植物组织培养技术实践应用（菊花）课件-高二下学期生物人教版选择性必修3

植物组织培养技术的应用与实践待到秋来九月八，我花开后百花杀。食用菊（ediblechrysanthemum）

是菊属下的一个种，多年生宿根草本植物。花器中含有菊花甙、腺嘌呤、氨基酸及微量元素等，有清热解毒、平肝明目之功效。菊花白锈病是一种重要的世界性菊花病害堀氏菊柄锈菌（Pucciniahoriana）资料1：研究人员选择了在菊花白锈病病程中具有潜在重要性的一个基因CmTGA1作为靶点，建立CRISPR/Cas9介导的基因编辑系统，为探索基因功能并促进菊花育种奠定基础。

经基因编辑后的菊花植株如何实现高效、快速繁殖？资料2：利用传统的农杆菌侵染转化法将含有CRISPR-CmTGA1的重组质粒转入菊花，得到转基因植株。任务1：设计菊花组织培养的技术流程图1.初步绘制示菊花组织培养的技术流程图。接种外植体愈伤组织丛状芽完整植株移栽成活脱分化再分化说明实验原理？2.如何判断上述各阶段实验是否成功？可从哪些角度进行观测？发芽再分化生根肉眼观测或者使用显微镜等工具检测。接种外植体脱分化形成愈伤组织再分化生芽、生根移栽成活任务1：设计菊花组织培养的技术流程图接种外植体诱导愈伤组织丛状苗完整植株移栽成活脱分化再分化3.外植体发育成完整植株需要哪些条件？发芽再分化生根外植体能发育为完整植株需要哪些条件呢？条件1：无菌避免杂菌在培养基上迅速生长消耗营养，同时防止有些杂菌危害培养物的生长。思考：

1.为什么整个过程要保证无菌操作？培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）、接种的无菌操作（酒精、酒精灯灼烧）；外植体的消毒（酒精、次氯酸钠溶液）。2.如何保证无菌环境？资料：一种常见的实验室外植体消毒方法是在超净工作台内进行外植体的消毒灭菌处理（表2-1）：用75%的酒精浸泡外植体0.5min、1.0min、2.0min（浸泡过程中不断摇晃震荡，使外植体完全浸入酒精），无菌水涮洗3-5次，再用0.1%HgCl2（升汞）浸泡外植体10min、15min、20min后，再用无菌水涮洗3-5次，确保外植体上无消毒剂残留。

3.对外植体消毒处理应该注意哪些方面？既能达到较好的消毒效果，又不损伤外植体的活性。任务1：设计菊花组织培养的技术流程图接种外植体愈伤组织丛状芽完整植株移栽成活脱分化再分化发芽再分化生根酒精处理30s，无菌水冲洗，次氯酸钠处理3-5min无菌水清洗。条件2：提供营养——人工配制培养基外植体能发育为完整植株需要哪些条件呢？植物组织培养常用的培养基配方课后查阅更多资料，

了解各组分作用。？添加蔗糖：作为能源物质；参与维持渗透压；影响分化的方向。任务1：设计菊花组织培养的技术流程图接种外植体愈伤组织丛状芽完整植株移栽成活脱分化再分化发芽再分化生根酒精处理30s，无菌水冲洗，次氯酸钠处理3-5min无菌水清洗。人工配制培养基（MS）？？条件3：一定的激素外植体能发育为完整植株需要哪些条件呢？在组织培养体系的建立过程中，植物激素种类和浓度的使用将直接影响培养效果。培养基中生长素与细胞分裂素的比值对离体器官的调控起关键作用。实际操作中要不断调试二者的浓度比。生长素细胞分裂素高细胞分裂素/低生长素产生不定芽细胞分裂素与生长素比例适宜产生愈伤组织高生长素/低细胞分裂素产生不定根一般情况，生长素与细胞分裂素的浓度：比值大有利于不定根分化，

比值小有利于不定芽的分化。资料：中科院植物所研究人员发现，bZIP-LBD复合体是控制愈伤形成中体细胞重编程的关键因子，建立了植物再生体系中生长素信号和细胞全能性获得的分子联系。思考：课堂小测第6题任务1：设计菊花组织培养的技术流程图接种外植体愈伤组织丛状芽完整植株移栽成活脱分化再分化发芽再分化生根酒精处理30s，无菌水冲洗，次氯酸钠处理3-5min无菌水清洗。人工配制培养基（MS）高细胞分裂素/低生长素高生长素/低细胞分裂素菊花：MS+1mg/L6-BA+0.1mg/LNAA的激素浓度配比是愈伤分化和芽诱导最适；1/2MS+0.1mg/LNAA对根的诱导效果最好。+一定比例的植物激素序号姓名分组组长成家乐A组1吴其优A组2刘盛元A组3麻乐瑶A组4张昊轩A组5潘楉彤A组6权威A组7崔济源A组8李泽沛A组9杨裕暄A组10车天睿A组序号姓名分组组长宋卓恒B组1李佳宸B组2赵泽印B组3李昊齐B组4贾如B组5周宇欣B组6李佳树B组7安阳B组8陈星子嘉B组9陈悦宁B组10石映桐B组任务2：实践菊花组织培养A组B组任务