二氨基苯并咪唑 STING 激动剂可预防 SARS-CoV-2 感染

二氨基苯并咪噗STING激动剂可预防SARS-CoV-2感染

抽象的

冠状病毒是一类RNA病毒，可导致人类和其他动物的上呼

吸道和下呼吸道急性和慢性疾病。严重急性呼吸综合征冠

状病毒2（SARS-CoV-2）是一种最近出现的冠状病毒，已

导致全球大流行，导致严重的呼吸系统疾病，称为2019

年冠状病毒病（C0VID-19）,在全球范围内具有很高的发病

率和死亡率。在全球范围内推广疫苗计划的同时、迫切需

要开发抗病毒疗法。在这里，我们描述了一种二氨基苯并

咪噗化合物diABZI-4,它可以激活干扰素基因（STING）

的刺激物，并且在限制SARS-CoV-2在细胞和动物中的复

制方面非常有效°diABZI-4抑制肺上皮细胞中的SARS-

CoV-2复制。在病毒感染之前甚至之后鼻内施用diABZI-4

可以完全保护感染SARS-CoV-2的K18-ACE2转基因小鼠

免受严重呼吸道疾病的侵害。diABZI-4的鼻内给药诱导了

STING的快速短暂激活，导致肺中短暂的促炎细胞因子产

生和淋巴细胞激活，与抑制病毒复制有关。我们的研究支

持使用diABZI-4作为宿主定向疗法，可动员抗病毒防御

来治疗和预防C0VTD-19n导致肺中短暂的促炎细胞因子产

生和淋巴细胞活化，与抑制病毒复制有关。我们的研究支

持使用diABZIT作为宿主定向疗法，可动员抗病毒防御

来治疗和预防C0VID-19o导致肺中短暂的促炎细胞因子产

生和淋巴细胞活化，与抑制病毒复制有关。我们的研究支

持使用diABZl-4作为宿主定向疗法，可动员抗病毒防御

来治疗和预防C0VID-19o

介绍

截至2021年1月，最近出现的SARS-CoV-2已导致全球

超过200万人死亡和超过1亿人感染（/）。SARS-

CoV-2是庖族笳毒科病毒家族的成员。SARS-CoV-2的呼吸

道感染可导致无症状、轻度或严重形式的疾病，称为2019

年冠状病毒病（COVID-19）o更严重的C0VID-19病例会因

急性呼吸窘迫综合征和肺泡腔损伤而导致死亡（N）。

目前，针对C0VIDT9患者的治疗选择很少。抗病毒RNA

依赖性聚合酶抑制剂瑞德西韦可缩短C0VID-19的住院时

间和死亡时间。o此外，类固醇地塞米松也已被批准

用于重症C0VID-19（4）o迄今为止，已经开发和推出

了许多有效的疫苗（£,6）o尽管取得了这些进

展，但仍需要额外的抗病毒疗法来治疗未来的地方性感

染。目前正在进行一项全球努力，以识别和开发以前未知

的抗病毒和抗炎疗法，以减少与C0VID-19相关的住院和

死亡。

干扰素(IFN)基因(STING)的内质网驻留衔接蛋白刺激

物是细胞溶质DNA检测后被激活的关键信号分子。环状鸟

昔5,-单磷酸-腺苜5'-单磷酸(cGAMP)合酶(cGAS)是

细胞溶质DNA的先天免疫传感器。在DNA结合后，cGAS

将腺首5'-三磷酸和鸟背5'-三磷酸转化为环状二核甘酸

cGAMP,进而结合并激活STING(7)oSTING的构象变

化导致STING的C端磷酸化；自噬、核因子KB(NF-

KB)和IFN调节因子3(IRF3)的二聚化、寡聚化和随

后的激活；和促炎细胞因子和I型干扰素的转录

{8-10).STING的激活可引发有效的抗肿瘤反

应，在肿瘤学中单独使用STING激动剂或与检查点阻断联

合使用是一个新兴的治疗领域(11-13).最近的一项研

