（正式版）DB22∕T 396.10-2017 《保健用品毒理学评价程序与检验方法 第10部分：致畸试验》

DB22DB22/T396.10—2017保健用品毒理学评价程序与检验方法ToxicologicalevaluationproceduresandtestmethodsforhealthcareproductsPart10:Teratogenicitytest吉林省质量技术监督局发布I1警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关常用试验动物为大鼠、小鼠和家兔。传统致畸应选用健康性成熟(90d～次试验可设一阳性对照组。每组至少12只孕鼠。常用阳性对照物有敌枯双（0.5mg/kg～1.0mg/kg体重）、五氯酚钠阿斯匹林(30mg/kg体重)及22.5.1“受孕动物”的检查和给受试物时间性成熟雌、雄大鼠按1:1(或2:1)同笼后，每日早晨观察阴栓(或阴道涂片),查出阴栓(或精子),认为该鼠以交配，当日作为“受孕”零天。如果5d内未交配，应更换雄鼠。检出的“孕鼠”随机分到各组，并称重和编号，在受孕的第7d～16d,每天经皮给予受试物。受孕的0d、7d、12d、16d、20d称体重，并计算给受试物的量。动物交配期室温在20℃~25℃为宜，环境安静，必要时给予增加麦芽和蛋糕等营养物质。2.5.2孕鼠处死和检查大鼠于妊娠20d,小鼠第18d,兔第29d处死。大鼠用2g/100mL硫喷妥钠1mL/只～1.5mL/只腹腔注射，麻醉或直接断头。剖腹取出子宫称重，记录并检查胚胎、着床数、早期吸收胎，迟死胎及活胎2.5.3活胎鼠检查逐一记录胎仔体重、体长、检查胎鼠外观有无异常，如头部有无脑膨出、露脑、小头、小耳、小眼、无眼和睁眼、兔唇、下颌裂、躯干部有无腹壁裂、脐疝、脊柱弯曲，四肢有无小肢、短肢、并趾、无趾等，尾部有无短尾、卷尾、无尾，肛门有无闭锁。2.5.4胎鼠骨标本的制作与检查将每窝1/2的活胎(奇数或偶数)放入95%(V/V)乙醇中固定2周～3周，取出胎仔(或可去皮、去内脏及脂肪)流水冲洗数分钟后放入1g/100ml～2g/100m1的氢氧化钾溶液内(至少5倍于胎仔体积)8h～72h,透明后放入茜素红-S应用液中染色6h～48h,并轻摇1次/d~2次/d,至头骨染红为宜。再放入透明液A中1d～2d,放入透明液B中2d～3d,待骨骼染红而软组织基本褪色，将标本放入小平皿中，用透射光源，在体视显微镜下作整体观察，然后逐步检查骨骼。测量囟门大小、矢状缝的宽度、头顶间骨及后头骨缺损情况，然后检查胸骨的数目，缺失或融合(胸骨为6个，骨化不全时首先缺第5胸骨、次为缺第2胸骨)。肋骨通常12对～13对，常见畸形有融合肋、分叉肋、波状肋、短肋、多肋、缺肋、肋骨中断。脊柱发育和椎体数目(颈椎7个，胸椎12个~13个，腰椎5个～6个，底椎4个，尾椎3个～5个)有无融合、纵裂等最后检查四肢骨。2.5.5胎鼠内脏检查每窝的1/2胎鼠放人Bouins液中，固定两周后作内脏检查。先用自来水冲去固定液，将鼠仰放在石蜡板上，剪去四肢和尾，用刀片从头部到尾部逐段横切或纵切。按不同部位的断面观察器官的大小、形状和相对位置。正常切面见图1。图1正常切面图3），各种率的检查用X2检验，孕鼠增重用方差分析或非参数统计，胎鼠身长、体重、窝平均活胎数用T强致畸。为表示有害物质在保健用品中存在时人体受害机率，可计算致畸危害指数，如指数大于300说k——雌鼠LD50；km2——最大可能摄入量，g。k....