流式细胞检测技术工程师考试试卷及答案

流式细胞检测技术工程师考试试卷及答案一、填空题（共10题，每题1分）1.流式细胞仪中，检测细胞大小的散射光参数是______。2.发射峰约525nm的常用荧光染料是______。3.裂解红细胞常用的试剂是______。4.流式细胞仪的核心光源是______。5.反映细胞内结构复杂性的散射光参数是______。6.PE荧光染料的发射峰波长约为______nm。7.解决荧光信号重叠的关键步骤是______。8.流式分选时液滴偏转的原理是______。9.细胞固定常用的试剂是______（体积分数）。10.排除死细胞的常用染料是______（举1例）。二、单项选择题（共10题，每题2分）1.与细胞大小正相关的散射光是？A.FSCB.SSCC.FL1D.FL22.FITC的激发波长约为？A.488nmB.561nmC.633nmD.405nm3.红细胞裂解后下一步通常是？A.直接上机B.洗涤C.固定D.染色4.不能穿透活细胞的染料是？A.FITCB.PEC.PID.APC5.使细胞单行通过检测区的部件是？A.激光器B.流动室C.检测器D.分选模块6.荧光补偿的目的是？A.增强信号B.减少通道重叠C.提高分选速度D.去背景7.APC的激发波长是？A.488nmB.633nmC.561nmD.405nm8.细胞内细胞因子检测需在固定后进行？A.红细胞裂解B.透膜C.染色D.洗涤9.液滴带电的前提是？A.细胞通过激光束B.压力稳定C.分选电压开启D.浓度合适10.验证荧光线性的质控样本是？A.空白微球B.荧光校准微球C.同型对照D.活细胞三、多项选择题（共10题，每题2分，多选/少选不得分）1.流式细胞仪主要组成包括？A.流动室B.激光器C.检测器D.分选模块E.计算机2.荧光染料的特性有？A.激发波长固定B.发射波长固定C.荧光溢出D.抗原结合E.激光激发3.样本制备应避免的操作是？A.过度离心B.染色不足C.固定后立即透膜D.红细胞未裂解E.浓度过高4.排除死细胞的方法有？A.PI染色B.7-AAD染色C.设门SSC高D.设门FSC低E.AnnexinV5.常用设门策略包括？A.矩形门B.多边形门C.椭圆门D.自动门E.时间门6.488nm激发的染料有？A.FITCB.PEC.APCD.PerCPE.7-AAD7.流式分选的应用有？A.细胞亚群分离B.单细胞测序C.细胞功能分析D.病原体检测E.纯度验证8.仪器质控项目包括？A.激光校准B.补偿验证C.分选纯度D.流动室压力E.样本浓度9.细胞内染色关键步骤有？A.透膜B.固定C.染色D.洗涤E.红细胞裂解10.与细胞散射光相关的特性是？A.FSC-大小B.SSC-内颗粒C.FL1-荧光D.FL2-荧光E.时间-通过时间四、判断题（共10题，每题2分，对√错×）1.FSC越强，细胞体积越大。（）2.FITC发射峰比PE短。（）3.荧光补偿无需空白对照。（）4.带电液滴会被收集到指定试管。（）5.红细胞裂解液不影响白细胞抗原。（）6.7-AAD仅标记死细胞。（）7.检测器只检测荧光信号。（）8.固定后可长期保存不影响染色。（）9.时间门可排除气泡/细胞团。（）10.APC激发波长488nm。（）五、简答题（共4题，每题5分）1.简述荧光补偿的原理。2.红细胞裂解的注意事项有哪些？3.流式流动室的作用是什么？4.如何用流式排除死细胞？六、讨论题（共2题，每题5分）1.影响流式分选纯度的因素及优化方法？2.细胞因子流式检测的样本制备关键步骤及注意事项？---答案部分一、填空题答案1.前向散射光（FSC）2.FITC3.氯化铵溶液（或红细胞裂解液）4.激光器5.侧向散射光（SSC）6.5757.荧光补偿8.静电偏转9.4%多聚甲醛10.PI（或7-AAD、AnnexinV）二、单项选择题答案1.A2.A3.B4.C5.B6.B7.B8.B9.A10.B三、多项选择题答案1.ABCDE2.ABCE3.ABDE4.ABE5.ABCE6.ABDE7.ABDE8.ABCD9.ABCD10.AB四、判断题答案1.√2.√3.×4.√5.×6.√7.×8.×9.√10.×五、简答题答案1.荧光补偿原理：部分荧光染料发射光谱重叠（如FITC信号串入PE通道）。通过单一标记对照（仅FITC）测各通道信号，计算溢出系数（FITC在PE通道的占比）。分析时，从目标通道总信号中减去其他通道的溢出信号，得到准确单一信号，避免假阳性。2.红细胞裂解注意事项：①选氯化铵裂解液（避免损伤白细胞）；②控制时间5-10分钟（不超15分钟）；③裂解后用PBS洗涤2-3次；④调整浓度1×10⁶-1×10⁷/mL；⑤离心转速≤1500rpm；⑥内染需先固定再透膜。3.流动室作用：①鞘液包裹样本形成单细胞流；②使细胞单行通过激光检测区（避免重叠）；③维持稳定液流速度（保证信号一致）；④精准控制压力差（防止液流紊乱）。4.死细胞排除方法：①染料法：PI/7-AAD（活细胞不摄取，死细胞阳性，设门排除）；②AnnexinV法：结合死细胞表面PS，联合PI区分活细胞（AnnexinV⁻PI⁻）；③散射光辅助：死细胞FSC低、SSC高，结合染料法更准确。六、讨论题答案1.影响分选纯度的因素及优化：①样本：细胞聚集（过滤）、碎片（充分洗涤）；②仪器：液滴延迟校准（定期用微球调整）、电压稳定；③设门：范围过宽（结合对照设门）；④鞘液/样本：污染（无菌鞘液）、浓度过高（调整至1×10⁶/mL）。优化：分选前过滤、校准延迟、严格设门、新鲜鞘液，分选后验证纯度。2.细胞因子检测样本制备：①刺激：PMA+离子霉素+布雷菲德菌素A（4-