究确定了一类以前未知的具有全身体内活性的STING激动

剂。基于二氨基苯并咪嗖的化合物是有效的特异性STING

激活剂，与传统的环状二核甘酸STING激动剂相比，具有

更高的稳定性、组织渗透性和效力。J4)o尽管据报道

STING激动剂的治疗应用可用于肿瘤学，但STING激动剂

的抗病毒潜力仍未得到充分探索。鉴于diABZI化合物诱

导的有效I型IFN反应，我们假设STING的药理学激活

可能引发对SARS-CoV-2感染的保护。

结果

diABZI-4激活STING

为了评估diABZI化合物的抗病毒特性，我们使用了以前

未表征的diABZI化合物diABZI-4（图1A和补充方

法）。与先前报道的diABZI-3（14）相比，diABZI-4

具有更有利的体内研究溶解度曲线。diABZI-4诱导STING

的寡聚化（图IB）；IFNB1、CXCL10.72和〃6的转录

（图1,C至F）；以及原代人CD14+中IFN-8（空

氏）和肿瘤坏死因子-Q（TNF-a）（图1H）的分泌单核

细胞。同样，diABZI-4在鼠细胞中有效激活STINGo用

diABZI-4处理骨髓来源的巨噬细胞（BMDM）导致STING

的寡聚化（图SIA）；IRF3、TANK结合激酶1（TBK1）和

P65的磷酸化；和自噬（LC3转化）（图SIB）o用

diABZI-4治疗BMDM还诱导了IFN-B、CXCL10、TNF-a

和白细胞介素6（IL-6）的表达（图SI,C至F）和分泌

（图SI,G至J））o通过腹膜内注射体内给予diABZI-

4也诱导了IFN-3的产生（图H）o

(

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Time(Days)Time(Days)

图ldiABZI-4促进有效的STING激活和HSE保护。

(A)diABZL4的结构。(B)用0.1gMdiABZL4处理指定

时间的CD14+人单核细胞中STING二聚化的天然免疫印

迹。(C到F)用0.1pMdiABZI-4处理的CD14+人单核细

胞中IFN-B(C)>TNF-a(D)、CXCL10(E)和IL-6(F)

mRNA表达的QPCR分析指示的时间。用0.1gM

diABZI-4处理指定时间的CD14+人单核细胞中的IFN-P

(G)和TNF-a(H)ELISAo(I后3小时野生型(WT)

小鼠的血清IFN-P水平。)腹腔注射diABZl-4(1mg/kg;

n=10)或PBSn=3)。(J至I」M)WT(几=8)和cGAS-

/_(n=7到8)小鼠的体重减轻(J)、存活率(K)、脑积水

(L)和神经症状评分2x105PFU的HSV-1McKrae与载

体对照或diABZI-4(0.5mg/kg)的1小时眶后预处理。

(N)来自WT和cGAS的脑匀浆的斑块测定/感染HSV-

1,有或没有1小时的眶后diABZI-4预处理(0.5

mg/kg)o(C)至(H)是来自三个独立实验的汇总数据；误

差条显示平均值±SEM。(B)代表性实验。⑴数据点表示单

个小鼠。(J至UM)数据点表示每组的平均值±SD。**P<

0.01,***P<0.001,和0.0001[(C到F)单因素

方差分析；(G到I)学生f检验；(J,L,M,N)双向方差分

析;(K)Mantel-CoxJ。

diABZI-4预防单纯疱疹脑炎(HSE)

