组发现侵染后甘油、甘露醇积累；整合分析锁定MAPK甘油合成通路，构建MoGPD1敲除体，致病力下降70%，证实该通路为关键致病途径。5.2讨论在气候变化背景下，如何利用病害预测模型指导病害治理。答案：收集历史病情、气象、作物品种抗性数据，构建基于机器学习（随机森林/XGBoost）的预测模型，输入未来RCP8.5情景下温度、降雨预测，输出病情指数；结合GIS空间插值，生成高风险区图；通过手机App向农户推送施药建议，减少农药用量20%，延缓抗药性产生。6.应用题（综合类，共35分）6.1计算题（10分）在温室试验中，设对照组与3种药剂处理，每处理5盆，每盆3株，接种7d后调查病级（0–5级），数据如下：对照：0,1,2,3,4,5,4,3,2,1,0,2,3,4,5处理A：0,0,1,1,2,2,1,1,0,0,1,1,2,2,1处理B：0,0,0,1,1,0,0,1,0,0,0,0,1,1,0处理C：0,0,0,0,0,0,0,0,0,0,0,0,0,0,0（1）计算各处理病情指数（DI）；（2）计算相对防效；（3）用Duncan法比较差异显著性（α=0.05）。答案：（1）DI=Σ（病级×株数）/（最高级×总株数）×100对照DI=45%；A:DI=20%；B:DI=10%；C:DI=0%（2）相对防效=（对照DI－处理DI）/对照DI×100A:55%；B:78%；C:100%（3）经单因素ANOVA，F=68.4，P<0.001；Duncan显示C<B<A<对照，差异显著。6.2分析题（10分）某研究团队从发病苹果枝条分离到一株真菌，形态似拟茎点霉，但ITS序列与已知Phomopsis参考菌相似度仅96%，请设计实验确认其是否为新种。答案：①多基因系统发育：扩增ITS、TEF1α、TUB2、CAL，联合建树；②形态学：测量分生孢子大小、产孢细胞形态，与近缘种比较；③生理：温度、碳源利用；④致病性：回接苹果枝条，完成柯赫氏法则；⑤基因组：测定全基因组，计算ANI与参考菌<95%，即可定为新种。6.3综合设计题（15分）请设计一个“田间实验室模型”一体化方案，用于监测和治理2025年黄淮海地