外泌体环状RNA在卵巢恶性肿瘤诊疗中的研究进展总结2026

外泌体环状RNA在卵巢恶性肿瘤诊疗中的研究进展总结2026外泌体是直径30~150nm的膜性囊泡，源于多囊泡体与细胞膜融合，内RNA(circularRNA,circRNA)因闭环结构半衰期>48h,体内稳定性显著优于线性RNA(平均半衰期<10h)[2,3]。2015年Valadi恶性肿瘤研究的新纪元[4,5,6]。外泌体circRNA因具有组织特阔，研究人员们在外泌体circRNA作为卵巢恶性肿瘤诊断标志物[7,8,9]、治疗转化[9]方面做了大量相关研究。本文旨在综述外泌体一、外泌体circRNA的分子生物学基础(一)外泌体的生物形成外泌体的体融合。其次，早期内体膜反向出芽，形成富稳定度高[2,3]。根据来源与结构，circRNA主要分为三类：其一是外显子circRNA,最常见，约占circRNA的70%,由外显子反向剪接形成，仅含外显子序列，定位于细胞质[5];其二是内含子circRNA,由内含子环化产生，定位于细胞核，形成依赖于内含子的特定保守序列[12];其三是外显子-内含子circRNA,同时含外显子与内含子序列，由反向剪接和内含子保留形成，分布于细胞核及细胞质[13,14]。微小RNA(microRNA,miRNA)海绵，可结合miRNA,阻断miRNA对靶mRNA的抑制，从而上调靶基因表达[6,9]。同时，circRNA作为RNA结合蛋白(RNAbinding特异性结合，形成稳定的复合物，调控基因表达[6,15]。部分circRNA还具有翻译模板功能[13],虽然大多数circRNA被认为能参与转录调控[16,17],(三)外泌体对circRNA的封装及影响因素1.circRNA序列特征：外泌结合因子1(AU-richelementRNA-bindingfactor1,AUF1)识别序可通过AUF1结合促进其进入外泌体[11,18,19]。缺氧(氧浓度<2%)或炎症因子如肿瘤坏死因子a刺激下，可改变封装模式。肉瘤融合蛋白(fusedinsarcomaprotein,FUS)是一种RNA结合蛋白。缺氧时，FUS会迁移至应激颗粒并结合转移性细胞比低转移性细胞的外泌体分泌量高1.8倍，且高转移性细胞circRNA(如circ_051239)的封装效率比低转移性细胞高3倍，表明细胞转移能力与外泌体circRNA的封装和分泌密切相关[9]。(四)外泌体circRNA检测技术1.外泌体分离技术的比较与适用环境：超速离心法基于密度差异进行密度梯度离心分离泌体纯度>90%,在科研领域被认为是获取高纯度外泌体的“金标准”方法[18]。但这种方法需超速离心超过16h,成本较高，临床大规模应用受限。免疫磁珠法利用分化群63(clusterofdifferentiation63,特异性强，对稀有外泌体分选优势显著,但成本高、通量低，且样本量受限[21,22]。聚合物沉淀法是采用聚乙二醇等聚合物改变溶液性质使外泌体沉淀。操作简便快速，适用于临床方法原理简单，易混入杂质(如脂蛋白)干扰后续分析[23]。微流但这种方法设备复杂、成本高，需专业人员操作[24]。见表1。2.circRNA检测技术的进展与应用场景：circRNA检测技术主要包括高通量筛选、定量验证和新兴技术，这些技术在卵微阵列技术基于探针杂交，可检测大量circRNA,如AgilentSurePrint平台可同时检测>10000种circRNA。研究人员应用AgilentSurePrint平台筛选出了43种卵巢癌中差异表达的circRNA,其中6种circRNA表达上调，37种circRNA表达下调[7,25]。转录组测序 (RNA-sequencing,RNA-Seq)结合RNA去除以及链特异性建库，可全面鉴定新circRNA及异构体。IlluminaNovaSeq测序平台单次运行可产生100GB数据，在卵巢癌外泌体研究中，通过该平台发现了237个新的circRNA[26]。实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(real-timequantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction,qRT-PCR)技术通过设计跨剪接位点引物，能够特异性地扩增circRNA,实现对其表达水平的定量检测。在临床研究中，采用qRT-PCR技术验证了circ_0001068在卵巢癌患者血清外泌体中的表达水平比健康人群高4.2倍，为circ_0001068作为卵巢恶性肿瘤诊断标志物提供了有力的证据[7]。数字PCR (digitalPCR,dPCR)技术通过微滴化反应体系，将样品中的circRNA进行分割，可以实现对单个circRNA分子的绝对定量。传统测序中一次测序只能读取DNA或RNA片段中很短的一部分序列导致的异构体鉴定困难，在卵巢癌外泌体circRNA的全长分析中得到了应用[27,28]。通过纳米孔测序，可以更准确地了解circRNA的结机制[27,28]。荧光原位杂交(fluorescenceinsituhybridization,FISH)技术结合外泌体荧光标记，能够定位circRNA在肿瘤组织中的分二、外泌体circRNA在卵巢癌诊断中的意义与挑战1.外泌体circRNA关探索中已取得阶段性成果，其中circ_0001068研究证实。