为了评估全身给药diABZI-4的潜在抗病毒作用，我们首

先在HSE小鼠模型中测试了diABZI-4的功效。cGAS和

STING缺陷小鼠对急性单纯疱疹病毒(HSV)-1感染高度敏

感(丝)。cGAS和STING缺陷小鼠在角膜感染HSV-1

神经侵袭性毒株后均表现出体重减轻、脑积水和存活率降

低（图S2,A至F）。因此，我们假设diABZI-4可以通

过激活STING来补偿cGAS缺乏并赋予对HSE的保护。

用通过眶后注射递送的单剂量diABZI-4治疗cGAS/小鼠导

致对崛的完全保护（图1,j至M）。cGAS/接受diABZI-4的

小鼠免受HSV-1诱导的体重减轻（凰M）、致死率（鹭

出）、脑积水（图1L）和神经系统疾病症状（图1M）的

影响。此外，接受diABZI-4的cGAS/小鼠的脑组织中

HSV-1滴度显着降低（图IN）o

diABZI-4抑制SARS-CoV-2复制

在这些发现的基础上，我们接下来评估了diABZI-4是否

也可以提供针对RNA病毒的保护。我们专注于人类冠状病

毒0C43（HCoV-0C43）和SARS-CoV-2oSARS-CoV-2通过

ACE2受体感染肺上皮细胞（"）。因此，我们首先监

测了用diABZI-4处理的表达ACE2的A549细胞中的

STING活化，这导致STING的时间依赖性二聚化（图—

2A）>IRF3的磷酸化（图2B）和IFNB1的表达（图.

①）和淅（图2D）oACE2-A549细胞对HCoV-0C43

和SARS-CoV-2感染高度敏感。与载体处理的细胞相

比，在感染HCoV-0C43之前用diABZI-4预处理ACE2-

A549细胞可抑制HCoV-0C43复制（图2,E和F）。同

样，与载体处理的细胞相比，用diABZI-4预处理可抑制

SARS-CoV-2基因在感染细胞中的表达和复制(图2,G至

K)o鉴于diABZI-4对hACE2-A549细胞中SARS-CoV-2

复制的强大影响，我们接下来评估了它在更具生理相关性

的肺泡细胞系统中对SARS-CoV-2的影响。胚胎干细胞衍

生的诱导肺泡II型(iAT2)细胞在气液界面(ALI)处以

三维(3D)培养。用diABZI-4预处理iAT2细胞可抑制

SARS-CoV-2复制(图2,L和M)。另外两项研究也表明

diABZI分子会损害SARS-CoV-2在肺上皮细胞中的复制

(17,18)o

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diABZI-4

图2diABZI-4抑制SARS-CoV-2在肺上皮细胞中的复

制。

(A)用0.1|iMdiABZI-4处理指定时间的ACE-A549细

胞STING二聚化的天然免疫印迹。(B)用0.1

diABZI-4处理指定时间的ACE2-A549细胞的p-IRF3、

STING、ACE2和隹肌动蛋白的免疫印迹分析。(C和D)

用0.1处4diABZI-4处理1.5小时的ACE2-A549细胞中

IFN-p(C)和TNF-a(D)mRNA表达的QPCR分析。(E)

使用或不使用0.1pMdiABZI-4预处理的HCoV-OC430.1

MOI感染24小时的ACE2-A549细胞中的HCoV-OC43-

NmRNA的QPCR分析。(F)对如(E)中处理48小时

的ACE2-A549细胞的条件培养基进行TCID50测定。(G

到I)QPCR分析SARS-CoV-2-N(G)、Nsp14(H)和

ORF1(I)来自用SARS-CoV-20.1MOI感染24小时的

ACE2-A549细胞的mRNA,有或没有0.1预处理)1M

diABZI-4o(J)对如(I)中处理的ACE2-A549细胞的条

件培养基进行基因组拷贝数分析。(K)用SARS-CoV-20.1

MOI感染ACE2-A549细胞的条件培养基的TCID5。测定48

小时，有或没有0.1pMdiABZI-4预处理。(L)用SARS-CoV-20.1MOI在

有或没有0.1|iMdiABZI-4预处理的情况下对ACE2-

hESC-iAT2细胞进行72小时的基因组拷贝数分析。咪)

对感染SARS-CoV-20.1MOI72小时的hESC-iAT2细胞

中的SARS-CoV-2刺突、pro-SP-C和NKX2.1进行免疫

荧光分析，有或没有0.1|1MdiABZI-4预处理(A和B)o

（M）代表性实验；（C到L）汇集了来自三到五个独立实

验的数据。*P<0.05,0.001,和

0.0001o（E到K）双向方差分析。误差条显示平均值

±SEMo

器中打开

diABZL4可预防SARS-CoV-2感染

鉴于diABZI-4强烈抑制SARS-CoV-2在肺上皮细胞中的

复制，我们接下来确定diABZI-4是否也可以在体内预防

SARS-CoV-2感染。SARS-CoV-2不能与鼠ACE2结合；因

此，无法在传统的实验室小鼠品系中建立SARS-CoV-2感

染（16,19）oK18-hACE2转基因小鼠（K18-ACE2）

在上皮细胞角蛋白18（K18）启动子的控制下表达人ACE2

（20）o鼻内接种SARS-CoV-2后，K18-ACE2小鼠在感

染4天后体重开始下降，并在感染后7至8天死亡

（21,2）。因此，我们使用K18-ACE2小鼠模型来

确定diABZI-4对体内SARS-CoV-2感染的影响。用

SARS-CoV-2鼻内接种K18-ACE2小鼠在感染后8天导致

体重减轻和致死率。然而，给予单次鼻内剂量diABZI-4

的K18-ACE2小鼠免受SARS-CoV-2诱导的体重减轻（区

3A）和致死性（图3B）o在感染后12小时给药时，

diABZI-4还可以保护小鼠免受SARS-CoV-2引起的体重减

轻（图3C）和致死率（图3D）。通过腹腔注射给予相同

剂量的diABZI-4未能保护K18-ACE2小鼠免受SARS-

CoV-2感染（图2E和F）,表明diABZI-4直接递送至

粘膜表面是其保护作用所必需的。diABZI-4和diABZI-3

对SARS-CoV-2引起的体重减轻（图S3A）和致死率（图

S3B）具有相当的保护作用。要完全防止SARS-CoV-2引起

的体重减轻（图S3C）和致死率（图S3D）,需要0.25

mg/kg的浓度。鉴于这些显着影响，我们接下来评估了

diABZI-4对肺部病毒载量的影响。用diABZI-4预处理

K18-ACE2小鼠导致许多SARS-CoV-2基因的表达降低，包

括N蛋白（图3G）、Nspl4（图3H）和开放阅读框1

（0RF1）（图31）在感染后48小时收集的肺组织中。与

用载体对照处理的K18-ACE2小鼠的肺组织相比，用

diABZI-4预处理还导致SARS-CoV-2的基因组拷贝数减少

（图3J）oNanoString分析还显示SARS-CoV-2RNA转

录物显着减少，这与diABZI-4处理的K18-ACE2小鼠肺

组织中许多炎症基因的表达减少相关，表明病毒清除速度

加快。图3K和图。S4A）O对感染SARS-CoV-2的K18-

ACE2小鼠的苏木精和伊红（H&E）染色肺切片的分析显示

感染5天后出现严重的肺部炎症。载体处理的SARS-CoV-

2感染的K18-ACE2小鼠在肺部大面积显示免疫细胞浸

润，在相邻肺泡空间局部积聚和肺泡壁严重增厚，而用

diABZI-4预处理的小鼠受到保护这些影响（图3K）o

diABZI-4还可以防止甲型流感病毒（IAV）引起的致死率

（图S3E）和IAV在肺组织中的复制（图S3F）o因此,

diABZI-4对呼吸道RNA病毒感染具有广泛的保护作用。

3-hrINpre-treatment12hpost-infectionIN3hIPpre-trealment

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图3diABZI-4保护hACE2转基因小鼠免受SARS-CoV-2

感染。

经鼻内(IN)diABZI-4(0.5mg)预处理3小时，鼻内感染

SARS-CoV-2(2.5xIO,PFU/小鼠)的K18-ACE2转基因小

鼠的存活率(A)和体重减轻(B)/kg)(n=13)或车辆控

制(M=ll)o(C和D)K18・ACE2+/-转基因小鼠鼻内感染

SARS-CoV-2(2.5xIO,PFU/小鼠)然后用diABZI-4鼻内

治疗的存活率(C)和体重减轻(D)(0.5mg/kg)(n=5)或

载体对照(〃=5)感染后12小时。(E和F)用SARS-

CoV-2(2.5x104PFU//bB)经3小时腹膜内(IP)注射

diABZI-4(0.5mg/kg)(H=4)或载体对照(〃=4)。(GtoJ)