Wang等[7]研究发现，血清外泌体circ_0001068的受试者工作特征曲线的曲线下面积(areaunderthecurve,AUC)达0.86,敏感度82%、特异度79%,优于传统标志物CA125(AUC仅为0.78),卵巢癌患者中阳性率为65%,Ⅲ期或IV期阳性率升至89%,可有效弥补早期卵巢癌诊断手段不足的短板；同时，circ_0001影像学复发前3个月即升高至正常水平的2.1倍，成为肿瘤复发预警的潜巢癌组织、血浆外泌体及细胞培养上清液中均circ_051239的表达水平与肿瘤恶性程度密切相关，G3级(低分化)肿瘤中的表达水平显著高于G1级(高分化)肿瘤(P<0.01);在淋巴结的表达水平可作为评估肿瘤转移风险的重要参考。此外，腹水中外泌体circ_051239水平与腹水量呈强正相关(相关系数r=0.68,P<0.001),为监测卵巢癌腹膜转移进展提供了新的量化指标[9]。为进一步提升诊断效能，Chen等[12]基于exoRBase数据库构建了包含circ_0001068、circ_0合检测模型表现出对卵巢癌优异的诊断性能，AUC高达0.92,敏感度为91%、特异度为85%,以0.62为截断值时对早期卵巢癌患者的正确分类率达92%,显著优于单一标志物。该联合检测模型通过LASSO回归算法筛选核心变量，经1000次自助法(bootstrap)验证确认稳定性良好，2.外泌体circRNA液体活检的优势及面临的关键挑战：外泌体circRNA现明显升高，而传统标志物CA125在荷瘤3周时才能检出水平升高，影像学检查在荷瘤4周时才可检出肿瘤，CA125与影像学检查对肿瘤的检出均晚于circ_0001068,这一发现表明外泌体circRNA能够为卵巢癌筛同样表现出重要价值[8]。研究疗药物的敏感性，快速判断治疗方案的有效性，尽管优势显著,外泌体circRNA液体活检仍面临多重关键挑战，制约其临床广泛应用。其一，生物样本异质性干扰检测准确性[30]。血液样本中正常细胞(如血小板、白细胞)来源的外泌体占比高达40%~60%,会干扰肿瘤源性外泌体的信号；腹水样本中间皮响检测结果[7]。目前，研究人员已探索通过上皮细胞黏附分子 (epithelialcelladhesionmolecule,EPCAM)表面标志物筛选肿瘤源性外泌体，或白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)进行背景校正等策异[3,18]。不同实验室采用的分离方法、仪器设备及操作流程不同，导致回收率差异达20%~30%,影响检测结果的可比性。对此，美国国立卫生研究院启动了外泌体质量控制(exosomequality范[3,27]。不同研究团队的引物设计差异可能导致同一circRNASanger测序验证跨剪接位点特异性，确保引物能够精准扩增目标circRNA,提高检测结果的准确性与重复性。见表2。三、外泌体circRNA在卵巢癌治疗中的潜力探索(一)靶向circRNA的治疗策略研究1.RNA干扰技术的应用与进展：RNA干扰(RNA平下降了75%,这表明siRNA介导的RNAi抑制了circ_051239表达；后，细胞侵袭能力降低60%[9]。为了将RNAi技术应用于体内治疗，研究人员采用脂质纳米颗粒(lipid个核心环节，完善了LNP介导的卵巢癌基因治疗体系[32,33,34]。策略。未来可进一步结合卵巢癌外泌体circRNA,开发个体化LNP递送(CRISPR-associatednuclease,Cas9)基因编辑的探索及突破：CRISPR/Cas9基因编辑技术为靶向circRNA治疗卵巢癌带来了新的突破。该基因编辑技术通过设计特异性的单向导RNA(singlesgRNA),能够精确地靶向circRNA前体mRNA的反向剪接位点，通过改变circRNA的表达水平，从而实现对circRNA生成的精准调控，为癌CRISPR/Cas9介导的circRNA编辑通过编辑异常表达的致癌或抑癌circRNA,可干预癌症相关信号通路，该技术也能助力明确特定circRNA在癌症中的具体功能，解决此前指出，可通过优化sgRNA设计、结合催化失活的Cas9构建调控系统等方法解决脱靶效应[35]。此外，该技术在临床转化中还面临递送效率、免疫原性等挑战，这些均为后续CRISPR/Cas9用于circRNA靶向(二)外泌体作为药物递送载体的工程化改造研究外泌体作为一种天然的纳米级载体，具有良好的生物相容性和低免胞。研究表明，抗EPCAM抗体修饰的外泌体EPCAM合效率比未修饰外泌体高3.8倍[36]。这表明通过靶向修饰，外泌体能够更有效地将治疗性核酸递送至卵巢癌细装载技术方面，电穿孔法是一种常用的方法。高电场，使外泌体膜产生瞬时小孔，从而将内容物(如siRNA)装载到外泌体内部。电穿孔法的装载效率较高，可达60%以上。但电穿孔法可能会对外泌体膜结构造成一定的破坏，影响外泌体的稳定性和功能[37],(三)面临挑战与应对策略探讨尽管外泌体在卵巢癌治疗中展现出了巨大来解决。正常细胞对修饰后的外泌体存在非等[36]提出了双靶向修饰策略，在多种肿瘤细胞及肿瘤干细胞表面表达，通过同大分子药物的装载效率较低，这限制了外泌体作为药物载体的应用范围。子药物进入外泌体内部，通过这种联合技术至75%[39],这一技术的突破为外泌体装载大分子药物(如蛋白质、核酸等)提供了有效的方法。外泌体在体内会被网状内皮系统快速清除，被网状内皮系统识别和清除的概率。经过聚乙半衰期延长至12h[40]。这使得外泌体能够在体内更长时间地循环，较低，10L培养液仅能收获1mg外泌体，为了解决这一问题，研究人员采用悬浮培养结合微载体技术。悬浮培养能够增产量提升了10倍[41],为外泌体的大规模生产提供了可行的方法，单细胞水平上解析肿瘤微环境中不同细胞(如肿瘤细胞、免疫细胞等)外泌体circRNA的异质性。单细胞circRNA