SARS-CoV感染K18-ACE2转基因小鼠肺组织中SARS-

CoV-2-N(G)>Nspl4(H)、ORF1(I)和基因组拷贝数(J)的

QPCR分析-2(2.5x104PFU/小鼠)48小时,用diABZI-4

(0.5mg/kg)(n=4)或载体对照(〃=4)鼻内预处理3小

时。(K)从用diABZI-4(0.5mg/kg)或载体对照鼻内处理的

感染SARS-CoV-2的K18-ACE2小鼠中提取的RNA中

NanoStringSARS-CoV-2RNA转录物的热图。数据表示为

diABZI-4治疗小鼠中计算的倍数读数超过未治疗小鼠的读

数(每组至3)。FC,折叠变化。(L)用SARS-

CoV・2(2.5x104PFU/小鼠)经3小时腹膜内注射diABZI-

4(0.5mg/kg)鼻内感染K18-ACE2转基因小鼠的H&E染

色肺切片的代表性图像）（〃=4）或车辆控制（n=4）5天。

***0<0.0001和0.00001o（A、C和E）

Mantel-Cox生存分析。误差条显示平均值土SEM。

器

diABZL4促进肺中的骨髓和淋巴细胞活化

我们接下来试图研究diABZI-4介导其保护作用的机制。

diABZI-4的鼻内给药导致肺中STING的有效寡聚化（”

4A）odiABZI-4还诱导了大量基因（图S4B）的后续表

达，包括IFN刺激的基因，例如CxcllO（图4B）、Ifitl

（图4C）、Isgl5（图41））、Mxl（图.4E）和

Statl（图4F）以ST1NG依赖的方式。先前的报告表

明，STING激活引发I型IFN反应，刺激肿瘤驻留树突

状细胞中的IFN受体信号传导，并导致抗肿瘤CD8-T

细胞和自然杀伤（NK）细胞反应（劣-劣）。此

外,CD8+T细胞对于基于diABZI的STING激动剂抑

制肿瘤生长是必不可少的（〃）。因此，我们接下来分

析了diABZI-4鼻内给药后肺中的免疫细胞（图4,G到

L,和图S5,A到C）o除了中性粒细胞（图4H和图

S5A）和B细胞（图41和图。S5B）,在用diABZI-4鼻内

处理后未观察到总细胞数的显着变化（图4,H至J,和

图S5,A和B）。diABZI-4处理促进了骨髓细胞、Y3

T细胞和NK细胞的活化，CD69+细胞的显着增加证明了

这一点（图4,J和K,以及图S6,A和B）。diABZI-4

没有改变中央记忆和效应T细胞的频率（图4L和图。

S6C）O尽管diABZI-4在肺中引发了抗病毒、促炎环境，

但在diABZI-4鼻内给药后1、2和5天对肺组织的病理

学评估显示肺实质没有明显的病理变化。这些数据表明，

单剂量策略足以消除病毒感染，而不会对肺组织造成任何

病理损伤。

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图4diABZI-4以IFN依赖性方式介导保护。

(A)WT和Sting/小鼠肺组织中STING二聚化的天然免

疫印迹，给予diABZI-4(0.5mg/kg)3小时。(B至F)用

diABZL4(0.5mg/kg)鼻内处理3小时的WT和Sting/小

鼠肺组织中Cxc〃0、IfitKIsgl5.MxlStallmRNA的

QPCR分析。DC,树突状细胞。MFI,平均荧光强度。(G

到L)用diABZI-4(0.5mg/kg)处理12小时的WT小鼠

的PBS灌注、胶原酶消化的肺组织的免疫细胞群的流式细

胞术分析(〃=5到10每组)。门控策略如图所示。S5o

(M和N)用diABZI-4(0.5mg/kg)(/?=3)或载体对照

(〃=3)鼻内处理的小鼠的H&E染色肺切片的代表性图像

(M)和病理学评估(N)l、2和5天。(O和P)经鼻内感

染SARS・CoV・2(2.5xl()4pFu/小鼠)的K18-ACE2转基因

小鼠的存活率(N)和体重减轻(O)用150ggIgGl(n=4)

鼻内预处理,IgGl+diABZI-4(〃=5),或抗IFNAR+

diABZI-4(〃=5)。误差条显示平均值土SEM。数据点表示单

个小鼠。*P<0.05,**P<0.01,和0.001o(B到

F)学生/检验、(G到L和O)双向方差分析和(P)

Mantel-Cox生存分析。

diABZL4通过IFN依赖性和IFN非依赖性机制防止

SARS-CoV-2感染

I型干扰素在限制病毒感染中起重要作用。因此，我们接下

来评估了I型IFN的诱导是否介导diABZI-4对SARS-

CoV-2感染的保护作用。用抗IFN-a/p受体（IFNAR）

进行鼻内治疗可抑制diABZI-4诱导的IFN刺激基因

（ISG）表达（图S7、A和B）o抗IFNAR中和抗体部分

但不完全阻断diABZI-4在感染SARS-CoV-2的K18-ACE2

小鼠中的保护作用（图4,0和P）o此外，与单剂鼻内

通用IFN或多聚肌昔：多胞甘酸（poly（I:C））相比，单

次鼻内给药diABZI-4对SARS-CoV-2感染具有更高水平

的保护（图S7,C到D）。UniversalIFN是一种人类

IFN-aA/D杂合体，具有跨多个物种的活性。这些数据表

明，STING下游的IFN依赖性和IFN非依赖性均介导

diABZI-4在体内控制SARS-CoV-2感染中的保护作用。

讨论

我们已经确定了一种对治疗SARS-CoV-2感染有效的宿主

导向疗法。在SARS-CoV-2感染期间，肺部STING的药理

学激活通过I型IFN、NF-KB驱动的细胞因子产生和淋

巴细胞激活引起快速的短期抗病毒反应，从而抑制病毒复

制并预防严重的呼吸道疾病疾病。与重组IFN等其他免疫

疗法相比，使用diABZI-4具有几个优越的优势，包括成

本、增强的稳定性、室温储存以及低剂量治疗的疗效潜

力。

SARS-CoV-2是一种呼吸道病原体，可以感染上呼吸道和下

呼吸道的ACE2阳性细胞。II型肺泡细胞很容易被SARS-

CoV-2感染，约占肺泡细胞的15%oII型肺泡细胞对于产

生表面活性蛋白和支持上皮屏障完整性、先天免疫反应和

肺损伤后的气道再生至关重要（劣）。iAT2-ALl3D培

养物模拟人类气道并反映宿主对SARS-CoV-2的转录反应

（27）odiABZI-4显示出对iAT2细胞中SARS-CoV-2

复制的强烈抑制作用,并抑制SARS-CoV-2诱导的SP2阳

性肺泡细胞的细胞死亡。因此，预计在人肺中使用

diABZI-4可有效对抗SARS-CoV-2o

在体内，diABZI-4在感染前后对SARS-CoV-2有效。在

SARS-CoV-2感染后12小时给药的diABZI-4提供了与作

为预处理给药的diABZI-4相当的保护作用。用SARS-

CoV-2感染hACE2转基因小鼠会在6到8天的时间内导

致体重迅速减轻和发病。因此，感染和病毒载量峰值之间

的相对时间非常短，这为使用diABZI-4进行治疗提供了

限制。其他免疫疗法（如鼻内IFN或聚（I:C））的使用

也受到SARS-CoV-2感染的快速动力学的限制。在SARS-

CoV-2仓鼠模型中，多剂量通用IFN或聚（I:C）的治疗

效用也仅限于感染后24小时（丝）。尽管I型IFN

在启动对SARS-CoV-2的适应性免疫反应中发挥重要作

用，但仅靠它们不足以控制SARS-CoV-2感染

（29,30）o然而，人类研究中的其他报告已证明I

型IFN在预防严重C0VID-19中的重要作用（&）。

为了支持这一点，一些临床试验报告了在C0VID-19早期

使用IFN的积极结果（段）。STING激活触发I型IFN

产生，其介导CD8'T细胞反应的激活。然而，除了1

型IFN反应外，NF-KB和非经典自噬也在STING下游被

诱导（口）。最近的研究已经确定了STING在控制DNA

病毒感染和抗肿瘤免疫中的IFN非依赖性作用

（33~至）。除了SARS-CoV-2之外，diABZI-4还

可以防止IAV感染。因此，由diAZBI-4激活的宿主导向

免疫反应可能对其他呼吸道病原体具有广泛的治疗应用。

与其他免疫疗法一样，未来的工作将需要确定在人体中使

用diABZI-4的适当剂量和递送方式。我们的研究提供了

diABZI-4在预防SARS-CoV-2复制和治疗C0VID-19中的

分子和细胞特征，并强调了其作为C0VID-19治疗的潜在

用途及其在治疗由人类呼吸道病原体。

材料和方法

学习规划

本研究的目的是研究基于diABZI的STING激动剂的抗病

毒特性。我们研究了diABZI-4对培养的肺上皮细胞中人

类冠状病毒感染的影响。使用人类ACE2转基因小鼠模

型，我们确定了STING触发的免疫反应是否可以用作

SARS-CoV-2感染的抗病毒治疗。每个实验中使用的样本量

在图例中有详细说明。

生物安全

在研究开始前，所有研究方案均由马萨诸塞大学医学院环

境健康与安全和机构审查委员会批准、审查和批准。所有

SARS-CoV-2实验均由配备动力空气净化呼吸器的人员在生

物安全3级实验室进行。

老鼠

所有动物实验均由马萨诸塞大学医学院的机构动物护理使

用委员会批准。动物被饲养在特定的无病原体环境中。半

合子K18-hACE2C57BL/6J小鼠［品系:2B6.Cg-Tg(K18-

ACE2)2Prlmn/JJ获自杰克逊实验室。如前所述使用cGAS

敲除(K0)小鼠和STINGKO小鼠(36)。将动物分组

饲养并喂食标准食物。使用的样本量与其他类似的已发表

研究一致。

diABZL4治疗

用异氟醛麻醉8至12周龄的雄性和雌性小鼠，并在指定

时间内鼻内给予diABZI-4(0.5mg/kg)o

SARS-CoV-2的培养

VeroE6细胞的T175薄片用USA-WA1/2020(NR-5228L

BEIResources)以0.1的感染复数(MOI)感染48小

时。将上清液以450g离心10分钟，分装并储存在-

80°Co在VeroE6细胞中通过中值组织培养感染剂量

(TC1D50)测定确定病毒滴度。

HCoV-OC43的培养

VeroE6细胞的T175薄片用Hcov-0C43(NR-52281,BEI

Resources)以0.1的M0I感染48小时。将上清液以

450g离心10分钟，分装并储存在-80°Co在VeroE6

细胞中通过TCID5。测定确定病毒滴度。

SARS-CoV-2感染

用级胺酮COOmgkgT体重)和甲苯曝嗪(]0小8kg7体重)腹摸

内注射麻醉8至12周龄的雄性和雌性小鼠。然后用Z5X口斑

块形成单位(PFU)的SARS-CoV-2鼻内感染小鼠。每天监

测小鼠的体重减轻和存活率。

PR8——甲型流感感染

用异氟酸麻醉8至12周龄的雄性和雌性小鼠，并用400

PFU的IAV/PR/8/34(H1N1)鼻内感染。每天监测小鼠的

体重减轻和存活率。

HSV-1感染

用氯胺酮a。。mgkgT体重)和甲苯睡嗪(10mg